荧光叶室讲解

荧光叶室讲解荧光叶室讲解刘美玲基因有限公司农业环境科学部北京力高泰科技有限公司2012年12月第2页,共31页，2024年2月25日，星期天第3页,共31页，2024年2月25日，星期天基本原理第4页,共31页，2024年2月25日，星期天荧光发射的基本原理1、光能：使基态Chl变成激发态2、一些电子从基态跃迁至激发态（S1,S2）3、电子从第一激发态落回基态第5页,共31页，2024年2月25日，星期天荧光为什么能够反映光合表现？第6页,共31页，2024年2月25日，星期天叶绿素荧光与光合作用叶绿素荧光主要反映了PSII的生理生化变化。叶绿素荧光：光反应阶段的各种变化。光反应：光合电子传递链，产生ATP（能量）和NADPH（还原力），同时放出O2。暗反应：固定CO2。第7页,共31页，2024年2月25日，星期天光合电子传递链（Z链）远红光第8页,共31页，2024年2月25日，星期天开放的反应中心和关闭的反应中心“关闭”RC：当反应中心的电子受体质体醌（QA）接受电子，全部处于还原状态时，不能再接受电子，我们称之为关闭的RC。“开放”RC：如果QA的电子传出，RC的电子可以完全传递给QA，则此时RC称为开放的RC。

第9页,共31页，2024年2月25日，星期天荧光参数第10页,共31页，2024年2月25日，星期天LI–6400光合荧光仪测定的参数直接测定荧光参数（一）F0：最小初始荧光，又称基底荧光或暗荧光。指经过充分暗适应的光合机构光系统II（PSII）反应中心全部开放时的叶绿素（Chl）荧光发射强度。Fm：最大荧光。指经过充分暗适应的光合机构PSII反应中心完全关闭时的Chl荧光发射强度。第11页,共31页，2024年2月25日，星期天LI–6400光合荧光仪测定的参数直接测定荧光参数（二）F0`：光下最小荧光。在光适应状态下PSII反应中心完全开放时的Chl荧光发射强度。为了使照光后所有的PSII反应中心迅速达到最大开放程度，在测定前先用远红光进行照射。Fm`：光下最大荧光。在光适应状态下PSII反应中心完全关闭时的荧光发射强度。Fs：稳态荧光。又称Ft。第12页,共31页，2024年2月25日，星期天LI–6400光合荧光仪测定的参数间接计算荧光参数（一）Fv/Fm：光化学量子效率，指没有遭受任何环境胁迫并经过充分暗适应叶片，其PSII最大的（潜在）光化学量子效率。一般植物恒定在0.75~0.85。也被称为开放的PSII反应中心的能量捕获效率。Fv/Fm=（Fm–F0）/FmFv`/Fm`：光下开放的PSII反应中心的激发能捕获效率。Fv`/Fm`=（Fm`-F0`）/Fm`第13页,共31页，2024年2月25日，星期天Fv`/Fm`第14页,共31页，2024年2月25日，星期天LI–6400光合荧光仪测定的参数间接计算荧光参数（二）ΦPSII：作用光存在时PSII实际的光化学量子效率，即PSII反应中心电荷分离实际量子效率，反映了被用于光化学途径激发能占进入PSII总激发能的比例，植物光合能力的一个重要指标。

ΦPSII=（Fm`-Fs）/Fm`ETR：电子传递速率。ETR=PPFD×ΦPSII×0.84×0.5第15页,共31页，2024年2月25日，星期天LI–6400光合荧光仪测定的参数间接计算荧光参数（三）qP：光化学淬灭系数。反映了PSII反应中心中开放程度，1–qP则反映了反应中心关闭程度，反映了QA的还原程度。

qP=（Fm`-Fs）/（Fm`-F0`）NPQ：非光化学淬灭系数。反映了植物热耗散的能力的变化,数值范围在0~n(1,2,3,4,5……)。

NPQ=（Fm–Fm`）/Fm`=Fm/Fm`-1qN：非光化学淬灭系数。与NPQ相同，现在使用较少。数值范围为0~1。qN=(Fm–Fm`)/(Fm–F0`)第16页,共31页，2024年2月25日，星期天荧光叶室的安装使用镊子取下内置光量子传感器连接线。排气管和热偶电极。卸下四个螺丝，六个O形密封圈。更换上下盖。连接荧光叶室与分析器之间的电源连接线。连接辅助连线。白色密封圈的更换。暗适应夹子的使用方法。配置软件的安装。第17页,共31页，2024年2月25日，星期天软件介绍第18页,共31页，2024年2月25日，星期天标记含义g行Prss_KPaParIn_μm%BlueParOutμm%Blue蓝色光化学光在内部ParIn_μm中所占的百分比m行FdF/dtFlrCV_%FlrEventF荧光强度dF/dt荧光强度变化率FlrCV_%荧光强度变异系数FlrEvent荧光事件n行F0FmFv/FmF0充分暗适应条件下的最小荧光Fm充分暗适应条件下的最大荧光Fv/Fm充分暗适应条件下光化学量子效率o行Fo¹Fm¹Fv¹/Fm¹FsFo¹光照下的最小荧光Fm¹光照下的最大荧光Fv¹/Fm¹开放的PSII反应中心的激发能捕获效率Fs稳态荧光p行PhiPS2ETRqPqNPhiPS2（ΦPSII）作用光存在时PSII实际的光化学量子效率ETR电子传递速率qP光化学猝灭系数qN非光化学猝灭系数新增参数行介绍第19页,共31页，2024年2月25日，星期天功能行F1F2F3F4F58FlrQuikPik选择荧光设置文件FlrEditor编辑荧光设置DefineActinic定义作用光FlrAdjust设置荧光RcrdingON/OFF记录荧光9MeasisON/OFF测量光开/关Flash饱和闪光DarkPulse暗脉冲Actinic光化学光开/关FarRedIsON/OFF远红光开/关0DoFo测量最小荧光DoFm测量最大荧光DoFoFm测量最小荧光和最大荧光ViewFsh/Drk查看强闪光或暗脉冲0DoFo¹测定Fo¹DoFs测定FsDoFsFm¹测定Fs和Fm¹DoFsFm¹Fo¹测定Fs，Fm¹和Fo¹ViewFsh/Drk查看强闪光或暗脉冲新增功能行介绍第20页,共31页，2024年2月25日，星期天基本实验1、测量F0&Fm。2、测量F0`、Fm`&Fs

。3、测量ΦPSII、qP&qN&NPQ。4、荧光和气体交换参数同时测量。第21页,共31页，2024年2月25日，星期天荧光测量的基本步骤实验1实验2实验3第22页,共31页，2024年2月25日，星期天实验1：

植物暗适应状态的F0、Fm、

Fv/Fm打开一个文件（1，f1），输入文件名，添加备注。设置测量光、饱和闪光（8，f2），保存设置。夹好叶片。等待dF/dt绝对值<5或FlrCV%<1。记录数据（按0，f1/f2/f3/f4）。查看数据（1，f2）。关闭文件（1，f3）。传输文件（同光合操作）。第23页,共31页，2024年2月25日，星期天实验2：

植物光适应状态的F0`、Fm`、Fs、

Fv`/Fm`打开一个文件（1，f1），输入文件名，添加备注。设置测量光、饱和闪光和远红光（8，f2），保存设置。设置活化光强度（8，f3）。打开活化光（9，f4）夹好叶片。等待dF/dt绝对值<5或FlrCV%<1。记录数据（按0，f1/f2/f3/f4）。查看数据（1，f2）。关闭文件（1，f3）。传输文件（同光合操作）。第24页,共31页，2024年2月25日，星期天实验3：

猝灭研究，测量ΦPSII、qP&qN&NPQ1、打开一个文件（1，f1），输入文件名，添加备注。2、设置测量光、饱和闪光和远红光（8，f2），保存设置。3、设置活化光强度（8，f3）。4、夹好暗适应好的叶片。5、等待dF/dt绝对值<5或FlrCV%<1。记录数据（按0，f1/f2/f3/f4）。6、打开活化光（9，f4），等待植物适应光环境。7、等待dF/dt绝对值<5或FlrCV%<1。记录数据（按0，f1/f2/f3/f4）。8、查看数据（1，f2），关闭文件（1，f3）。9、传输文件（同光合操作）。第25页,共31页，2024年2月25日，星期天测量光的设置（8，f2）Intensity：1/0.8;Modulation:0.25;Filter:1;Gain:10.第26页,共31页，2024年2月25日，星期天饱和闪光的设置（8，f2）Duration:0.8;Intensity:7/8;Blu:Nochange;Modulation:20;Filter:50.第27页,共31页，2024年2月25日，星期天远红光的设置（8，f2）第28页,共31页，2024年2月25日，星期天测量光、光化光和远红光的设置

FlrEditor与FlrAdjust的区别按8,f2，进入FlrEditor（编辑荧光设置）按8,f4，进入FlrAdjust（设置荧光）区别和联系：第一种，修改完后，执行；第二种，边修改边执行。第一种设置可以设定小数点后的数值，第二种只能设置1的倍数。都可以设置上述三种光。第29页,共31页，2024年2月25