创新型实验项目结题材料

IL-13受体2融合蛋白在肿瘤靶向治疗中的研究进展，中国细胞生物学学报(已投稿，正IL-13对A549细胞IL-13R2表达及增殖和迁移的影响，南昌大学学报（医学版（已用负责人 （公章 负责人 （公章 项目经费使用年月日年月日年月日总计经费：0.58其中拨款： 万其中自筹： 万 项目经费使用年月日年月日年月日总计经费：0.58其中拨款： 万其中自筹： 万 12RNA提取试剂，ELISA试剂盒等3资料4试验5协作6 编号南昌大学国家大学生创新创业训练计划项研究报告IL-13R-mAb-绿脓杆菌外毒素A融合蛋项目名称及编：■国家级：■编号南昌大学国家大学生创新创业训练计划项研究报告IL-13R-mAb-绿脓杆菌外毒素A融合蛋项目名称及编：■国家级：■项目类别□：□学院名称第二临床医学院：项目组员：指导教师：资助金额5800：20126月20156起止年月：教务二〇一五年六月摘要目的IL-13对摘要目的IL-13对人肺腺癌细胞（A549）IL-13R2表达及增殖、迁移的影响，并构建基因重组IL-13R2单克隆抗体-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白表达载体及观察其体外对肿瘤细胞的杀伤效应。方法实验分IL-13浓度组：0、10、20、50、100µg/L(IL13的刺激浓度)和时间组：12、24、48h(IL-13(20µg/L的刺激时间)。通qRT-PCRIL-13R2mRNA的表达，ELISA检测各实验组分泌型IL-13R2(sIL-13R2)的表达，流式细胞术检测胞膜型IL-13R2和胞内型IL-13R2的表达，以评价不同剂量IL-13IL-13在不同时间条件下对人肺腺癌A549IL-13R2IL-13R2单克隆抗体基因与绿脓杆菌外毒素A基因；再将连接产物转化至大肠杆果1.IL-13A549qRT-PCRWesternblot、流式细胞术、MTT、Transwell和细胞划痕实验检测发现A549IL-13R2IL-13在较低浓度（10、20ng/ml）A549IL-13R2的表达水平，而对增殖和迁移无显著影响；在较高浓度（50、100ng/ml）时对IL-13R2的上调作量依赖性，sIL-13R2水平无明显改变、mIL-13R2表达略有增加、胞内型IL-13R2水平明显下调。2.成功构建IL-13R2单克隆抗体-绿脓杆菌外毒素A融0.05IL-13对人肺腺癌A549IL-13R2表达水平及增殖、迁移的影响具有“双相IL-13R2IL-13sIL-13R2可作为肺腺癌早期的诊断及复发的监测指标；通过基因重组技术构IL-13R2单克隆抗体-绿脓杆菌外毒素A[关键词 IL-13；肺腺癌；A549；IL-13R2；sIL-13R2；mIL-AimHerein,weAimHerein,weaimtodemonstratetheeffectofIL-13R2expression,cellproliferationandmigrationofhumanlungadenocarcinomacellline(A549)afterIL-13stimulation.MethodsTheexperimentwasdividedintoIL-13groups:0,10,20,50,100µg/L(concentrationofIL-13)andtimegroups:12,24,48h(20µg/LIL-13stimulationtime).TheexpressionofIL-13R2mRNAofeachexperimentalgroupwasdetectedbyqRT-PCRtechnique,theexpressionofsecretedIL-13R2(sIL-13R2)intheexperimentalgroupswastestedbyELISA,theexpressionofmembranetypeIL-13R2andintracellularIL-13R2wasdetectedbyflowcytometry.TheexpressionofIL-13R2wasevaluatedindifferentdosesofIL-13andindifferenttimeconditionsonhumanlungadenocarcinomacelllineA549.ResultTheqRT-PCR,Westernblot,Wefoundthat:1）IL-13R2couldexpressinA549cells;2)IL-13upregulatedIL-13R2expressionatlowerconcentrations(10,20ng/ml)butdidn’tchangethecellproliferationandmigrationofA549;highIL-13concentrations(50,100ng/ml)couldnotupregulationtheexpressionofIL-13R2,whilesignificantlypromotedcellproliferationandmigrationofA549.3)Comparedwiththecontrolgroup,threekindsofIL-13R2phenotypesdisplayeddifferentadjustmentafterIL-13stimulation:A.Lowconcentrations(IL-13:10,20ng/ml)ofIL-13couldsignificantlyupregulatesIL-13R2,mIL-13R2andintracellularIL-13R2expressioninvarieddegrees;B.Highconcentrations(IL-13:50,100ng/ml)ofIL-13couldn’tchangethelevelofoverallIL-13R2andsIL-13R2,butupregulatedmIL-13R2expressionwhileintracellularIL-13R2levelsweresignificantlyreduced.ConclusionTheseresultssuggestedthattherewere"bipolarity"and"difference"inIL-13R2expression,cellproliferationandmigrationinhumanlungadenocarcinomaA549cellsafterIL-13stimulation;IL-13R2couldinhibittheeffectofIL-13inA549cells；IL-13R2canactasanindicatorearlydiagnosisandrecurrencemonitoringinhumanlungadenocarcinoma;GenerecombinationtechnologybasedIL-13R2monoclonalantibody-pseudomonasaeruginosaexotoxinAfusionproteincanbeusedformoleculartargetedtherapyinpatientswithlungIL-13;Lungadenocarcinoma;A549;IL-13R2;sIL-13R2;[KeyIL-13主要是由活化的II型辅助性T细IL-13主要是由活化的II型辅助性T细胞分泌的多效性细胞因子IL-13受体包括IL-13R1和IL-13R2，IL-13R1单独IL-1313受体复合物，并激活Janus蛋白激酶/信号传导及转录激活IL-13R2为特异性的靶向受体来探索肿瘤治疗新方法。本研人肺腺癌细胞A549为实qRT-PCR技术IL-13各度组(IL-13的刺激浓度)和各时间组：(IL-13(20µg/L的刺激时间)IL-13R2mRNA的表达，ELISA检测各实验组IL-13R2(sIL-的表达，以评价IL-13以及IL-13在不同时间条件下对腺癌细胞IL-13R2表达的影响，并根据其三种亚型所具有的不A融合蛋白”靶向药物体系，从而探讨IL-13R2在抗肿瘤治疗目录摘 序 第目录摘 序 第1章导 研究内 研究方 第3章材料和方 材 主要试 3.2实验方 细胞培 总RNA定量与质量鉴 RNA逆转 qRT- ELISA检测可溶型IL-13R2含 流式细胞术检测胞膜以及胞内IL-13R2的表达 IL-13R2单克隆抗体-A化3.2.12基因重组IL-13R2单克隆抗体-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白抗肿瘤体外效 3.3统计学处 第4章结 4.1IL-13R2表 琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整 溶解曲 IL-13对A549细胞IL-13Ra2表达水平的影 IL-13对A549细胞sIL-13R2表达的影 IL-13对A549细胞mIL-13R2表达的影 IL-13对A549细胞胞内型IL-13R2表达的影 IL-13对A549细胞增殖和迁移的影 IL-13R2单克隆抗体-AA549第5章讨 1IL-13主要是由活化的II1IL-13主要是由活化的II型辅助T细胞分泌的多效性细胞因子,IL-13受4R形成异源二聚体后却可形成高亲和力的IL-13受体复合物，并激活Janus蛋白激酶/信号传导及转录激活因子(JAK/STAT)信号通路发挥功能[1-2]。IL-13R2已证实三者的相对比例不受总体水平的影响，且细胞膜表面与细胞内的13R2之间可以相互循环。一般情况下IL-主要存在于细胞内，但在IFN-ɤ面，或以可溶性形式分泌至细胞外。IL-IL-IL-13R1更易IL-13结合，所以它能13R1IL-13JAK/STAT通路介导的纤维化过程,又由于胞浆尾很短而被视为“诱饵受体”[5-6]。但自从Fichtner-Feigl在《自然》杂志上报道IL-13可通过IL-13R2介导的信号通路参与转化生长因子-β（transforminggrowthfactorβ，TGF-β）的产生和组织纤维化[3]，越来越多的科学研究开始探索IL-13R2的信号功能，研究发现IL-13R2有着比仅作为“诱饵受体”更为复杂的IL-13R2在正常细胞不表达或者仅有低表达，而在肿瘤细胞有高表达[7]IL13R2为特异性的靶向受体来嗽、痰血、低热、胸痛、气闷等，所以很容易忽略，预后和远期生存率均不理X线、细胞学检查、支气管镜检查及剖胸等,但都有其应用[19，20]1997年单克隆抗体Rituxin绿脓杆菌外毒素 aeruginosaexotoxinA）是由假单胞菌毒素分子DomainIa（结构域Ia）作为受体识别功能域可与哺乳动物细胞膜受LPR（低密度脂蛋白受体相关蛋白）结合，一方面直接发挥毒性作用，另一方针对IL-13Ra2在肿瘤组织中的分子标记特点，以及目前以IL-13为靶向分(1)首先对IL-13Ra2在肺癌发生及进展中的作用与分子机制进行研究。以人肺腺50、100µg/L(IL13的刺激浓度)和各时间组：12、24、48h(IL-13(20µg/L的刺激时间A549细胞总IL-13R2mRNA的表达，ELISA检测各实验组分泌型IL-13R2(sIL-13R2)的表达，流式细胞术检测胞膜IL-13R2和胞内型IL-13R213R2表达的影响，探讨IL-13对肺腺癌A549IL-13R2的表达水平及细毒素“IL-13Ra2-monoclonalAb-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白”靶向药物体系，2章研究内容及过研究2章研究内容及过研究.2研究方案2.2.2qRT-PCRIL-13R2mRNAI型胶原蛋白mRNA2.2.3ELISA检测各实验组分泌型IL-13R2(sIL-13R2)的表达IL-13R2IL-13R2IL-13R2单克隆抗体-A融合蛋白构建及其体外2.3技术路线qRT-PCR、ELISA、流式细胞检测、MTT、Transwell、细胞划痕实基因重组IL-13R2单克隆抗体-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白表达载体构建与离纯化IL-13Ra2monoclonalAbIL-13Ra2monoclonalAbPAGE电泳、WB基因IL-13R单克隆抗体-绿脓杆菌外毒素融合蛋白抗肿瘤体内外效MTTIL-13Ra2monoclonal材料和方法33.1材料3.1.1主要试剂（1）细胞美国Hyclone公司美国Peprotech白酶-Cell（2）逆转qPCRTotalRNA材料和方法33.1材料3.1.1主要试剂（1）细胞美国Hyclone公司美国Peprotech白酶-Cell（2）逆转qPCRTotalRNAPrimeScriptSYBR（3）ELISA（4）流式细胞（4）Westernblot检测Bradford法蛋白定量试剂盒一抗兔抗IL-13R2IgG二抗羊抗兔IgG-美国Abcam公司（5）特异性引物列GenBankReverseSequence（5’-3）IL-NMβ-NM3.1.2主要实验仪器PRISM7500Real-TimeBIO-RADMylyderPCR3.1.2主要实验仪器PRISM7500Real-TimeBIO-RADMylyderPCRDP73显微镜成像系统SW-CJ-2FD超净工作台Allegra-6R美国Bio-Rad公司Bio-Rad公司MLS-3020高压灭菌锅BS400S电子天平-80冰DYY-III-8B芬兰Labststems公司美国BD公司仪3.2实验方法3.2.1主要试剂配制方法1DMEM（Dulbecco‘smodifiedEagle‘smedium）高糖基80mL入无菌的分液瓶中，加入20mL灭菌过滤的胎牛血清以及0.1mL青链霉素混合浓缩液（全培100μg/mL，用酸/氢氧化钠溶液滴定调整pH值到7.2，摇匀并密封4℃保存。用完后再次配制新PBS11L4℃8g；Na2HPO43.48g;KCl0.2g；K2HPO40.2g34、IL-13溶液5无核酸酶水：1mLDEPC999mL37℃密封过夜，电泳缓冲液1×TBE：将无核酸酶水：1mLDEPC999mL37℃密封过夜，电泳缓冲液1×TBE：将20mL电泳缓冲液（5×TBE）加入80mL核酸酶水即配成电泳缓冲液（1×TBE1LTBE1Tris54g、27.5mL及0.01molEDTA。琼脂糖凝胶：1.2g琼脂糖融于100mL1×TBE，微波加热3min后，冷却至60℃以下，5μLEB（10mg/mL。使用前将所有的试剂盒标本缓慢均衡至室温（18-25标准品：每瓶标准品加入标准品稀释液0.5ml，盖好后室温静止约10min，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为20ng/ml,5ng/ml,2.5ng/ml,1.25ng/ml,O.625ng/ml,0.312ng/ml,（0ng/ml）3)检测稀A及检测B：用6ml蒸馏水或去离子水将6ml浓度4)检测A及检测A及B在使用前少A或B1：100稀释，充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次试验所需的总浓洗涤580ml蒸馏水或去离子水将20ml浓洗涤液稀释至600ml，进行30倍稀释。TMB3.2.21吸管轻轻吹打至细胞完全从瓶壁脱落，将细胞悬液转移至15ml离心管，8002培养瓶细胞生长密度约75％时将细胞传代接种于六孔板，各组细胞孔数为六PBS，2培养瓶细胞生长密度约75％时将细胞传代接种于六孔板，各组细胞孔数为六PBS，各孔加入新鲜的不完全培养基（不含血清）2ml，饥饿12-24h，弃培养310、2050100ng/mlIL-13A54920ng/mlIL-13A5491224、48h3.2.3总RNA定量与质量离心管头等用配制好水浸泡过高温高压消毒烘干备用TotalRNAKitIIRNA，离心5min，弃上清。1mlRNA-SolvReagent2-1.5ml上放置10min。300μLRNAWashBufferI（试剂C）至吸附柱，按上述条件离心，弃滤液。将已配制好的DNase消化液（试剂B）转移至吸附柱膜的中央，室温下静置15分钟。400μLRNAWashBufferI（9.500μLRNAWashBufferII（D）洗涤吸附柱，按上述条件离心，去除滤液。11000/min柱3min，甩干吸附柱内基质以除去乙醇。9.500μLRNAWashBufferII（D）洗涤吸附柱，按上述条件离心，去除滤液。11000/min柱3min，甩干吸附柱内基质以除去乙醇。度值来检测RNA的质量。并按以下公式计算RNA纯度和浓度。1.6,说明RNA3.2.4RNA逆转录225×PrimeScriptRTMasterTotal42RNaseFree14PCR155（保存3.2.5qRT-PCR13PCR3Real-timeQuantitativePCRSYBRPremixExTaq（2×）PCRForwardPrimer（10μM）PCRReversePrimer（10μM）13PCR3Real-timeQuantitativePCRSYBRPremixExTaq（2×）PCRForwardPrimer（10μM）PCRReversePrimer（10μM）ROXReferenceDyeII（50×）cDNA模板dH2O（灭菌蒸馏水10.00.40.40.42.06.820.02、将配置好的PCR反应液放入ABIPRISM7500Real-TimePCRPCR 402)3.2.6Western胰酶消化法消化、重悬细胞，PBS33μlPMSF300μl裂解液提取蛋白，低温高速离心后取上清液先进行聚丙烯酰胺凝胶电泳；半干转3.2.7ELISA检测可溶型IL-13R2含量1.7上覆膜，372每孔加检测溶液A100ul，酶标板加上覆膜，371小时35.每孔加检测溶液B100ul，加上覆膜，3730min5的前5的前3-4孔有明显的梯度蓝色后3-4孔梯度不明显时终止。50ul450nm波长条件下吸光度值(3个复孔取平均值)。CurveExept软件辅助建立标准曲线并计算各样本OD值对应的sIL-13R2含量流式细胞术检测胞膜以及胞内IL-13R2的表达量2mlPBS，用吸管轻轻吹打成细胞悬液，洗涤，800各管分别加入PBS200ul1ul（1ug/ul）30min2ul15min,2mlPBS，用吸管轻轻吹打成细胞悬液，800转/minTriton0.05100ul5min.各组加入PBS2ml800转/min5min，弃上清。各管分别加入PBS200ul，轻轻吹打至细胞重悬2ul15min,3.2.9CO23724h5g/L570nm波长在酶联免疫检测仪上以空白孔（操作同实验组）A值（53次3.2.10细胞划痕实验24200μm无菌枪头在每个长满细胞的培养瓶单1~2道痕，PBS洗去脱落的细胞后换无血清培养基据悉培养；在显微镜下观察划痕修复的过程，并分别取0h、24h、48h72h拍照记录，比3.2.11基因IL-13R2单克隆抗体-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白表达载体构建与分离纯化1）RT-PCR法扩增IL-Ab基因片段，TA克隆法实现与质粒限制性内切酶酶切图谱分析重组质粒，DNA测序保证重组质粒IL-13R2monoclonalAb插入片段的正确性；IL-13R2monoclonalAb毒素A（商品化产品）的质粒DNA，纯化后将两者的片段连入质粒载体即构建成融工程菌标准化培养后收集菌液并进行破菌处理以获取“IL-13R2单克隆抗3.2.12基因重组IL-13R2单克隆抗体-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白抗肿瘤体外效应96（105/ml）后加入无血清培养基与系列稀释的“IL-13R2monoclonalAbA3.3统计学处理SPSS13.0软件进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差表示。各指标间的比较采用Dunnett-t检验。4章结果4.1IL-13R2表达4.1.14章结果4.1IL-13R2表达4.1.1琼脂糖凝胶电泳RNA的完整性1所示，18S，28S两条带清晰且无明显弥散带，28S：18S亮度接2：1RNA结构完整没有降解。总RNA的纯度鉴定结果显示，总RNA260nm/280nm1.85-2.1之间；260nm的吸光度均大于0.1RNA中的蛋白质、DNA、酚类残留较低，RNAPCRFig1.RNAanalysisbyagargel4.1.2溶解曲线2所示，为2对引物合成的特异性产物的溶解曲线负一次微分，2组特2Fig.2Thedissolution IL-13A549细胞IL-13Ra2表达水平的影响3AA549IL-13R2；IL-13在低浓度（IL-10、20ng/ml）IL-13R2mRNA10、20ng/ml）IL-13R2mRNA条件下，对13：100ng/ml50ng/ml组3BFig.3EffectofIL-132stimulatedbyIL-13inA5494.2IL-13A549细胞sIL-13R2表达的影响如图4，未受IL-13刺激且血清饥24h后的肺腺癌 细胞培养上清液和20ng/ml浓度时，对sIL- 的表可以检测到sIL-13R2；IL-sIL-13R2表达水平的影响没有统计学意义Fig.4ExpressionofsIL-13R2stimulatedbyIL-13inA5494.3IL-13A549细胞mIL-13R2表达的影响5，正常情况下肺腺癌A549细胞膜表面有mIL-13R21310µg/L浓度时可以上调mIL-13R220µg/LsIL-13R2表达的影响有所差异的是，sIL-13R2表达的影响有所差异的是，IL-1350ng/ml100ng/ml浓度mIL-13R2的表达量与未受刺激前相比，有轻度上调但不显著（IL-100ng/ml组Fig.5ExpressionofmIL-13R2treatedbyIL-13inA549cellsweretreatedwith0、10、20、50、100ng/mlIL-13for24hourscontrolandgrouptodetecttheexpressionofmIL-4.4IL-13A549细胞胞内型IL-13R2表达的影响IL-13R2IL-13＞Fig.6ExpressionofintracellularIL-13R2Fig.6ExpressionofintracellularIL-13R2treatedbyIL-13inA549cellsweretreatedwith0、10、20、50、100ng/mlIL-13for24hourscontrolandexperimentalFig.7TheexpressionratioofcellmembraneandintracellularIL-astimulationA549withconcentrationsofIL-13for24Fig.8ExpressionratioofcellmembraneandintracellularIL-13R2toA549cellswith20ng/mlIL-13afterdifferent4.5IL-13A549细胞增殖和迁移的影响9A9BIL-13在低浓度时（10ng/ml20ng/ml）A549的增殖和迁移没有影响，而在高浓度（50ng/ml100ng/ml）时具有显Fig.9CellproliferationandmigrationofA549stimulatedbyIL-Fig.9CellproliferationandmigrationofA549stimulatedbyIL-comparedwith0ng/mlgroup,comparedwith0ng/mlgroup.C：CellmigrationofA549stimulatedbyIL-13differentconcentrationswasobservedbycellscratchtestunderphase-contrastmicroscopyattheindicatedpoints(0h,24h,48hand4.6基因重组IL-13R2单克隆抗体-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白对细胞增殖的10，与空白对照相比，基因重组IL-13R2单克隆抗体-绿脓菌外毒素A融合蛋白组A5490*10-10-1310- 10-10-10基因重组IL-13R2单克隆抗体-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白对A549作用（*** 5章讨论（15%Th1/Th2免疫平衡的角度对非小细胞性肺癌（尤其是肺腺癌）5章讨论（15%Th1/Th2免疫平衡的角度对非小细胞性肺癌（尤其是肺腺癌）IL-13对细胞功能的调节有赖与其两种受体IL-13R1和IL-13R2的相互、胞内型分子的能力，IL-13R2曾一度被认为只是以诱骗受体（Decoyreceptor）IL-13（IL-13R1）的作用。但近年来在对卵巢癌、溃疡性结肠炎-IL-13R2在本研究中我们发（1）IL-13R2可在肺腺癌细胞A549中表达。整体水平，还是sIL-13Ra2、mIL-13Ra2以及胞内型IL-13Ra2的表达均有不同水平无明显改变、mIL-13Ra2IL-13Ra2基于以上实验结果，我们认为：IL-13对A549水平无明显改变、mIL-13Ra2IL-13Ra2基于以上实验结果，我们认为：IL-13对A549IL-13R2似“负反馈”的方式限制自身对肺腺癌A549的影响；而在较高浓度（第二相）在肺腺癌A549IL-13R2IL-132IL-13IL-13R2IL-1350、100ng/ml改变sIL-13R2水平，而仅调节胞内型IL-13R2（作为“IL-13R2库”）转移313R2单克隆抗体-绿脓杆菌外毒素A综上所述，我们在本课题中测定了肺腺癌A549IL-13IL-13R2的表达水平以及细胞增殖和迁移的影响，并分析了13R2IL-13R2[参考文献JoshiBH,HogaboamC,Dover[参考文献JoshiBH,HogaboamC,DoverP,etal.Roleofinterleukin-13incancer,pulmonaryfibrosis,andotherT(H)2-typediseases[J].VitamHorm,2006,74:479-504.StroberW,KitaniA,Fichtner-FeiglS,etal.ThesignalingfunctionoftheIL-13Ralpha2receptorinthedevelopmentofgastrointestinalfibrosisandcancersurveillance[J].CurrMolMed,2009,9(6):740-750.Fichtner-FeiglS,StroberW,KawakamiK,etal.IL-13signalingthroughthe13alpha2receptorisinvolvedininductionofTGF-beta1productionandFibrosis[J].NatMed,2006,12(1):99-106.FormentiniA,ProkopchukO,SträterJ.Interleukin-13exertsautocrinegrowth-promotingeffectsonhumanpancreaticcancer,anditsexpressioncorrelatewithapropensityforlymphnodemetastases[J].IntJColorectalDis,2009，24:57–67.WilsonMS,RamalingamTR,RivollierA,etal.ColitisandintestinalinflammationinIL10-/-miceresultsfromIL-13Ralpha2-mediatedattenuationofIL-13activity.Gastroenterology2011,140(1):254-264.HeckerM,ZaslonaZ,KwapiszewskaG,etal.DysregulationoftheIL-13receptorsystem:anovelpathomechanisminpulmonaryarterialhypertension.AmJRespirCritCareMed2010,182(6):805-818.DavidM,FordD,BertoglioJ,etal.InductionoftheIL-13receptor-chainbyIL-4andIL-13inhumankeratinocytes:InvolvementofSTAT6,ERKandp38MAPKPathways[J].Oncogene,2001,20(46):6660-6668.陈孝平，汪建平.第八版外科学[M].北京：人民卫生出版社AndrewsAL,NasirT,BucchieriF,etal.IL-13receptoralpha2:aregulatorofIL-13andIL-4signaltransductioninprimaryhumanfibroblasts[J].JAllergyClinNguyenV,ConyersJM,ZhuD,GiboDM,HantganRR,LarsonSM,eta1.Anovelliganddeliverysystemtonon-invasivelyvisualizeandtherapeuticallyexploittheIL-13R2tumor-restrictedbiomarker[J].2012,14(10):1239-1253.WuAHandLowWC.Molecularcloningandidentificationofthehumaninterleukin13alpha2receptor(IL-13R2)promoter[J].NeuroOncol,2003,DainesMO,TabataY,WalkerBA,etal.LevelofexpressionofIL-13Ralpha 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