结核分支杆菌检验脚本

同学们大家好，欢迎大家来到微生物检验课堂。我是伊宁卫生学校的周晓璇老师,本次课我们一起学习结核分支杆菌。结核分枝杆菌常常被称为是细菌界又丑又懒又作精的细菌，那是为什么呢？让我们一起来探索。结核分枝杆菌为细长直或略弯杆状，有时分枝，有荚膜。革兰染色阳性，但因结核分枝杆菌外侧有较厚的脂质层，故在革兰染色时，不易着色，常采用抗酸染色进行染色，此菌为抗酸菌。结核分枝杆菌为专性需氧菌，最适PH值6.5到6.8，生长非常缓慢，繁殖一代需要18到24小时才能完成，营养要求也高，常采用的培养基为罗氏培养基，在罗氏培养基，培养2到4周后可见乳白色米黄色颗粒结节或菜花状的r型菌落，鉴于结核分枝杆菌生长缓慢，营养要求高，菌落不规则的特点，所以被称为又丑又懒又作精的细菌。同时，结合分枝杆菌的抵抗力，也有它独树一帜的特点，他对75%的乙醇、湿热、紫外线相对敏感，但可以耐受较干燥、强酸、强碱的环境，也可以耐受孔雀绿。微生物检查法：结核病的临床诊断需结合流行病学、临床表现、影像和病理检查结果综合判断，微生物学检查法是确诊依据。根据疾病类型和病灶部位采集标本。如肺结核采取痰液标本，最好取早晨第一次痰液，挑取带血痰或浓痰。肾或膀胱结核采取无菌导尿或取中段尿液，肠结核采取粪便样本，结核性脑膜炎，采取腰椎穿刺或采取脑积液。采集后的标本可直接涂片或离心沉淀、浓缩集菌后再涂片，用抗酸染色法染色镜检，如镜下找到抗酸杆菌，则报告为查到抗酸杆菌，既可能是结核分枝杆菌，也可以是牛分枝杆菌、非结核分枝杆菌。细菌涂片检查法较为简单快速，但灵敏度低。2.分离培养：将待检样品，先置于4%氢氧化钠或3%盐酸培养基处理，再用离心沉淀法去沉淀物接入改良罗氏培养基，培养基所含的孔雀绿可抑制杂菌生长，在37℃环境下培养3-4周，可见菌落生长。根据生长速度和菌落特点可初步判断为结核分枝杆菌。进一步用结核染色法、生化反应和分子诊断技术鉴定菌种。同时，抗结核一线药物的敏感实验也是非常有必要做的，采用商业化的快速培养系统，检测时间可缩到2-3周，3.免疫学诊断：（1）结核菌素皮肤实验（简称TST），也称ppd实验，是检测机体是否存在针对结核菌素的迟发型超敏反应的一种皮试实验，PPD即为纯蛋白衍生物。是将细菌接种于甘油肉汤培养基，收集过滤液并加热处理，再经三氯醋酸沉淀后的纯化物，主要成分为细菌分泌的蛋白质且耐热的成分。实验方法是：取5单位的PPD，注入受试者前臂下皮，48至72小时后观察接种部位出现红肿应激反应，并测量应急直径，直径≥5mm者为阳性，直径≥20mm者为强阳性，以辅助诊断机体是否感染结核分枝杆菌。（2）结核菌素皮试实验，又称TST，TST实验仅用于辅助诊断儿童结核病，常用于评估卡介苗的免疫接种效果，潜伏结核病感染的流行病学调查或评估肿瘤病人的细胞免疫功能。需要注意的是，卡介苗免疫接种可引起不良性反应，另外，在发生感染早期患严重的结核病或伴有其他严重疾病，致细胞免疫功能低下，人群可出现阴性反应。（3）γ干扰素释放实验（IFN-γ）机体被结核分枝杆菌感染后，外周血中存在抗原特异性的T细胞，当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖并产生IFN-γ。IFN-γ释放实验是基于此原理建立的一种体外免疫检测结核分枝杆菌感染的新方法。具体操作方法是：采集受试者外周学全血，或分离外周血单个核细胞，分离结核分枝杆菌杆菌较为特意的抗原，通过酶联免疫吸附实验(ELISA)定量检测血浆中的IFN-γ的含量或酶联免疫斑点实验检（ELISPOT）测分泌IFN-γ的T细胞的数量。该实验方法特异性高于TST，且2天内可获得结果，但不能将活动性结核病人从潜伏结核病感染中区分出来。（4）分子诊断：常用PCR技术，检测结核分枝杆菌DNA，灵敏度高，每毫升标本中含有10到100个活菌即可检出。RIF技术：以全自动实时荧光定量pcr技术为基础，检测rpoB基因。可在两小时内同时检测标本中存在的结核分枝杆菌和对利福平的耐药性，可用于快速诊断。4.防治原则：对于结核病高负担，国家针对新生儿普遍接种卡介苗（BCG）免疫接种。全球150多个国家和地区，包括中国将免疫接种卡介苗纳入计划免疫，我国规定，新生儿出生后24小时内要及时皮下接种卡介苗一次，但不推荐复种。一般认为，卡介苗可有效预防儿童结核性脑膜炎，粟粒性肺结核等重症结核病。保护期仅10到15年，预防成人肺结核和潜伏期结核病感染的效果较差。新一代的结核病疫苗包括亚单位疫苗、DNA疫苗，改良卡介苗和结核分枝杆菌减毒活疫苗仍在研究中。治疗原则：对作为传染源的活动性肺结核病人，因早发现、早报告