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文档简介
ICS65.020.20
B41
DB32
江苏省地方标准
DB32/TXXXX-2022
人载脂蛋白AⅠ羊多抗血清制备技术规程
Technicalregulationsforproductionofsheepanti-human
apolipoproteinAⅠpolyclonalantiserum
江苏省市场监督管理局发布
DB32/TXXXX-2022
人载脂蛋白AⅠ羊多抗血清制备技术规程
1范围
本文件运用于人载脂蛋白AⅠ羊多抗血清制备中羊品种选择和饲养要求、免疫佐剂
选用、抗原乳化、抗原接种、抗体效价评估、抗血清制备的步骤和方法。
2规范性引用文件
本文件无规范性引用文件。
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
载脂蛋白AⅠApolipoproteinAⅠ
用于运输血液中脂类的高密度主要载脂蛋白,A1是载脂蛋白A族中最多的一种组分,
约占HDL颗粒的65%,主要在肝脏、部分在小肠合成。
4羊的选择和饲养要求
选用体重30kg—40kg生长发育良好、10月龄左右的健康羊。采用群养放牧,适当补饲
方式,每天早晚观察羊的健康状况。
5抗原要求
人血清通过优化PEG沉淀、离子交换吸附的方法,纯度达96%。
6免疫佐剂选用
首次免疫佐剂采用弗氏完全佐剂,从第二次免疫开始,采用弗氏不完全佐剂。
7抗原乳化
采用高速剪切法乳化抗原。乳化容器需放置在降温夹套中,将佐剂按需要量置于乳化
容器中,用吸管以60滴/min的速度缓慢加入载脂蛋白AⅠ抗原溶液,用漩涡混合器以1.5万
1
DB32/TXXXX-2022
rmp/min混合均匀,抗原溶液全部加完后,再持续混合15min。
8抗原接种免疫剂量和部位
每只羊免疫抗原剂量为1mg,抗原浓度为1mg/ml,为各部位平均接种。不同免疫次数
间的间隔天数和部位,见表1。
表1免疫剂量和部位
间隔天数
次数免疫接种部位
(d)
第1次0腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧和足窝
腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧和腹股沟
第2次15
淋巴结点
第3~9次9腹股沟、肘部、耳后、额下和背侧
9抗体效价评估
在第7次免疫后动脉采血检测抗体水平,采用琼脂扩散法进行效价测定,效价不低于1:
16,可以判定为合格,可以采血。
10抗血清制备
10.1采血
在检测抗体水平达到效价要求后,采用动脉一次性采血。血液用250mL玻璃瓶收集,
血液占玻璃瓶的1/5。
10.2血清制备
把收集好血液的玻璃瓶,放在37℃恒温水浴锅中1h后,把玻璃瓶从水浴锅中取出;
再把血清从玻璃瓶中吸出;用低速离心机4500rmp/min,离心15min,取上清液,颜色为
乳白色或微黄色,去掉沉淀物杂质。
10.3外观质量
血清应呈黄色或微红色血清状液体,允许少量的絮状物或沉淀。
10.4血清保存
2
DB32/TXXXX-2022
血清用灭菌处理的塑料瓶保存。在-20℃保存3年,或-70℃保存6年。
10.5记录
对生产全过程、血清保存和使用情况记录、归档。
__________________________
3
DB32/TXXXX-2022
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规
则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由江苏丘陵地区镇江农业科学研究所提出。
本文件由江苏省畜牧业标准化技术委员会归口。
本文件起草单位:江苏丘陵地区镇江农业科学研究所、句容市农业农村局、江苏大学、
江苏省农科院。
本文件主要起草人:徐志伟、姚明霞、徐一然、温小林、邓碧华、于建宁、李云、胡
强、张兆丽、谭圣伟、盛媛媛。
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人载脂蛋白AⅠ羊多抗血清制备技术规程
1范围
本文件运用于人载脂蛋白AⅠ羊多抗血清制备中羊品种选择和饲养要求、免疫佐剂
选用、抗原乳化、抗原接种、抗体效价评估、抗血清制备的步骤和方法。
2规范性引用文件
本文件无规范性引用文件。
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
载脂蛋白AⅠApolipoproteinAⅠ
用于运输血液中脂类的高密度主要载脂蛋白,A1是载脂蛋白A族中最多的一种组分,
约占HDL颗粒的65%,主要在肝脏、部分在小肠合成。
4羊的选择和饲养要求
选用体重30kg—40kg生长发育良好、10月龄左右的健康羊。采用群养放牧,适当补饲
方式,每天早晚观察羊的健康状况。
5抗原要求
人血清通过优化PEG沉淀、离子交换吸附的方法,纯度达96%。
6免疫佐剂选用
首次免疫佐剂采用弗氏完全佐剂,从第二次免疫开始,采用弗氏不完全佐剂。
7抗原乳化
采用高速剪切法乳化抗原。乳化容器需放置在降温夹套中,将佐剂按需要量置于乳化
容器中,用吸管以60滴/min的速度缓慢加入载脂蛋白AⅠ抗原溶液,用漩涡混合器以1.5万
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rmp/min混合均匀,抗原溶液全部加完后,再持续混合15min。
8抗原接种免疫剂量和部位
每只羊免疫抗原剂量为1mg,抗原浓度为1mg/ml,为各部位平均接种。不同免疫次数
间的间隔天数和部位,见表1。
表1免疫剂量和部位
间隔天数
次数免疫接种部位
(d)
第1次0腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧和足窝
腹股沟、肘部、耳后、额下、背侧和腹股沟
第2次15
淋巴结点
第3~9次9腹股沟、肘部、耳后、额下和背侧
9抗体效价评估
在第7次免疫后动脉采血检测抗体水平,采用琼脂扩散法进行效价测定,效价不低于1:
16,可以判定为合格,可以采血。
10抗血清制备
10.1采血
在检测抗体水平达到效价要求后,采用动脉一次性采血。血液用250mL玻璃瓶收集,
血液占玻璃瓶的1/5。
10.2血清制备
把收集好血液的玻璃瓶,放在37℃恒温水浴锅中1h后,把玻璃瓶从水浴锅中取出;
再把血清从玻璃瓶中吸出;用低速离心机4500rmp/min,离心15min,取上清液,颜色为
乳白色或微黄色,去掉沉淀物杂质。
10.3外观质量
血清应呈黄色或微红色血清状液体,允许少量的絮状物或沉淀。
10.4血清保存
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血清用灭菌处理的塑料瓶保存。在-20℃保存3
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