全人源抗肝癌基因工程单链抗体与阿霉素偶联物的制备及其抗肿瘤作用研究的开题报告_第1页
全人源抗肝癌基因工程单链抗体与阿霉素偶联物的制备及其抗肿瘤作用研究的开题报告_第2页
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全人源抗肝癌基因工程单链抗体与阿霉素偶联物的制备及其抗肿瘤作用研究的开题报告一、研究背景及意义肝癌是一种常见的恶性肿瘤，世界范围内仅次于肺癌成为死亡率最高的肿瘤类型之一。现阶段的治疗方式主要包括手术切除、肝脏移植、化疗、放疗等方法，但效果并不理想。因此，寻找新的肝癌治疗方法及药物是当前亟待解决的问题。基于人源化单克隆抗体技术的免疫治疗，是近年来受到广泛关注的肿瘤治疗方法。该技术的优点在于可以专一识别肿瘤细胞表面的特异性抗原，针对性强且潜在副作用小。尤其是单链抗体（scFv）技术，可通过转基因技术将其引入人体使其发挥治疗作用。本研究计划通过基因工程技术制备全人源抗肝癌单链抗体，进一步将其与阿霉素（doxorubicin）偶联制备抗肿瘤复合物，并考察其对肝癌细胞的抑制效果和生物性质，为临床肝癌治疗提供新的治疗方案。二、研究内容和方法2.1研究内容（1）构建全人源抗肝癌scFv基因，并通过重组工程方法表达获得。（2）利用交叉链接试剂丁二酰亚胺（DMP）将scFv与阿霉素偶联。（3）对比原始scFv和偶联复合物的生物活性，包括亲和力、特异性识别、抑制效果等属性。（4）检测偶联复合物对肝癌细胞的增殖、迁移、凋亡等生物效果，并探究其治疗机制。2.2研究方法（1）基因克隆：PCR扩增全人源抗肝癌scFv基因，克隆到表达载体，构建重组蛋白表达系统。（2）表达纯化：转染携带scFv表达载体的细胞，收集培养上清液进行纯化。（3）流式细胞术：流式细胞术检测偶联复合物对肝癌细胞的特异性识别和亲和力。（4）MTT实验：利用MTT法检测偶联复合物对肝癌细胞增殖的抑制效果。（5）细胞转移实验：利用Transwell实验检测偶联复合物对肝癌细胞迁移的影响。（6）细胞凋亡实验：利用AnnexinV-FITC/PI染色检测偶联复合物对肝癌细胞凋亡的影响。三、预期结果本研究计划将通过构建全人源抗肝癌scFv基因，将其与阿霉素偶联制备抗肿瘤复合物，并探究其治疗肝癌效果。预期结果如下：（1）成功构建全人源抗肝癌scFv基因，表达获得目标重组蛋白。（2）成功利用交叉链接试剂DMP将scFv与阿霉素偶联，制备抗肝癌复合物。（3）通过比较偶联复合物和原始scFv的生物学性质，证明其具有优良的抗肝癌活性。（4）在对肝癌细胞进行体外实验时能够体现出制备的偶联复合物对肝癌的治疗效果。四、研究意义本研究拟通过基因工程技术，制备全人源抗肝癌scFv，并与阿霉素偶联制备抗肿瘤复合物，为肝癌治疗提供新的方式。该研究意义在于：（1）寻找肝癌临床治疗的新途径及新的药物。（2）探究全人源抗肝癌scFv与阿霉素偶联制备抗肿

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