2024年大学试题(医学)-生物制药工艺学笔试参考题库含答案

“人人文库”水印下载源文件后可一键去除，请放心下载！（图片大小可任意调节）2024年大学试题(医学)-生物制药工艺学笔试参考题库含答案“人人文库”水印下载源文件后可一键去除，请放心下载！第1卷一.参考题库(共75题)1.简述生物药物的研究发展趋势。 2.在杂交瘤培养中，血清的加入对培养非常有效，一般为（）的胎牛血清。A、5%~10%B、8%~15%C、10%~20%D、12%~20%3.四环素发酵生产使用的菌种是产生金霉素的（）和（）。4.氨基糖苷类抗生素的代表性例子是（），其分子结构由（）、（）和（）三部分以苷键连接而成。5.抗生素主要是从微生物的培养液中纯化，或经合成或半合成的方法所制得，依其抑菌模式可分为哪几大类？简述其抑菌机理并举例说明。                  6.促进凝血酶原合成的是（）。A、维生素AB、维生素CC、维生素DD、维生素EE、维生素K7.比较微生物发酵控制过程的异同。8.氯霉素抗菌谱广，而最主要的不良反应是（）。A、二重感染B、胃肠道反应C、对肝脏严重损害D、对造血系统的毒性E、影响骨、牙生长9.大环内酯类抗生素根据大环内酯结构的不同，可以分为（）、（）、（）。10.Oppenauer氧化反应常用的氧化剂为（），催化剂为（）。11.国外菌种保藏和管理中心主要有（）、（）、（）、（）。12.目前常用的氨基酸生产工艺有哪些，并简要说明各工艺的特点。 13.膜组件的分类及其特点是什么？ 14.以下属于氨基酸生产工艺的是（）。 A、微生物发酵工艺B、酶法转化工艺C、化学合成工艺D、蛋白质水解工艺15.菌种和细胞保藏中常用的冷冻保护剂是（）、（）。16.氨基酸生产菌有什么特性，为什么？ 17.根据微生物生长与产物生成之间的关系模型，抗生素发酵生产属于（）。18.何谓盐析？其原理是什么？常用的盐析方法有哪些？影响盐析的主要因素有哪些？盐析操作时常用的盐是什么？19.克隆真核基因常用的方法是（）和（）。20.半合成紫杉醇的侧链大致分为（）三大类。21.简述生物活性物质提取时，活性物质的保护措施？22.具有明显抗癌作用的紫杉醇来源于（）。A、松属植物B、红豆杉属植物C、三尖杉属植物D、银杏属植物23.简述基因工程菌的构建过程？24.头孢菌素的生产在国内主要有三条工艺路线，（）、（）和（）。25.用胃蛋白酶可将IgG分子水解成（）。A、F（ab）2+FcB、2Fab+pFcC、2Fab+FcD、F（ab）2+pFc26.培养基连续灭菌的工艺流程包括哪些？其特点是什么？27.维生素A2的生物活性为维生素A1 的（）。A、70%B、40%C、90%D、10%E、50%28.动物细胞培养基组成成分及其作用是什么？与微生物培养基培养基相比，有何特殊性？ 29.总述酶的提取方法有哪些？30.国内谷氨酸生产的碳源原料主要有（）和（）两类，国内谷氨酸产生菌多数为（）缺陷型。31.工业上用于生产链霉素的菌种是（）。32.初级（次级）代谢产物的定义及其特点是什么？33.对于β-内酰胺侧链合成的过程，环加成的产物为（）。A、单一顺式结构体B、单一反式结构体C、单一顺式或反式结构体D、不单一顺式结构体34.常用的重组人胰岛素制剂有哪些？35.维生素C的生产工艺中，手性中心是如何实现的？36.缺乏维生素C易患以下哪种疾病（）。A、恶性贫血B、口角炎C、抗坏血病D、夜盲症37.细胞大规模培养有几种方法，有何特点，如何选择应用？ 38.简述链霉素的性质。 39.谈青霉菌生产青霉素过程中加入前体的的影响以及控制。40.生物活性物质主要有哪些提取方法？41.生物制品根据有图可以分为（）、（）、（）。42.紫杉醇是红豆杉的（），主要存在红豆杉属植物的树皮和针叶中。43.细胞破碎的方法及其原理是什么？选用原则是什么？44.抗体通过（）段与中性粒细胞，单核细胞，NK细胞结合，产生ADCC作用。45.大肠杆菌中高效表达蛋白药物着重设计哪几个方面？ 46.与抗原结合的部位是抗体的（）。A、VL+CLB、VH+CH1C、VH+VLD、CH1+CH247.简述生物药物的特点。48.氯化4-甲基-3-[（2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基）甲基]-5-（2-羟基乙基）噻唑盐酸盐是（）。A、维生素AB、维生素DC、维生素ED、维生素B1E、维生素K349.简述基因工程药物生产的基本过程。 50.反应溶剂直接影响化学反应的（）、（）、（）、（）等。51.干扰素纯化工艺过程中各工段的目的是什么？ 52.血清中抗体特异性的高度不均一称为（）。53.目前生产生用于表达外源基因的动物细胞，均为（）。A、传代细胞系B、原代细胞C、二倍体细胞系D、杂交瘤细胞54.简述链霉素提取和精制的工艺过程。 55.简述生物材料的来源。 56.抗生素的生产途径包括（）、（）和（）。57.工程动物细胞系的建立：基本过程，表达载体设计，转化与培养方案筛选和鉴定方法。它们与基因工程微生物的异同是什么？58.简述动物细胞培养基的主要成分及其作用。59.发酵制药的三个主要阶段分别是菌种选育、（）、（）。60.如何建立重组人红细胞生成素表达细胞？61.分泌片由（）细胞分泌，分子量为70KD。62.下列哪项描述不属于永久细胞系的特点（）。A、细胞形状规则B、没有接触抑制现象C、有异常染色体D、可以连续培养63.红霉素提取的工艺过程。64.超临界流体萃取的特点有哪些？65.简述生物药物的分类。 66.青霉素发酵工艺的建立对抗生素工业有何意义？67.简述动物细胞培养的应用并举例。 68.当动物细胞经过自然或人为的因素转化为（）后，才能变为无限细胞系或连续细胞系，非常适合于制药工业生产。69.干扰素是机体免疫细胞产生的一类（）、（）的生物调节蛋白。70.青霉素发酵生产工艺过程是什么？发酵控制原理及其关键控制点是什么？71.双水相萃取技术的原理及特点是什么？ 72.请简述链霉素的发酵生产与提取工艺包括哪些步骤。 73.生物制药的下游技术74.简述动物细胞的冻存过程。 75.中国菌种保藏和管理中心主要有（）、（）、（）、（）。第2卷一.参考题库(共75题)1.青霉素为代表的β内酰胺类抗生素的作用机制主要是通过抑制（）的活性而阻碍了（）的交联与合成，从而抑制了干扰了细菌的（）合成。2.优良抗生素生产菌种应具备的条件是什么？3.头孢菌素C分子中存在（），在中性和偏酸性的环境里呈现（），（）。4.下列哪项不属于昆虫表达系统的优点（）。A、安全易饲养B、高量表达C、高效表达D、外源基因的表达在转染的晚期5.氢化可的松制备过程中为什么先抽真空后加热？6.氨基酸一般溶于水、稀酸稀碱，不溶于乙醚、氯仿等有机溶剂，常用（）沉淀氨基酸。7.干扰素主要用于（）。A、病毒性疾病B、恶性肿瘤C、病毒引起的良性肿瘤D、动脉硬化8.Oppenauer 氧化中的催化剂是（）。A、异丙醇铝B、氢氧化铝C、环己酮D、丙酮9.紫杉醇有独特的抗癌机制，其作用的靶点是（）和细胞周期中至关重要的微管蛋白。A、减数分裂B、无丝分裂C、减数分裂与有丝分裂D、有丝分裂10.蛋白类物质的分离纯化往往是多步骤的，其前期处理手段多采用下列哪类方法（）。A、分辨率高B、负载量大C、操作简便D、价廉11.利用氯霉素生产工艺中（）可以生产除草剂-杀草铵、邻硝基乙苯。12.生化药物中药用酶类主要包括（）、（）、（）、（）。13.IgE较IgA多一个功能区是（）。14.细胞培养到一定时间为何要进行传代？能一直传代下去吗？阐述其机理。15.氨基酸根据R基团的化学结构不同可分为脂肪族氨基酸、（）、（）；根据R基团的极性可把氨基酸分为（）和非极性氨基酸。16.论述基因工程药物的开研及申报程序。17.简述氨基糖苷类抗生素的结构特点。18.7-氨基头孢烷酸的工艺流程广泛利用的是（）。A、酶水解法B、化学裂解法C、A和BD、发酵19.简述结晶过饱和溶液形成的方法20.简述目前氨基酸生产的主要方法。21.目前用于制药的动物细胞有4类，分别是（）、（）、（）、（）。22.红霉素的发酵生产需要添加的前体物质为（）。23.比较各种表达系统生产rhEPO的优缺点。 24.理想的微载体具备的性能（）。A、质地较硬，耐高温，透明性，密度较低B、质地柔软，不耐高温，透明性，密度较高C、质地柔软，耐高温，透明性，密度较低D、质地柔软，耐高温，不透明性，密度较低25.简述菌种保藏的方法？26.促红细胞生长素（ EPO ）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为（）。A、人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用B、人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定C、大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活D、人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感E、大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化27.简述生产乙肝疫苗的主要途径有哪些？28.抗体的独特型决定簇位于（）。A、VL+CLB、VH+CH1C、VH+VLD、CH1+CH229.最早发现产生青霉素的微生物是属于青霉菌类中的（），而目前生产上用于生产青霉素的菌种则属于（），且大多经过诱变育种，大大提高了青霉素产量。30.赖氨酸发酵培养基有碳源、（）、（）、无机盐和微量元素组成。31.写出下列英文缩写的中文名称：IFN（）；IL-2（）；TNF（）。32.基因工程菌的构建包括（）、（）、（）三个主要环节。33.四环素类抗生素是以（）为母核的一类有机化合物。34.下列与紫杉醇有相同作用机制的是（）。A、多烯紫杉醇B、氯霉素C、青霉素D、头孢菌素35.干扰素表达载体的构建过程中，将表达载体导入（）中，筛选得到（）。36.简述重组人生长激素工艺流程。37.红霉素是由（）与（）和（）缩合而成的（）苷。38.IgG是唯一能通过（）的抗体。39.制备氢化可的松中可能产生“三废”是什么？ 40.氯霉素有（）个手性中心，（）个光学异构体。41.以下哪种不能用于测定细胞活性（）。A、苯胺黑B、结晶紫C、醋酸洋红D、台盼蓝42.菌种选育的目的是什么？43.医用抗生素应具备哪些要求？44.凝胶色谱、膨胀床色谱的原理及特点是什么？ 45.在半合成制备头孢菌素过程中，哪些步骤采用化学合成？哪些步骤采用生物合成？ 46.青霉素G的汉语名称为苄青霉素，其结构可以看作由3个“酸”构成，即（）、（）和（）。47.试述影响工程制药酶活性的因素。48.生物制品免疫效力包括（）。A、定量免疫定量攻击法B、变量免疫变量攻击法C、定量免疫变量攻击法D、被动保护力测定49.在溶剂的作用描述中，不正确的是（）。A、使反应分子能够分布均匀、增加分子间碰撞和接触的机会、有利于传热和散热B、溶剂必须是易挥发的C、溶剂必须是惰性的，不能与反应物或生成物反应D、溶剂直接影响化学反应的反应速度、反应方向、反应深度、产品构型等50.水、乙醇、乙酸、乙二胺等属于质子溶剂，乙醚、二氯甲烷、丙酮、吡啶等属于非质子溶剂，甲苯、正己烷、环己烷等属于（）溶剂。51.膜分离法的定义及特点是什么？ 52.关于血清型IgA，下列哪一项描述是错误的（）。A、有J链B、形成二聚体C、凝聚后通过旁路途径活化补体D、可抗蛋白酶的水解作用53.简述单分子反应，双分子反应，一级反应，二级反应之间的关系。54.简述脂类药物在临床上的应用。55.微生物产生的乙醇、丁醇等小分子物质在一定条件下也能杀菌、抑菌，但并不被看作抗生素，因为其不符合抗生素一般具有的（）特点。A、天然性B、小分子C、高活性（低微浓度）D、次级代谢产物56.红细胞生成素与靶细胞的特定结合，促进（）的增值，分化并成熟为红细胞，增加骨髓向循环血中释放红细胞。 A、红细胞前体细胞B、造血干细胞C、造血组织D、血夜57.简述亚基疫苗的优点。 58.简述发酵工程的概念及分类。59.胰岛素的作用（）。A、促进脂肪的消耗B、促进葡萄糖转化为其他物质C、促进其他物质向葡萄糖转化D、促进非糖物质的消耗60.离体动物细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的代谢特征是什么？蛋白质的合成、修饰、分泌功能与制药有何关系？ 61.赖氨酸的分离纯化采用（）。62.程细胞系（动物细胞）63.合成氢化可的松的原料有（）（写4个）等。我国主要以薯蓣皂素为半合成的起始原料。64.医疗用抗生素应具备的条件（）。A、难使病原菌产生抗药性B、较大的差异毒性C、最小抑菌浓度要低D、抗菌谱要宽65.工程菌与宿主菌对培养基要求有何不同，为什么？66.简述赖氨酸提取精制的工艺过程。67.传统生化药物的特点为（）和（）。68.简述琼脂扩散法（管碟法）测定抗生素生物效价的原理及实验步骤。 69.简述离子交换的基本原理70.简述固定化细胞的特点？71.简述EBF，FDGF，IL，CSF，IFN，EPO，hGH的中文名称。72.大肠杆菌表达真核基因时对其蛋白质产物（）。A、能进行翻译后修饰，故对蛋白质产物能进行糖基化B、能进行翻译后修饰，故对蛋白质产物不能进行糖基化C、不能进行翻译后修饰，故对蛋白质产物能进行糖基化D、不能进行翻译后修饰，故对蛋白质产物不能进行糖基化73.基因工程技术中常用的载有（）、（）、（）、（）。74.蛋白质类药物有（）和（）两类。75.灭菌操作的微生物杀灭指标是（）。A、无病原微生物B、杀灭率99.9%C、杀灭率99.9999%D、杀灭率99.999999%第1卷参考答案一.参考题库1.参考答案：资源的综合利用与扩大开发；大力发展现代生物技术医药产品；应用化学方法和蛋白工程技术创制新结构药物；中西结合创制新型生物药物。2.参考答案：C3.参考答案：金色链霉菌；卡诺菌4.参考答案：链霉素；链霉胍；链霉糖；N-甲基葡萄糖胺5.参考答案： 1）核酸合成抑制剂 在DNA的合成过程中，细菌必须自行制造叶酸，通过抑制菌体核酸正常代谢而达到杀菌功效的药物。如磺胺类药物、啉酮类药物。 2）蛋白质合成抑制剂 此类药物具有选择性毒性，主要是在于菌体细胞与人类细胞的核糖体组成不同所造成，而核糖体就是蛋白质合成的位点，因此药物制药能选择性地作用在菌体细胞的核糖体上，就能有效地抑制菌体合成蛋白质，进而杀死菌体。如氨基糖苷类、四环霉素类、氯霉素等。 3）细胞膜功能抑制剂 细胞膜是一种由磷脂和蛋白质分子所构成的半透膜，具有选择性通透与主动运输两大功能，同时，由于霉菌和细菌的细胞膜构造与动物细胞的结构不同，所以较容易受到多烯类或多粘杆菌素类抗生素的破坏，因而影响细胞膜的通透性。 4）细胞壁合成抑制剂 菌体的细胞壁结构强韧，能抵抗菌体内强大的逆渗透压，因此具有保护和维持菌体正常形态的功能。由于细胞壁是微生物特有且必需的构造，因此只要能有效地抑制细胞壁合成，就能选择性地杀死病原菌。如青霉素、头孢菌素、万古霉素等。6.参考答案：E7.参考答案： 8.参考答案：D9.参考答案：多氧大环内酯；多烯大环内酯；蒽沙大环内酯10.参考答案：环己酮；异丙醇铝11.参考答案：WFCC；ATCC；IFO；NCTC12.参考答案： （1）微生物发酵工艺：借助微生物具有自身合成氨基酸的能力，通过发酵培养生产氨基酸。大多采用营养缺陷兼结构类似物抗性突变株，还有采用基因工程菌进行生产。 （2）酶法转化工艺：利用酶的立体专一性反应，催化底物生产有活性的氨基酸。具有工艺简便，转化率高，副产物少，容易精制等特点。适用于发酵或化学合成难以生产的氨基酸。 （3）化学合成工艺：通过有机化学合成途径生产氨基酸，其优点是不受氨基酸品种的限制，理论上可生产天然氨基酸和非天然氨基酸。 （4）蛋白质水解工艺：以毛发、血粉等原料蛋白质，通过酸、碱或酶水解形成多种氨基酸的混合物，再经过分离纯化制备各种氨基酸。13.参考答案： 1、管式 流动状态好，流速易控制；安装、拆卸、换膜和维修均较方便；能处理含有悬浮固体的溶液；机械杂质清除比较容易；合适的流动状态可减少浓差极化和污染；单位体积内有效膜面积小。 2、中空纤维式 可耐高压；单位体积内的有效膜表面积比率高；寿命较长，体积小和重量轻；维修不方便；料液需预处理，不能处理含悬浮固体的料液。 3、平板式 可通过增减膜层数来调节流量；构造比较简单，可移动；不易被纤维屑等异物堵塞；密封度要求较高；膜的装填密度低 4、卷式 结构紧凑，单位体积内的有效面积大；具有一定的抗污染性；不易清洗；不适用悬浮颗粒较多物料，需进行预处理；压力降较大。14.参考答案：A,B,C,D15.参考答案：二甲亚砜；甘油16.参考答案： L.谷氨酸发酵微生物的优良菌株多在棒状杆菌属、小短杆菌属、节杆菌属和短杆菌属中。具有下述共同特性： ①细胞形态为短杆至棒状； ②无鞭毛，不运动； ③不形成芽孢； ④革兰氏阳性； ⑤生物素缺陷型； ⑥三羧酸循环、戊糖磷酸途径突变； ⑦在通气培养条件下产生大量L-谷氨酸。17.参考答案：生长与生产非偶联型18.参考答案：（1）盐析法是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定数量的中性盐，使目的物或杂蛋白以沉淀析出，达到纯化目的的方法。 （2）原理：盐溶现象和盐析作用 盐析作用的原理是： 破坏双电层：在高盐溶液中，带大量电荷的盐离子能中和蛋白质表面的电荷，使蛋白质分子之间电排斥作用相互减弱而能相互聚集起来。 破坏水化层：中性盐的亲水性比蛋白质大，盐离子在水中发生水化而使蛋白质脱去了水化膜，暴露出疏水区域，由于疏水区域的相互作用，使其沉淀。 （3）影响盐析的因素 ①无机盐的种类 盐析用盐的选择：盐析作用要强 盐析用盐需有较大的溶解度 盐析用盐必须是惰性的 来源丰富、经济 ②溶质（蛋白质等）种类：Ks、β ③溶质（蛋白质等）浓度：2~3% ④温度 ⑤pH （4）盐析中常用的盐：硫酸铵、硫酸钠、磷酸钾、磷酸钠。 硫酸铵是最常用的蛋白质盐析沉淀剂19.参考答案：逆转录法；化学合成法20.参考答案：非手性侧链、手性侧链、侧链前体物21.参考答案：提取过程中，保持目的物的生物活性十分重要，对于一些生物大分子，如蛋白质、酶及核酸类药物常采用下列保护措施。 （1）采用缓冲系统； （2）添加保护剂； （3）抑制水解酶作用； （4）其他保护措施，避免紫外线、强烈搅拌、过酸、过碱或高温、高频振荡等。22.参考答案：B23.参考答案：1.目的基因的获取 获取目的基因是实施基因工程的第一步。 目的基因的获取方法主要有两种： ①从自然界中已有的物种中分离出来 ②用人工的方法合成。 2.PCR技术扩增目的基因 3. 基因表达载体的构建 基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因 4.将目的基因导入受体细胞 5.目的基因的监测与鉴定24.参考答案：苯甘氨酰氯与7-ADCA缩合法；苯甘氨酸无水酰化法；微生物酶酰化法25.参考答案：B26.参考答案： 1.连消-喷淋冷却连续灭菌流程 培养基输入连消塔的速度＜0.1m/min；灭菌温度为132℃；停留时间20-30s；维持时间5-7min 2.喷射加热-真空冷却连续灭菌流程 适合高温灭菌；稀释培养基；培养基黏度影响；安装使用不便。 3.板式换热器连续灭菌流程27.参考答案：B28.参考答案： 动物细胞培养基的成分主要有糖类、氨基酸、维生素与无机盐、激素及附加成分。 作用：糖类提供细胞生长的碳源和能源。分解后释放出能量ATP。氨基酸可通过生糖或生酮途径转变为糖或脂肪酸，间接提供能量。维生素既不是细胞的物质基础，也不是能量物质，对代谢和生长起调节和控制作用。无机盐是细胞代谢所需酶的辅基，同时保持细胞的渗透压和缓冲PH的变化。激素对细胞的生长有刺激作用。贴附因子的作用是让细胞的贴壁生长。 29.参考答案：（1）水溶液法常用稀盐溶液或缓冲液提取，经过预处理的原料，包括组织糜，匀浆，细胞颗粒，丙酮粉都可用水溶液抽提。 水溶液的pH选择对抽提具有影响，应考虑的因素有： ①酶的稳定性； ②酶的溶解性； ③酶与其他物质结合的性质； ④选择pH的总原则是，在酶稳定的pH范围内，选择偏离等电点的适当的pH。 （2）有机溶剂法某些结合酶，由于和脂质结合牢固，需用有机溶剂除去脂质，且不能使酶变性。常用有机溶剂是丁醇。 ①丁醇性质：亲脂性强、兼具亲水性、在脂与水分子间能起表面活性剂的桥梁作用。 ②丁醇提取方法：均相法和两相法。 （3）表面活性剂法。30.参考答案：淀粉糖；糖蜜；生物素31.参考答案：灰色链霉菌32.参考答案： 初级代谢产物（primary metabolite）指的是与微生物的生长繁殖有密切关系的代谢产物。 包括：氨基酸、蛋白质、核酸、维生素等。 初级代谢产物的特点包括： ①菌体生长繁殖所必需的物质； ②各种微生物所共有的产物； ③调控严格、不积累多余的初级代谢产物。 次级代谢产物（ secongdary metabolite）指的是与微生物的生长繁殖无关的代谢产物。 包括：抗生素、色素、生物碱、毒素、酶的抑制剂等。 次级代谢产物的特点： ①不同的菌种产生不同的次级代谢产物； ②同一菌种在不同生长阶段产生不同的代谢产物； ③次级代谢产物往往是多组分的混合物。33.参考答案：C34.参考答案： ①经动物胰腺提取或纯：猪、牛胰岛素粗体后经凝胶过滤处理后的胰岛素，再用离子交换色谱进行纯化，以进一步降低胰岛素原的含量并去除部分杂质。 ②半合成人胰岛素：以猪胰岛素为原料进行修饰得到的人胰岛素。 ③生物合成人胰岛素：用重组DNA技术生产的人胰岛素，又称重组人胰岛素，为中性可溶性单组分人胰岛素。 ④胰岛素类似物：通过重组DNA技术，对人胰岛素氨基酸序列进行修饰生成的可模拟正常胰岛素分泌和作用的一类物质。35.参考答案： 维生素C分子中含有两个手性碳原子，故有四个光学异构体。其中L（+）-抗坏血酸括性最高，D（-）-异抗坏血酸活性仅为其20％，工业上将其作为食品抗氧剂。D（-）-抗坏血酸和L（+）-异抗坏血酸几乎无活性。36.参考答案：C37.参考答案：①单层贴壁培养。单层贴壁培养是指把细胞贴附于一定的固体支持表面上，生长形成单层细胞的培养方法，适合于贴壁依赖性细胞培养。②悬浮培养。悬浮培养是指细胞在细胞反应器内游离悬浮生长的培养过程，主要对于非贴壁性依赖性细胞，如杂交瘤细胞。③微囊培养。把动物细胞包埋在微载体内或胶囊内固定化后，进行悬浮培养，适合于贴壁依赖性和非贴壁依赖性细胞。④微载体培养。微载体是三维培养系统，有很大的比表面积，细胞贴附于载体上增值，再悬浮于细胞液中，兼具有贴壁和悬浮培养的双重优点。38.参考答案： 链霉素在中性溶液中以三价阳离子形式存在，可用离子交换法 方法进行提取。 链霉素分子中含有很多亲水性基团，故易溶于水，而难溶于有机溶剂。 链霉素是一种有机碱，可以和很多无机酸和有机酸形成盐类，医疗上使用的是硫酸盐。 坂口反应可以检测胍基。 在稀碱溶液中，链霉素降解为链霉胍 和链霉二糖胺，后者进一步水解为链霉糖 和 N-甲基-L-葡萄糖胺，而链霉糖经分子重排形成麦芽酚，遇氯化高铁溶液呈紫色，利用此反应可测定链霉素的效价。 链霉素分子中的醛基和伯胺的反应在链霉素精制中很重要。39.参考答案：苯乙酸或其衍生物均可作为青霉素G的侧链前体。青霉菌可将前体直接结合到产物分子中，也可作为养料和能源利用。前体究竟通过哪个途径被菌利用，主要取决于培养条件以及所用菌种的特性。 （1）前体对青霉菌的生长发育有毒性，其毒性大小取决于培养基的pH和前体的浓度。针对不同的前提应选择不同的pH；一般认为发酵液中前提浓度始终维持在0.1%为宜。 （2）前体的氧化速率除与培养基的pH有关外还与菌龄有关，苯乙酸被菌体氧化的速率，年轻的菌丝不氧化前体，而仅利用它来构成青霉素分子，随着菌龄的增大，氧化能力逐渐增加。 （3）培养基成分对前体氧化程度有较大影响，合成培养基比复合培养基对前体的氧化量少。40.参考答案： 常用的提取方法： 1）水溶液提取 各种水溶性、盐溶性的生物活性物质可以利用水或烯酸、稀碱、稀盐溶液进行提取，这类溶剂提供了一定的离子强度、PH值及相当的缓冲能力。 2）表面活性剂提取 表面活性剂既有亲水基团又有疏水基团，在分布于水-油界面时有分散、乳化和增溶作用。 3）有机溶剂提取 对于水不溶性的脂类、脂蛋白、膜蛋白结合酶等，可采用有机溶剂进行提取。常用的有机溶剂有乙醇、丙酮、丁醇等。41.参考答案：预防类制品；治疗类制品；诊断类制品42.参考答案：次生代谢产物43.参考答案： （一）机械法 特点：处理量大、破碎效率高、速度快、工业上常用手段。 原理：挤压、剪切 （二）非机械法 化学法；酶解法；物理法。 细胞破碎的一般原则：若提取的产物在细胞质内，需用机械破碎法；若在细胞膜附近则可用较温和的非机械法；若提取的产物与细胞膜或壁相结合时，可采用机械法与化学法相结合的方法，以促进产物溶解度的提高或缓和操作条件，但保持产物的释放率不变。44.参考答案：Fc45.参考答案： 为了确保工程菌构建的有效性，必须遵循GMP及其有关生物制品研究技术指导原则，做好菌种的记录和管理。 ①表达载体，详细记录表达载体，包括基因的来源、克隆和鉴定，表达载体的构建、结构和遗传特性。 ②宿主细胞：详细记录宿主细胞的资料，包括细胞株系名称、来源、传代历史、鉴定结果及基本生物学特性等。 ③目标基因序列：目标基因的序列包括插入基因和表达载体两端控制区的核苷酸序列，以及所有与表达有关的序列，做到序列清楚。46.参考答案：C47.参考答案：（1）生物原材料复杂； （2）生化物质种类多、有效成分含量低； （3）药物活性与分子空间构象相关； （4）对制备技术条件要求高。48.参考答案：D49.参考答案： 基因工程技术是将重组对象的目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建成工程菌（或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。 主要程序 上游阶段 ⒈目的基因和载体的获得 ⒉构建DNA重组体 ⒊DNA重组体转入宿主菌 ⒋构建工程菌 下游阶段 ⒌工程菌发酵 ⒍表达产物的分离纯化 ⒎产品的检验等50.参考答案：反应速度；反应方向；反应深度；产品构型51.参考答案：①溶解粗干扰素：配置缓冲液（超纯水，pH7.5磷酸缓冲液，0.45μm滤器和10ku超滤系统，百级层流下收集），冷却至2-10℃。在均浆器中完全溶解粗干扰素。②等点沉淀与疏水层析：磷酸调节至pH5.0，沉淀杂蛋白，离心收集上清液（含有人干扰素）。用NaOH调节上清液pH7.0，并用5M NaCl调节溶液电导值180ms/cm，上样，进行疏水层析，利用干扰素的疏水性进行吸附。在2-10℃下，用0.025M磷酸缓冲液（pH7.0）+1.6M NaCl进行洗涤，除去非疏水性蛋白。用0.01M磷酸缓冲液（pH8.0）进行洗脱，收集洗脱液，干扰素。或②等电点沉淀与盐析：磷酸调节pH4.5，调节电导值40 ms/cm，2-10℃静置过夜，除杂蛋白。1000ku超滤膜过滤，除去大蛋白。调整溶液pH8.0，10ku超滤膜，0.005M缓冲液。③阴离子交换层析与浓缩：0.01M磷酸缓冲液（pH8.0）平衡树脂，盐浓度线性梯度5~50ms/cm进行洗脱，2-10℃，配合SDS收集干扰素峰。把目标馏分合并，调整溶液pH和电导值，10ku超滤膜，0.05M醋酸缓冲液（5.0）中透析。④阳离子交换层析与浓缩：用0.1M醋酸缓冲液（pH0.5）平衡树脂。上样，相同缓冲液冲洗。盐浓度线性梯度5-50ms/cm进行洗脱，配合SDS收集干扰素峰。合并馏分，10ku超滤膜系统。⑤凝胶过滤层析：0.15M NaCl的0.01M磷酸缓冲液（pH7.0）清洗系统和树脂。上样，相同洗脱液进行洗脱。合并干扰素部分。⑥无菌过滤分装：0.22μm膜过滤干扰素溶液，分装，-20℃以下的冰箱中保存。52.参考答案：异质性53.参考答案：A54.参考答案： 链霉素提取采用离子交换法方法，一般过程为发酵液的过滤及预处理、吸附和洗脱、精制及干燥等过程 发酵液 → 过滤 → 吸附 → 洗脱 → 脱色、中和、精制 →精制液脱色、浓缩 → 成品浓缩液 →无菌过滤得水针剂→无菌过滤+干燥得粉针剂 目前生产上采用什么树脂提取链霉素。羧酸树脂的钠型55.参考答案：1）生物资源主要有动物、植物、微生物的组织、器官、细胞与代谢产物。2）应用动植物细胞培养与微生物发酵技术也是获得生物制药原料的重要途径。3）基因工程技术与细胞工程技术和酶工程技术是开发生物制药资源的新途径。56.参考答案：微生物发酵；生产化学全合成；半合成生产57.参考答案： 58.参考答案： 动物细胞培养基的成分主要有糖类、氨基酸、维生素与无机盐、激素及附加成分。 作用：糖类提供细胞生长的碳源和能源。分解后释放出能量ATP。氨基酸可通过生糖或生酮途径转变为糖或脂肪酸，间接提供能量。维生素既不是细胞的物质基础，也不是能量物质，对代谢和生长起调节和控制作用。 无机盐是细胞代谢所需酶的辅基，同时保持细胞的渗透压和缓冲PH的变化。激素对细胞的生长有刺激作用。贴附因子的作用是让细胞的贴壁生长。59.参考答案：菌种发酵；产物分离60.参考答案：①构建红细胞生成素表达载体有两种方式获得编码人红细胞生成素基因。一种是提取胎肝染色体DNA，然后以特异性寡核苷酸为引物，经聚合酶链式反应扩增出人红细胞生成素的基因片段，然后与克隆载体连接，克隆基因。另一种是提取人胎肝mRNA，逆转录合成cDNA文库，进行文库筛选，得到人红细胞生成素基因。②构建表达红细胞生成素的细胞株以二氢叶酸还原酶缺陷型的中国仓鼠卵巢细胞系为宿主细胞。将此细胞培养于100mm培养皿中，待细胞长满至50%～60%时，用无血清细胞培养基淋洗细胞，加入由5ml无血清培养基、10ugprEPO，10ugpDHFR，60ug脂质体组成的转染混合液，37℃培养4小时。吸出培养基，加入含10%胎牛血清的F12培养基，37℃培养过夜。随后在含青霉素、链霉素及10%胎牛血清的DEME中培养，获得抗性克隆。用胰酶消化，以1：5稀释细胞，在培养基中加入MTX至浓度为1nmol/L，继续培养10-14天，至抗性克隆出现。筛选抗性克隆。利用酶联免疫分析法确认所得到的细胞表达人红细胞生成素。61.参考答案：上皮细胞62.参考答案：C63.参考答案：发酵液 → 过滤 → 调pH丁（戊）酯萃取 → 萃取液→  调pH缓冲液萃取 → 丁（戊）酯二次萃取 → 萃取液→ 加丙酮结晶 → 重结晶 →干燥得成品64.参考答案：具有广泛的适应性；萃取效率高，过程易于调节；分离工艺流程简单；适用于化学不稳定性物质的分离；设备技术要求高。65.参考答案： 按生理功能和用途分类： （1）治疗药物：对疑难杂症如肿瘤、爱滋病、免疫性疾病、内分泌障碍等具有特殊的作用； （2）预防药物：对传染病的预防； （3）诊断药物：免疫诊断试剂、单克隆抗体诊断试剂、酶诊断试剂、放射性诊断药物和基因诊断药物等；某些生物活性物质亦是检测疾病的指标，如谷草转氨酶等； （4）其它生物医药用品：生物药物在其他方面应用也很广泛：如生化试剂、保健品、化妆品、食品、医用材料等。 按原料的来源分类： （1）人体组织来源的生物药物：主要有人血液制品类、人胎盘制品类、人尿制品类； （2）动物组织来源的生物药物：动物的脏器、其他小动物制得的药物如蛇毒、蜂毒等。 （3）植物组织来源的生物药物：中草药、有效成分； （4）微生物来源的药物：抗生素、酶、氨基酸、维生素等； （5）海洋生物来源的药物。66.参考答案： 青霉素是发现最早，最卓越的一种B-内酰胺类抗生素，它是抗生素工业的首要产品，青霉素是各种半合成抗生素的原料。青霉素的缺点是对酸不稳定，不能口服，排泄快，对革兰氏阴性菌无效。青霉素经过扩环后，形成头孢菌素母核，成为半合成头孢菌素的原料。67.参考答案： 1）作为反应器用于制药，如EPO、tPA； 2）作为宿主细胞用于制药：如病毒性疫苗； 3）杂交瘤细胞：如单克隆抗体、诊断、治疗； 4）组织再生与器官移植（个体克隆）； 5）本身作为产品：如皮肤移植、干细胞治疗； 6）药学研究应用：如分子与细胞药理、毒理、代谢； 7）生命科学研究：如器官发生、细胞、分子、遗传学。68.参考答案：异倍体69.参考答案：结构类似；功能接近70.参考答案： 发酵工艺过程： 1.生产孢子的制备 2.种子罐培养工艺 3.发酵罐培养工艺 控制原理：发酵过程需连续流加葡萄糖，硫酸铵以及前提物质苯乙酸盐，补糖率是最关键的控制指标：不同时期分段控制。在青霉素的生产中，及时调节各个因素减少对产量的影响，如培养基，补充碳源，氮源，无机盐流加控制，添加前体等；控制适宜的温度和ph，溶解氧以及菌体浓度。最后要注意消沫，影响呼吸代谢。71.参考答案： 双水相萃取技术（Aqueous two-phase extraction，ATPE） 是指把两种聚合物或一种聚合物与一种盐的水溶液混合在一起，由于聚合物与聚合物之间或聚合物与盐之间的不相溶性形成两相的新型分离技术。 双水相体系的形成主要是由于高聚物之间的不相溶性，即高聚物分子的空间阻碍作用，互相无法渗透，不能形成均一相，从而分相。 两相间的界面张力小，易分散，有利于强化相际间的物质传递； 操作条件温和，可以在常温常压下进行，有助于保持生物活性； 传质和平衡速度快，回收率高，分相时间短，能耗较低，而且可以实现快速分离； 大量杂质能够与所有固体物质一起去掉，使整个分离过程更经济； 含水量高，不会引起生物活性物质失活或变性； 一般不存在有机溶剂的残留问题，对人体无害，对环境污染小； 易于连续化操作， 设备简单，并且可直接与后续提纯工序相连接； 分配过程影响因素较多，可以采取多种手段来提高分配选择性或过程收率。 易乳化，部分相分离时间长，成本高，黏度大，回收困难。72.参考答案： 发酵生产：斜面孢子培养、摇瓶种子培养、二级或三级种子罐扩大培养、发酵培养及提取精制等 提取工艺：发酵液（过滤）→原液（吸附）→饱和树脂洗脱→洗脱液脱色、中和、精制→精制液脱色、浓缩→成品浓缩液（1、无菌过滤→水针剂）（2、无菌过滤，干燥→粉针剂）73.参考答案：从动植物器官与组织、细胞培养液、细胞发酵液中提取、分离、精制有关生物药物的过程。74.参考答案：用常规方法消化分散细胞，离心收集（800r/min），按每毫升5*10^6个细胞浓度添加保护剂（甘油或DMSO），然后以1ml量分装于2ml的保存瓶中，在0~4摄氏度预冻2~4小时，摇匀，置于-70摄氏度冰箱冻存。75.参考答案：中国典型培养物保藏中心；中国科学院典型培养物保藏委员会；中国普通微生物菌种保藏管理中心；抗生素菌种保藏管理中心第2卷参考答案一.参考题库1.参考答案：肽聚糖转肽酶及D-丙氨酸羧肽酶；肽聚糖；细胞壁2.参考答案：（1）生长繁殖快，发酵单位高； （2）遗传性能稳定，在一定条件下能保持持久、高产量的抗生素生产能力； （3）培养条件粗放，发酵过程易于控制； （4）合成的代谢副产物少，生产抗生素的质量好。3.参考答案：两个羧基和一个氨基；酸性；带负电荷4.参考答案：D5.参考答案： 因为空气中含有水，醋酐遇水容易水解，如果不抽真空，则醋酐会与空气中的水发生反应，抽去空气后，再加热，则醋酐就在无水环境下进行得到好的产物。6.参考答案：乙醇7.参考答案：A,B,C8.参考答案：A9.参考答案：D10.参考答案：B11.参考答案：副产物12.参考答案：促进消化酶类；消炎酶类；抗肿瘤酶类；与纤维蛋白溶解作用有关的酶类13.参考答案：CH414.参考答案：因为进入衰亡期，细胞发生接触抑制，营养逐渐耗尽，有毒废物积累，细胞变大自溶.这时就要重新接种培养。不能。正常细胞每分裂一次端粒会逐渐缩短，分裂次数过多会衰老直至死亡，但肿瘤细胞除外。15.参考答案：芳香族氨基酸；杂环氨基酸；极性16.参考答案： 1.工程细胞（菌）的构建与实验室研究阶段： （1）目的基因的确定、获取、克隆与鉴定，载体的选择，宿主细胞的选择，DNA重组、重组子筛选鉴定，重组细胞遗传稳定性研究； （2）工程细胞培养条件研究，工艺流程确定，培养过程中宿主/载体表达系统稳定性的研究，培养所用原材料及培养过程的质量控制方法的研究； （3）产物提取纯化工艺的研究，表达产物的鉴定，生物效价检测，安全性检测及质量标准的研究。 2.中试与质量检定阶段： （1）工程细胞（菌）的稳定性考察； （2）培养用原料的质量标准及各种杂质限量研究； （3）设备造型及其材质试验； （4）反应条件限度实验； （5）原辅料、中间体及终产品质量分析方法的研究； （6）分离纯化工艺的研究； （7）安全生产条件及三废处理； （8）生产中试样品并以此样品进行临床前药理、药效、毒理学试验。 3.临床研究阶段： I.期临床试验研究：在卫生部指定的临床基地或经其批准自选临床医院进行。 I.I期临床试验研究：以确定药物有效性和适宜治疗剂量为主要目的，并了解药物毒副反应与禁忌症，掌握病人对药物剂量的反应。 I.II期临床试验研究，重点是考察健康受试者和治疗病人对药物的耐受程度。据此提出安全有效的用药剂量和给药方案。 4.试生产与正式生产阶段： 新药证书 新药产品试生产文号：2年试生产，产品可上市销售，在此期间进行III期临床试验研究，对新药进行社会性考察与评价。 试生产期满后，总结III期临床资料报批，申请转为正式生产。17.参考答案： 1.由氨基环醇、氨基糖和糖组成 2.水溶性好，性质稳定，抗菌谱广，抗菌杀菌能力强，吸收排泄良好18.参考答案：B19.参考答案：在温度下降时,溶质溶解度下降，析晶过程很缓慢，而玻璃棒摩擦器壁可以形成粗糙面，使溶质分子呈定向排列而形成晶体20.参考答案：直接发酵法、微生物生物转化法、酶法、化学合成法、蛋白质水解提取法。21.参考答案：原代细胞系；二倍体细胞系；异倍体细胞系；融合或重组的工程细胞系22.参考答案：丙醇23.参考答案： ①SV40病毒启动子的表达载体，在COS-1中瞬时表达hEPO。 ②昆虫SF9细胞中杆状病毒载体表达rhEPO。产率有所改善，糖基化程度较小。 ③家蚕系统表达，糖基化简单，药物在体内稳定性较低、活性较差等问题。 ④大肠杆菌表达，仅具体外抗原结合活性。 ⑤干扰素-α基因启动子的rhEPO表达载体，BALL-1细胞，产生较高量的rhEPO。 ⑥CHO、BHK细胞中稳定表达，rhEPO与天然EPO结构、活性相似。24.参考答案：C25.参考答案：（1）定期移植保藏法：也叫传代培养保藏法，包括斜面培养，液体，穿刺培养等。它是最早使用并且现今仍普遍使用的方法 （2）沙土管保藏法：保存抗生素产生菌常用的方法，效果较好，操作简便，保存期可达一年以上，变异率低，死亡少，是目前国内使用最广泛的保藏方法。 （3）液状石蜡保藏法：其实是斜面保存的一种方法，能克服斜面保存的缺点，能有效降低代谢活动，推迟细胞退化，效果比一般斜面好得多 （4）液氮保藏法：比其他方法都要优越，被世界公认为防止菌种退化的最好方法。操作程序不复杂，主要有液态氮冰箱等设备 （5）冷冻干燥保藏法：是指液体样品在冷冻状态下使其中水分升华，最后达到干燥。为了防止冷冻干燥过程和保存期间细胞损伤与死亡，需要加保护剂26.参考答案：E27.参考答案： 主要途径： （1）血液乙型肝炎疫苗 血源乙型肝炎疫苗的原材料采自无症状HbsAg携带者献血者的血浆。先使冷冻血浆融化，加入CaCl2脱去纤维蛋白，加入固体（NH）2SO4或饱和（NH）2SO4溶液至相应饱和程度以沉淀HbsAg。 （2）重组痘苗乙型肝炎疫苗 生成重组痘苗乙肝疫苗所用毒种为重组痘苗病毒TH2株，该株系将编码HbsAg的基因拼接入天坛株痘苗基因组中非必需区的TK基因而获得的，宿主细胞采用鸡胚成纤维细胞。 （3）重组CHO细胞乙型肝炎疫苗 国内生产重组CHO细胞乙肝疫苗所用细胞种子为重组CHO细胞C28株，该株系列利用DNA操作技术将编码HbsAg的基因拼接入CHO细胞染色体中而获得。 （4）重组酿酒酵母乙型肝炎疫苗 国内重组酿酒酵母乙肝疫苗生产菌种为2150-2-3株，该株系用基因工程技术将编码HbsAg的基因插入大肠杆菌和酵母菌穿梭质粒Pcl/1中，再转化2150-2-3株，酿酒酵母后筛选出的HbsAg高表达株。28.参考答案：D29.参考答案：音符型青霉菌；产黄青霉30.参考答案：氮源；生长因子31.参考答案：干扰素；白介素－2；肿瘤坏死因子32.参考答案：目标基因的获得；最佳表达载体的构建；工程菌构建33.参考答案：氢化四并苯34.参考答案：A35.参考答案：假单胞杆菌干扰素；工程菌36.参考答案： ①基因工程大肠杆菌的培养 ②基因工程大肠杆菌的发酵工艺 ③重组人生长激素的分离工艺 ④重组人生长激素的纯化工艺 ⑤重组人生长激素制剂的质量控制。37.参考答案：红霉内酯；去氧氨基己糖；红霉糖；碱性38.参考答案：胎盘39.参考答案：溴化氢，Ni ，H2O等易燃易爆化学试剂。40.参考答案：2；441.参考答案：C42.参考答案： （一）提高发酵产量； （二）改进菌种的性能； （三）产生新的发酵产物； （四）去除多余的组分。43.参考答案： （1）难使病原菌产生耐药性：病原菌为了求生存而发挥其适应功能，产生能破坏抗生素的酶，或改变胞浆膜的通透性等； （2）较大的差异毒力：所谓“毒力差异”是指药物对病原和宿主组织的毒力差异； （3）最小抑菌浓度要低 ； （4）抗菌谱要广。44.参考答案： 凝胶色谱 原理：以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的相对分子量（Mr）不同而达到物质分离的一种技术。 特点：惰性；化学性质稳定；带电荷低；分离范围广；颗粒大小适当；机械强度高。 膨胀床色谱 吸附介质颗粒在向上流动液体的作用下膨胀起来，液体中的目标蛋白被吸附于介质上，而细胞和其碎片将通过柱子而流出去，洗脱目标蛋白时从相反方向将吸附介质压紧，再用洗脱缓冲液将目标蛋白洗脱下来。 传统色谱的最大缺点是