还原糖蛋白质脂肪的鉴定

关于还原糖蛋白质脂肪的鉴定检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质

1.实验原理第2页,共26页，2024年2月25日，星期天

斐林试剂苏丹Ⅲ橘黄色红色砖红色沉淀紫色苏丹Ⅳ

双缩脲试剂鉴定物质试剂实验现象还原性糖脂肪蛋白质生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验原理第3页,共26页，2024年2月25日，星期天方法步骤：

1．实验材料、仪器和试剂的选择

2．设计记录表格，记录预测结果

3．检测的方法步骤

(1)还原糖的检测和观察;(2)脂肪的检测和观察;(3)蛋白质的检测和观察;第4页,共26页，2024年2月25日，星期天第5页,共26页，2024年2月25日，星期天第6页,共26页，2024年2月25日，星期天第7页,共26页，2024年2月25日，星期天选材：含糖量较高的白色或近于白色的植物组织(排除色素对显色的干扰)，苹果、梨最好

。

实验流程(步骤)1.可溶性还原糖

制备组织样液：制浆：去皮、切块、研磨，过滤：（用单层纱布）取液：（２mL）显色反应

２mL组织样液刚配制的斐林试剂２mL现象：

呈现蓝色变成砖红色(用前混匀)50～65.C水浴加热2min第8页,共26页，2024年2月25日，星期天还原糖的检测和观察：第9页,共26页，2024年2月25日，星期天还原糖的检测结果第10页,共26页，2024年2月25日，星期天第11页,共26页，2024年2月25日，星期天第12页,共26页，2024年2月25日，星期天2.脂肪的鉴定

取材：花生种子（浸泡３－４h），去皮，将子叶削成薄片

制片：①选取最薄的薄片移至载玻片中央②在薄片上滴加苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)

染液2－3滴，染色２－３min③滴加体积分数为50%的酒精溶液1—2滴，洗去浮色(多余的苏丹Ⅲ

)④吸去余液，滴1-2滴蒸馏水，盖上盖玻片，制成临时装片显微观察：先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜观察现象：有被染成橘黄色(或红色)的脂肪微粒脂肪微粒第13页,共26页，2024年2月25日，星期天脂肪的检测结果第14页,共26页，2024年2月25日，星期天第15页,共26页，2024年2月25日，星期天3.蛋白质的鉴定选材与制备组织样液：黄豆组织样液（或鸡蛋蛋清稀释液）［黄豆浸泡→去皮→切片→研磨→过滤→滤液］

显色反应２mL组织样液双缩脲试剂Ａ２mL现象：无色双缩脲试剂Ｂ３－４滴紫色或紫红色(创设碱性条件)(提供Cu2+)第16页,共26页，2024年2月25日，星期天蛋白质的检测结果第17页,共26页，2024年2月25日，星期天蛋白质的鉴定----双缩脲试剂鸡蛋清溶液

NaOH溶液滴加CuSO2

溶液,每次滴加均需摇匀结果显示:紫色第18页,共26页，2024年2月25日，星期天实验成功的关键与注意事项1.实验成功的关键在于实验材料的选择：⑴．在做可溶性还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官)，而且组织的颜色较浅，最好是白色或近于白色的植物组织，这样可以避免材料自身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。⑵．在做脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功，要求实验技能较高，不妨改成刮取花生子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。⑶．在做糖和蛋白质的实验时，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋，鉴定之前需要留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色做比较，这样可增强说服力。第19页,共26页，2024年2月25日，星期天问题探讨:1、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时，为什么要留出一部分样液？作对照2、使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3～4滴而不能过量？

过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，而掩盖生成的紫色。3、为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久？

时间太长，Cu(OH)2悬浊液就沉淀在试管底部而无法参与反应。深化第20页,共26页，2024年2月25日，星期天2.注意事项：A.可溶性还原糖

(1)斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液(0.1g/mL的NaOH溶液)和乙液(0.05g/mL的CuSO４溶液)分别配制、储存，使用时，再临时配制，将4～5滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。

(2)鉴定可溶性还原糖，加热试管时，应该用试管夹夹住试管上部，放入盛开水的大烧杯加热；注意试管底部不接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以提起试管夹，使试管与沸水接触面减少，以免溶液溢出。

第21页,共26页，2024年2月25日，星期天B.脂肪的鉴定

(1)在鉴定脂肪的实验中，若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡3～4小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。

(2)染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色，染色和洗浮色时间不宜过长（否则酒精将脂肪溶解影响实验效果），观察时找最薄处最好只有1—2层细胞。第22页,共26页，2024年2月25日，星期天C.蛋白质的鉴定

(1)在蛋白质的鉴定实验中，若用蛋白质作实验材料，必须稀释，如果稀释不够，与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗刷干净。

(2)双缩脲试剂的使用，应先双缩脲加试剂A(0.1g/mL的NaOH溶液)，造成碱性的反应环境，再加试剂B(0.01g/mL的CuSO４溶液)。第23页,共26页，2024年2月25日，星期天4、斐林试剂与双缩脲试剂两者有何不同？新配制的Cu(OH)2溶液在碱性环境下的Cu2+NaOH浓度为0.1g/mLCuS04浓度为0.05g/mLNaOH浓度为0.1g/mLCuS04浓度为0.01g/mL先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合，而后立即使用。先加入Na0H1mL，然后再加CuS044滴，摇匀。(不能过量)水浴加热不需要第24页,共26页，2024年2月25日，星期天5、实验的材料的选择和处理有什么要求？材料的选择材料的处理还原性糖的鉴定脂肪