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文档简介

二、试验原理pH=pI+OH-pH>pI+H++OH-+H+pH<pI氨基酸兼性离子阴离子阳离子血清清蛋白pI为：4-5.8在pH4.2缓冲液中，清蛋白带正电荷溴甲酚绿法测定血清白蛋白第1页

血清清蛋白在pH4.2缓冲液中带正电荷，在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色复合物，在波长630nm处有吸收峰，其颜色深浅与清蛋白浓度成正比。与一样处理清蛋白标准比较，可求得血清中清蛋白含量。二、试验原理清蛋白+BCG蓝绿色复合物+-pH4.2Brij-35溴甲酚绿法测定血清白蛋白第2页三、试剂与器材1.0.5mol/L琥珀酸缓冲贮存液2.10mmol/LBCG贮存液3.叠氮钠贮存液4.聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35）贮存液5.BCG试剂6.40g/L清蛋白标准液7.分光光度计ddH2O400mL琥珀酸缓冲贮液100mLBCG贮液8.0mL叠氮钠贮液2.5mL，Brij-35贮液2.5mL，ddH2O定容至1000mL。溴甲酚绿法测定血清白蛋白第3页

立刻混匀后，在波长630nm处用空白管调零，30s±3s内读取吸光度。加入物（mL）空白管（B）标准管测定管S1S2U1U2血清———0.020.02白蛋白标准液

—0.020.02——蒸留水

0.02————BCG试剂

4.04.04.04.04.0四、操作溴甲酚绿法测定血清白蛋白第4页五、计算

血清清蛋白(g/L)＝Āu/Ās×蛋白标准液浓度(g/L)=Āu/Ās×40(g/L)参考范围：正常人:35－55g/L溴甲酚绿法测定血清白蛋白第5页六、注意事项1.BCG是一个pH指示剂，变色域为pH3.8（黄色）~5.4（蓝绿色），所以控制反应液pH是本法测定关键。2.时间必须控制准确。因为BCG不但与清蛋白呈色，而且与血清中各种蛋白质成份呈色，其中以a1-球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反应速度较清蛋白稍慢。因为在30s内呈色对清蛋白特异，故BCG与血清混合后，在30s内读数可显著降低非特异性呈色反应。溴甲酚绿法测定血清白蛋白第6页七、方法学评价1.本法操作简便、快速，胆红素、溶血和中度脂血症无干扰，既可手工操作，也能自动分析，是当前国内测定血清清蛋白最惯用方法。2.本法线性范围为10~60g/L，RCV<4%。但该法与溴甲酚绿紫法比较，对血清清蛋白特异性稍差，3.重复性差，清蛋白特异性稍差（极性氨基酸参加反应，但参加运输球蛋白也会与染料反应，不过反应速度较慢）。4.溴甲酚紫法：特异性很好，但不能与动物血清反应，而当前质控血清多为动物血清，所以临

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