多花木蓝盐胁迫的生理响应试验方案

多花木蓝盐胁迫的生理响应试验方案材料和样品：多花木兰种子、NaCl、完全培育液〔硝酸钙1克、磷酸二氢0.25克、氯化钾或硝酸钾0.25、蒸馏水。溶液培育皿设置：设置5组不同培育条件，选择饱满、均匀、外观良好的种子，放入溶液培育皿中，每皿30粒，分别参加一样量的完全培育液及6ml不同NaCl〔浓度梯度：0g/L、2g/、4g/、8g/、12g/1、3、4、5，1335项指标。一、多花木蓝幼苗生长特性指标测定生长指标测定高、茎粗、最大侧根长。根系活力的测定：TTC法材料、设备仪器及试剂〔一〕材料：水培的多花木蓝根系。〔二〕仪器设备：分光光度计；分析天平〔感量0.1mg；电子顶载天平〔感量0.150ml；100ml10ml；10ml；10ml；10ml、1000ml。〔三〕1〕乙酸乙酯〔分析纯2〕次硫酸钠Na2S2O43〕1%TTCTTC1.0g，100ml，用时稀释至4〕磷酸缓冲液1/15molL-1pH751molL-1量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，500ml蒸馏水的烧杯中，冷1000ml；6〕0.4mol·L-14.72g，溶于水中，100ml三、试验步骤TTC0.4%TTC0.2ml10ml25μg、50μg、100μg、150μg、200μg标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。11、12、13，21、22、、32、33，41、42、43，51、52、53，10ml0.4%TTC10ml，37℃下暗保1～3h，此后参加1mol·L-12ml，以停顿反响〔5，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上。3～4ml和少量石英砂一起在研钵内磨碎，以提出甲腙。红色提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二、三次，皆485nm以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出四氮唑复原量。四、结果计算〔mg.g-1〔h〕叶绿素含量测定：分光光度法材料、仪器设备及试剂〔一〕材料：颖的多花木蓝叶片。〔二〕仪器设备：1.分光光度计；2.电子顶载天平〔0.01g；3.研钵；4.5.小漏斗；6.定量滤纸；7.吸水纸；8.擦境纸；9.滴管。〔三〕试剂：96％乙醇〔80％丙酮三、试验步骤取颖多花木蓝叶片，擦净组织外表污物，剪碎〔去掉中脉，混匀。分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙2～3ml9510ml，连续研磨至组织变白。静置3～5min。25ml起倒入漏斗中。25ml，摇匀。95％乙醇为空白，在波长、649nm四、试验结果计算：将测定得到的吸光值代入下面的式子：Ca=13.95A665－6.88A649Cb=24.96A649－7.32A665ab〔C、Cb：mg/L素的浓度。最终依据下式可进一步求出植物组织中叶绿素的含量：干重。二、多花木蓝幼苗生理指标测定超氧化物歧化酶SOD测定：氮蓝四唑(NBT)比色法材料、仪器设备及试剂〔一〕材料：多花木蓝幼苗的叶片〔二〕仪器设备：1.高速台式离心机；2.分光光度计；3.微量进样器；4.荧光灯〔4000Lx；5.试管或指形管数支。〔三1.0.05mol/L〔pH7.82.130mmol/L避光保存；4.100μmol/LEDTANa20.03721gEDTA－Na21000ml5.20μmol/L1000ml试验步骤5ml。1.5～2ml1000rpm20min，SOD5ml〔要求透亮度好2管，按下表参加各溶液试剂〔酶〕用量/ml终浓度〔比色时〕0.05mol/L1.5130mmol/LMet0.313mmol/Lmol/LNBT0.375μmol/L100μmol/LEDTA－Na2液0.310μmol/L20μmol/L核黄素0.32.0μmol/L酶液0.052蒸馏水0.25总体积3.04000Lx20min〔要求各管受光状况全都，温度高时间缩短，低时延长。SOD其它各管的吸光度。结果计算50％为一个酶活性单位表示，按下式SODSOD＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt)AckAEVVtmlWgmgg丙二醛(MDA)含量测定:硫代巴比妥酸法材料、仪器设备及试剂试验材料：多花木蓝幼苗的叶片仪器：分光光度计，研钵，剪刀，恒温水浴，试管20mL×4，离心机。试剂：5%三氯醋酸；0.5%硫代巴比妥酸〔5%三氯醋酸溶解定容；pH7.8。试验步骤3~50.5cm，混匀。2mL0.05mol·L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。将匀浆转移到试管中，再用3mL0.05mol·L-15mL0.5%硫代巴比妥酸溶液，摇匀。将试管放入沸水浴中煮沸10min〔时。到时间后，马上将试管取出并放入冷水浴中。待试管内溶液冷却后，3000×g15min，取上清液并量其体积。以0.5532nm、600nm450nm3．计算含量MDmml-F=6.45D532

D600

0.559D450

VtVWtsVt〔mLVs〔mlFW〔g。叶绿素含量测定:丙酮比色法叶片细胞电导率：将叶片样本在蒸馏水中浸泡8-10小时，再用电导率仪测定。材料、仪器设备及试剂〔一〕材料：小麦、女贞叶片;〔二〕仪器设备：1〕电导仪；2〕天平；3〕温箱；4〕真空枯燥器；5〕抽气机；6〕恒温水浴锅；7〕注射器。试验步骤制作标准曲线：如需定量测定透性变化，可用纯NaCl配成0、10、20、40、80100μg/ml20～25℃2g。0.5～1h，另一份插入水杯中放在室1cm〔大小以够容电极为度，并用玻棒或干净尼龙网压住，20ml，浸没叶片。7～8min缓放入空气，水即被压入组织中而使叶下沉。5〕将抽过气的小玻杯取出，放在试验桌上静置20min，然后用玻棒轻轻搅动叶片，在20～25℃恒温下，用电导仪测定溶液电导率。100℃15min，以杀死植物组织，取出放10min，20～25℃恒温下测其煮沸电导率。〔萎蔫处理与比照〕的叶片细胞透性的变化状况，记录结果，并加解释。损害率=处理电导率/煮沸电导率:80%乙醇提取后用蒽酮比色法测定器材与试剂试验仪器 分光光度计，恒温水浴，电子天平，烘箱，刻度试管，漏斗试验试剂 活性炭，乙醇100mg，80%乙醇配1000mlml100μg1g1000ml〔760ml1.84的浓硫酸用蒸馏水稀释成1000ml〕溶液中，置于棕色瓶中，当日配置使用。试验材料 植物叶片或种子试验步骤可溶性糖的提取15min，70℃过夜。干叶片磨碎后称4ml8080℃水浴中不2ml802，80℃30min，80%10ml，过滤后取滤液测定。绘制标准曲线20ml10min〔水浴重沸后计时625nm密度值，用0线。管号 0123456葡萄糖标准液〔ml〕00.10.20.40.60.81.080%乙醇〔ml〕 1.00.90.80.60.40.20葡萄糖含量〔μg〕 03.1020406080100ml5mg过氧化物酶(POD)活性测定:以愈创木酚作底物,721型可见分光光度计在720nm下测吸光值Cd处理7d的菱叶片；0.1mol/L磷酸缓冲液〔pH6.0，0.1mol/L磷酸缓冲液〔pH7.0〕酚；H2O2。试验步骤提取酶液：叶片2片〔wgFW〕+pH7.0磷酸缓冲液5mL，研磨，离心4000rpm*10min，上清液即为粗酶液。21mol/L磷酸缓冲液〔pH6.0〕50ml+28uL愈创木酚+19uLH2O2(30%)。一般临用前配制，冰箱内短期保存。3.+0.2mL3mL0.2mLOD4703010SOD>1.000计算酶活性选取OD值变化较均匀的一段数据，代入公式计算；OD0.011〔U酶活力=活力单位(U)/w(gFW)W=W〔gFW)*V(mL)/V游离脯氨酸(Proline)含量测定:茚三酮比色法一、原理520nm〕脯氨酸的含量。二、材料、仪器设备及试剂〔一〕材料：待测植物〔水稻、小麦、玉米、高粱、大豆等〕叶片。〕仪器设备：1.722；2.研钵；3.100ml；4.容量瓶；5.6.7.8.9.10.11.；12.滤纸；13剪刀。30ml20ml6mol/L磷酸中，搅拌加热〔70℃〕溶解，贮于冰箱中；2.3％磺基水杨酸：3g100ml；3.冰醋酸；4.甲苯。三、试验步骤标准曲线的绘制〔1〕25mg250ml50ml0.5，1.0，1.5，2.0，2.53.0ml，用蒸馏水定容至刻度，2ml2ml2ml每管在沸水浴中加热30min。〔4〕冷却后各试管准确参加4ml甲苯，振荡30S，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。〔5〕用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白比照，于520nm〔6〕标准曲线的绘制：先求出吸光度值〔Y〕依脯氨酸浓度〔X〕而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2ml测定液中脯氨酸的含量〔μg/2ml〕。样品的测定〔1〕脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各0.5g，分别置大管中，然后向各管分别参加5ml3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提10min，〔提取过程中要常常摇动〕，冷