芦丁提取工艺的探讨

芦丁提取工艺的探讨

蝗虫是指豆科植物蝗虫sophorjapontal。槐米含有芦丁达20.0%以上,是芦丁主要原料来源。芦丁是一种黄酮类化合物,其性状为黄色结晶性粉未或无晶形粉未,有苦味,略溶于水,能溶于热水及醇。遇光易变质,宜在阴凉处保存。1色谱、药品和试剂Waters515高效液相色谱仪,Water2487紫外检测器。HS2000色谱数据处理系统,XZ-6A旋转蒸发仪,D101型大孔吸附树脂,购自天津南开大学化工厂;芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所;槐米购自江苏省药材公司;甲醇为色谱纯,水为重蒸水。2方法和结果2.1提取蝗虫米提取物的制备2.1.1槐米材的预处理取槐米药材适量,粉碎使通过3号筛,置不锈钢托盘中,在密闭环境下通入高压高温蒸汽蒸制20min,使其中降解酶快速灭活。2.1.2底烧瓶提取取上述处理好的槐米药材约50g,置1000ml圆底烧瓶中,加无水乙醇水浴回流提取3次,依次为400ml、300ml、300ml,每次1小时。提取液趁热滤过,滤液合并回收乙醇至干,即得芦丁粗提物。2.1.3柱的洗脱和蒸干取上述芦丁粗提物,用少量水转移至预处理的D101型大孔吸附树脂柱中(柱长120cm,内径15cm),先用水200ml洗脱,继用50%乙醇800ml洗脱,收集50%乙醇洗脱液,置水浴上蒸干。残渣依次用10、8、6倍量无水乙醇重结晶,即得。2.2测定了石膏含量2.2.1流动相及流速以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-水-醋酸溶液(37:85:5)为流动相,检测波长为256nm.,流速为1.0ml/min,理论板数按芦丁计应不低于4000。2.2.2对照溶液的制备对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品50mg,置于50ml量瓶中,加入甲醇溶解,定容于50ml,所得浓度1mg/ml,备用。2.2.3超声时滤液的制备精密称取芦丁精提物200mg,置50ml量瓶中,加甲醇45ml超声处理10分钟,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜过滤,作为供试液,备用。2.2.4标准吸收曲线精密吸取对照品1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0μl进样,按色谱条件测定峰面积积分值,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准吸收曲线,并用最小二乘法求回归方程。回归方程为:Y=1468268.4X-222415.2,相关系数为r=0.9995。2.2.5仪器和色谱条件对比精密吸取对照品供试液10μl,按“2.1”项下条件,连续进样5次,测得峰面积,结果RSD=1.16%,说明仪器和色谱条件均具有良好的精密度。2.2.6重线性实验分别取同一供试样品5份,同法制备,按“2.1”项下条件,测定峰面积,RSD=2.07%,结果显示该方法具有较好的重现性。2.2.7进样稳定性计算在室温条件下,将样品按测定方法处理后,分别在2.0,4.0,8.0,12.0,24.0h,进样10μl/次,得峰面积的RSD=1.12%(n=5)。结果表明该溶液在24h内的含量基本保持不变。2.2.8加标回收率试验精密称取已知含量的样品,加芦丁对照品适量,按“2.2”供试品溶液的制备方法操作,测定平均回收率为98.8%,RSD为1.15%(n=5)。2.2.9高效液相色谱法取3批芦丁精提物,按“2.2”所述方法制备供试品溶液,注入高效液相色谱仪,在256nm处测定峰面积,按外标法计算含量,即得。3芦丁提取物的制备我们采用短时高温高压方式,灭活槐米药材中的水解酶,保存了大部分芦丁成份。用无水乙醇回流提取,