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文档简介

间接免疫荧光法检测血清中抗核抗体是利用荧光标记第二抗体（羊抗人IgG）检测未知抗体（一抗）的方法。以检测人血清抗核抗体（ANA）为例。病人血清中ANA（Ab）能与各种系细胞核成分（Ag）特异性结合，此种结合的Ab（IgG型）能与荧光标记的羊抗人IgG（二抗）结合，在荧光显微镜下，细胞核显示荧光，提示血清中ANA的存在。间接免疫荧光技术原理间接法原理示意图抗原抗体标记抗体光原荧光免疫荧光技术的内容

标本制作荧光抗体染色荧光显微镜检查组织切片：冷冻切片、石蜡切片（最常用）印片：肝、脾等细胞涂片：各种体液、穿刺液、细菌培养物和细胞悬液等标本的类型标本的制作间接法特异性抗体与相应抗原反应，荧光素标记的抗抗体再与第一抗体结合。

间接荧光抗体染色法示意图荧光抗体染色实验步骤小鼠肝细胞印片待测血清（ANA?）荧光标记的羊抗人IgG(二抗）37℃30′荧光显微镜检测洗涤37℃30′洗涤小鼠断颈处死取肝，PBS或NS漂洗，剪取肝横断面印片于玻片上，左右各一处，自然干燥；滴加无水乙醇固定，室温凉干；

左右印片处分别盖上一片小纸片，分别滴加阳性血清和阴性血清各1滴，37℃30′；去除纸片，PBS冲洗1min×3次，吸干水分；

左右印片处分别盖上一片小纸片，并滴加荧光标记羊抗人IgG（二抗）各1滴，37℃30′；

去除纸片，PBS漂洗1min×3次，吸干水分；荧光显微镜镜检。实验步骤阳性：明亮、清晰、圆点状荧光、大小不一。均在肝细胞上。阴性：模糊、黯淡、片状或块状荧光，无细胞形，为非特异性干扰荧光。阳性结果可分为均质型、斑点型(颗粒型）、核膜型（周边型）、核仁型，其中以均质型多见。结果判断①自身抗体检测抗核抗体(均质型)抗核抗体(核膜型)抗核抗体(斑点型)荧光抗体技术的应用制作核抗原片（印片）不宜太厚；

滴加的血清或荧光抗体要充分盖满抗原片；荧光抗体

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