BioTek-Synergy4-多功能酶标仪中文操作手册1

BioTekSynergy4多功能酶标仪Gene5软件中文操作手册基因有限公司技术支持部2008年基因有限公司仪器应用技术支持亲爱的用户，您好！非常感谢您选购我公司代理的仪器。我们将竭诚为您提供优质的售后服务及免费的专业应用培训。为了更好地进行仪器的应用培训，我们根据您所选购的仪器特点，将需要您配合准备的工作敬告如下：应用培训内容：仪器操作培训和软件应用培训。仪器操作培训包括：仪器的操作、维护和仪器使用注意事项。软件应用培训包括：用户本次所购买的同仪器配套的所有软件的软件应用培训。培训时间：仪器正式安装调试后，本公司2周内派出专业技术人员进行应用培训。应用培训中所需准备的试剂、耗材和仪器均需由用户提供，并在系统培训开始前准备好。我公司将指派专业技术人员免费进行应用培训。用户签收售后服务工作报告后，基因公司正式的系统培训内容即完成。您以后在使用的过程中有任何疑问都可以向我们咨询，我们非常乐意为您们解决应用上遇到的问题。在仪器的使用过程中，无论遇到您认为多么微小或繁琐的问题，请您及时和我们联系，一个及时的通知能节约您的时间，也能帮助我们更好的了解仪器和软件。联系我们时请您提供：仪器型号、软件名称，版本、错误代码、实验目的、操作系统（98/2k/xp/NT）、维修历史等相关资料。联系方式：电话：(021)-330(Shanghai)(010)5(Pekin)(020)-1029(Guangzhou)Gene5入门指南基因有限公司技术支持部编译编者言本手册系原版英文说明书编译而来，希望它能为您操作该软件时带来帮助。由于译者的水平限制，手册中可能存在错误和遗漏，如与英文说明书发生冲突，请英文原版说明书为准。本手册只作为您操作的参考依据，不能作为其他评定标准。基因公司技术支持部应用专员：刘伟Tel:-1057目录BioTek多功能酶标仪系技术特点系统安装条件培训程序及时间安排仪器使用培训软件培训，实验操作及结果分析维护保养七、常见问题处理BioTek多功能酶标仪系技术特点Synergy™4多功能酶标仪是BioTek最新推出的旗舰产品，它秉承了BioTek一贯的优良品质，同时加入了最新的技术和设计理念，使得其应用范围得到了极大的拓展，灵敏度和速度等方面有了质的飞跃。无论是在高通量和药物研发以及广泛的生命科学研究领域，Synergy™4都可以满足实验者的需求。

仪器特点：模块化设计：所有的检测模式分不同模块进行，并可在原有配置上升级

四光栅设计：保证客户进行荧光光谱扫描时的优异性能

深度阻挡滤光片和二向色镜：不同的光路系统针对不同的检测模式，保证各种检测达到最佳性能

产品认证：Synergy™4得到了各试剂厂家的认证，包括Promega公司的DLR™认证和Cisbio的HTRF®TR-FRET认证

Synergy™4多功能酶标仪是唯一将滤光片和四光栅集于一体的机器，采用了Synergy™4专利的HybridTechnology™技术。客户可以得到：基于滤光片光路检测的灵敏度和速度

基于四光栅光路检测的灵活性和便利性用途说明Synergy4是单通道多功能酶标仪。仪器带的软件进行数据分析和采集的功能还没有确定可以作为临床实验数据。用户必须评估该仪器和软件相关的特定试剂。这些评估必须保证仪器性能表现是适用以可适用的试剂作为基础。这款仪器只能通过电脑控制使用。BioTek的Gen5软件包可以完成所有基于仪器的控制。Synergy4可以和标准的机械化设备连用，如BioTek的Bio-Stack微孔板储板器。此款仪器可以进行的用途基于仪器后部面板的标签上。如果有IVD标记，那么可以被用于临床，研发或者其它的非临床目的。如果没有这样的标记那么该仪器仅仅可以用于研发或其它非临床目的。二．系统的安装条件安装仪器需在一个水平的平台上，室温保持在18℃至40该仪器对外界环境的变化十分敏感。请避免以下情况的发生：过度潮湿。电路对水蒸气的凝结十分敏感，如果湿度过高会导致机器不能进行内部的自检。因此仪器摆放的地方湿度应保持在10-85％，不能有水蒸气的凝结。过度光照。明亮的阳光和很强的白炽光会影响机器的光学臂以及读数，降低仪器的线性范围。灰尘。如果微孔板中有过多的微粒子（例如灰尘），读数会受到严重的影响。一个干净的工作区域是保证读数精准的必要条件。如果您准备安装Bio-Stack储板器和SynergyTM2连用，您需要将储板器和酶标仪排列成一排。更多信息请见Bio-Stack的安装一章。SynergyTM4可有两种与电脑连接的接口：RS-232接口和USB接口。两个接口均在仪器的右边。两种接口的缆线均包装在附件箱中。采用何种接口取决于主机适用何种方式。将缆线的一端连接在酶标仪上，另一端插进电脑上。Synergy4是通过在电脑上运行Gen5软件来控制。在安装时将会有一系列的操作必须完成以保证软件被完全安装上。请根据提供的Gen5操作指南来完成软件的安装。三、产品描述Synergy™4是一台多功能、单通道的微孔板检测系统，专为研发和体外诊断设计的。欧盟的用户可从序言中的“用途说明”章节里里获得更多的信息。根据不同的型号，Synergy4的检测模式包括了荧光强度（FI），荧光偏振（FP），时间分辨荧光（TRF），发光和紫外-可见吸收光。Synergy4是模块化设计，每个型号均可以升级；可向BioTek用户中心索取更多详细资料。Synergy4可以使用两种不同的荧光检测系统，分别为基于光栅和基于滤光片的检测系统。有些型号可以同时配备两种系统。下边图表是对两种系统各自的优点和特点进行了一个比较。滤光片系统光栅系统光谱扫描灵活的波长选择操作方便荧光偏振性能+++TRF/TR-FRET性能+++防止激发发射光谱交叉离子通道比率分析发光过滤（BRET）快速波长切换探头位置顶部/底部只有顶部二向色镜顶部支持孔板类型1-1536孔板1-384孔板采用的PMT低噪音PMT（700nm）*红移PMT（800nm）光源卤钨灯（默认），氙闪灯（TRF选择）氙闪灯++表示性能更好+可支持该种检测；比滤光片系统灵敏度稍低*在基于单色器的系统里，采用红移PMT替代低噪音PMT。基于滤光片系统的机型可以配备用户可以自行更换的镜架以及二向色镜。在可进行荧光偏振实验的机型中，该镜架还将配备偏振滤光片。基于光栅的荧光光路系统的机型则提供激发光在250-700nm，发射光在300-800nm区间内并可以以1nm递增的光谱范围选择。此时激发滤光片轮上必须包括一个定制分选的滤光片（上面标有MonoLP滤光片），而且必须还有一个空的位置。化学发光实验则是通过发射滤光轮上空的位置来检测。如有必要的话，滤光片还可用来筛选光线。基于光栅系统的型号可进行发光光谱扫描（但是它不支持终点法和动力学法）。吸收光光路采用了超静氙闪灯以及分选波长的单色器。氙闪灯可以进行紫外和可见光的检测。单色器分选波长范围从200-999nm的光，以1纳米递增。此外还有区域扫描，光谱扫描，和光路径校正等多种读板方式。这款仪器是通过电脑控制，使用BioTek自带的Gen5TM软件可以满足各种操作需要，包括数据采集和分析。Synergy4可与自动机械装置连用，也可与BioTek的Bio-Stack储板器配套使用。Gen5通过支持OLE自动化使Synergy4可轻松的整合到任意一套自动化系统中。Synergy4具独特的4-ZONETM温度控制功能，控温范围可从环境以上4度到50度。内置的孔板振荡功能保证了在孔板中加入不同试剂后能很好的混匀从而更准确的读板。Synergy4可支持标准面积的128×86毫米的1，6，12，24，48，96，384，和1536孔板，以及96孔半域板。（化学发光模式和光栅模式的荧光检测不支持1536孔板）。带有注射器模块的机型支持双注射器分液到1，6，12，24，48和96孔板中。外置的注射器泵可将试剂从供液瓶中压到注射器头中。两个注射器都在底部探头的正上方，可将试剂同时加进一个孔中。四、仪器使用培训第一章：仪器连接1仪器的连接：按照操作指南连接酶标仪与计算机，确保电源线和USB接口正常后，打开酶标仪。2仪器自检：当酶标仪与计算连接好之后，打开Gene5软件，出现欢迎界面向导精灵向导精灵读板系统测试软件培训系统菜单选择SystemMenu>System>ReadConfiguration>Add>选择当前使用的酶标仪的型号和正确的ComPort>TestComm（检测连接）>OK>OK>Close第二章如何编写一个检测程序任何一次检测实验都要以相应的检测程序为基础，因此实验的第一步就是要打开一个程序（protocol），如果是第一次编写程序，建议您在Gene5软件的欢迎界面中选择向导精灵来帮助您完成程序的编写。双击欢迎界面的向导精灵>Next第一步：检测步骤设置双击对话框中Procedure下方彩色图标看到编程界面（根据仪器的配置不同，可以选择的功能按钮为黑色，不能选择的功能按钮变为灰色）PlateType:在右侧的下拉框中选择酶标板的型号和类型1点击Synchronizedmode：选择Well模式（逐孔读数：加一孔读一孔），该工具在使用分液装置时才需要使用；或者Plate模式（整板读数：严格控制每个空的读板参数的一致性）。2：读板，单击Read按钮，设置读板参数Steplabel：对你所进行的读取步骤进行命名Detectionmethod：对你进行的检测类型进行选择（吸光发光荧光）Readtype：对选择的检测类型定义方法（终点法面积扫描法光谱法）Sanning功能，点击右侧则弹出下面的对话框，选择扫描的矩阵选择该功能可以对每个孔进行多次读数，读数的次数通过设置矩阵的大小来控制，读数次数越多准确度越高，但是读板的速度会降低。Spectrum功能跳出如下对话框，设置扫描的起始波长、终止波长和波长间隔Readspeed：定义阅读的速度（正常扫描）Wavelenghs：对检测的波长进行定义，可以同时定义6个检测波长。Fullplate：选择要检测的孔（出现在不同步骤中，可以定义该步骤所对应的孔）Pathlengthcorrection：光程校正（表示对样本孔的值进行光程校正，因为酶标板各样本孔内样本液的高度不一定为1cm，使用该选项，可自动把吸收值校正为光程1cm时的吸收值）3：分液装置（根据实验需要进行设置），单击Dispenser按钮Dispenser：选择进样器（一般为两个），可以按照实验需要对进样器进行设置Tipprimer：选择是否需要将分液器的尖端充盈，防止空气的残留，并选择充盈的液体体积Dispense：选择进样的体积和进样的速度4：振荡，单击Shake按钮Intensity：选择振荡的强度（低速、中速、高速、变速）Duration：选择振荡的时间5：延时，单击Delay按钮Delaytime：选择在何步骤进行停顿以及停顿的时程。6：定义动力学检测，单击kinetic按钮Runtime：运行时间Interval:读数间隔Reads：读数次数Minimuminterval:选择最小读数间隔时间7：对一个孔或者一组孔设置一个标准，只有当指定的孔达到标准，才会开始进行整板阅读。8：温度设定，单击Settemperature按钮Incubatoroff温度孵育关闭Incubatoron温度孵育打开，并设定时间，（并可选择是否预热）9：酶标板的进出控制，单击Plateout/in按钮，根据需要选择酶标板弹出，显示对话框（comment中填写对话），酶标板弹入酶标板弹出无对话框酶标板弹入无对话框10：读数结束选择，是否选择结束前弹出酶标板并添加提示语11：对所编写的程序是否符合逻辑进行有效性的验证，如果不符合显示错误的问题在第几步注意：1以上11个步骤选择并不是每一个程序都要用到而是根据实验的具体需要来进行任意的组合举例：双荧光报告基因检测步骤设置第二步：布板在第一步检测步骤设置成功后，点击OK，精灵向导会提示，点击Next，进入第二步，开始对酶标板进行拍布。双击PlateLayout下方彩色图标进入布板界面Type：选择检测孔的类型，有Empty、Blank、AssayControl、Sample、SampleControl、Standard等可供选择。在下拉框中选择想要定义的孔的类型，然后在下方空白的模式96孔板中进行点击排布。Replicates：Number输入样本的重复数。HorzorVert选择重复样本的排列方式，横排还是竖排。AutoSelect：NextID样本编号自动递增NextDil稀释浓度自动递增。Filling：HorzorVert选择不同样本间的排列方式，横排还是竖排。在Standard中，除了要进行排布以外，还需要进一步输入标准品的浓度和稀释关系。Incr：表示每点之间＋多少浓度Fact：表示每点之间×多少倍浓度布好的平板图如下：实验不同酶标板的排布也不尽相同，实验人员应按照实验的需求对酶标板进行排布。当样品排布好之后点击OK，向导精灵提示这一步结束，点击Next进入下一步。第三步：数据分析设置双击DataReduction下方的彩色图标进入数据分析设置界面，该界面为您提供Transformation、WellAnalysis、CurveAnalysis、Cutoff、Validation、Polarization几个功能模块可供选择。1Transformation：双击按钮，出现Transformation设置界面DataIn：选择下拉列表中选择要进行赋值的数据，如果有多个数据需要，点击下方按钮，进行多重的赋值NewDataName：输入公式计算后数据输出所用的名称Formula：输入需要计算的公式，如上图：分别读取390和540的吸光度值，别将这两种数据赋值为DS1和DS2，公式计算DS1/DS2，将计算值命名为Ratio。如果公式适用于所有孔，则勾选Usesingleformulaforallwells，则所有的孔都进行相应的公式计算；如果只对单独的孔进行计算，则不需勾选Usesingleformulaforallwells，输入公式后双击下方的96孔板示意图中相应的孔，公式自动对相应孔进行计算。选择DeferenceBetweenRows或DeferenceBetweenColumn可以进行行间或列间的差值计算。Gene5同时提供了多重公式计算的功能，如果你还需要对全部的样品或部分样品进行公式计算，则可以再次双击按钮，进行再一次的赋值计算，直到完成全部计算任务。点击OK保存设置。2CurveAnalysis：双击按钮，进入曲线分析界面CurveName：输入曲线的名称DataIn：选择曲线中X、Y轴相对应的数值CurveFit：CurveFitMethod选择曲线类型；XAxisData、YAxisData：选择轴的线性关系lin或者log；ExtrapolationFactor：外推因子，对超出标准浓度的样本进行推算DataOut：Concentrations定义计算值的名称；Interpolations在该对话框内。您可以定义最多25个Y值（公式、数字），其对应的X值（浓度）就会被计算出来，并显示在标准曲线上。每次设置结束点击OK保存设置3Cutoff：双击图标，进入临界值设定界面DataIn选择要进行分类的数据。Symbols输入分类显示的标识。Cut-offs输入临界值，临界值可以是数字，也可以是公式或者孔符号。但是必须是升序排列。进行分类的数据首先和第一个分类的标准（）进行比较，如果小于第一临界值就表示为LOW，如果大于等于第一个临界值则表示为“HIG”，其他依次类推，可以设定不同级别的分类标准。4Validation：双击图标，进入检验值设置界面Validation是一系列的判断标准，用来评估获得的数据是否适宜进行后面的计算，Gene5可定义多达50个检验标准。读板完成后，查看每个检验标准的检验情况(根据实验结果在以下三个对话框中填入信息)：ValidText条件匹配InvalidText条件不匹配，计算的结果可信度不高。UnabletoEvaluateText如果选择的数据不能确定时，可能会出现这种情况。设置成功后点击OK，向导精灵提示这一步结束，点击Next进入下一步。软件提示你选择对得到的结果进行何种方式的输出，根据需要进行选择第四步构建报告模板双击按钮进入构建数据报告模板界面1在左侧列表中选择要输出的原始数据，点击Add，添加到右侧的列表栏中，点击Remove可以移去右侧列表中多选的或者不需要的数据2选择Header或Footer设置报告的页眉或页脚3点击按钮，可以预览模板4当全部设定好后，点击OK精灵向导提示编程成功点击Finish结束编程。第五步保存程序点击File>SaveAs>选择相应的路径，输入程序名称，保存程序以上五步由向导指引完成了一个Protocol的全部设置，这五个步骤可以根据实验的要求进行个性化的组合，使程序的设置满足实验的要求第六步进行一次实验1点击工具栏中图标，打开一个新的实验，弹出程序选择对话框2在相关目录下选择已经保存好的Protocol，打开该Protocol3弹出该程序所对应的检测项目，这时如果需要改变，可以点击上方工具栏中对应的彩色图标，进行修改，直到满意为止4读板，单击按钮，弹出读板对话框，输入相关的信息后点击Read，开始读板。Read读板Re-Read二次读板，将覆盖上次的读数结果EnterManually手动输入检测值ReadFromFile可以导入其它文件读数SimulateRead在没有连接酶标仪的情况下模拟读板过程和数据读数结束点击File>SaveAs>选择相应的路径，输入实验名称，保存实验数据通过以上的设置和运行，完成了一次基本的实验过程总结过程如下使用向导精灵进行程序编辑和读板的全流程1点击向导精灵图标2对程序每一个步骤进行设置3全部设定好之后，点击Next进入下一步，程序进行校验4选择File>Save保存程序，并给程序命名5选择File>NewExperiment，选择刚才编辑好的程序，点击OK6选择ReadPlate，编辑板的信息后，点击Read，开始读板7选择File>Save保存Experiment，并给Experiment命名如何不通过向导，自行编写一个Protocol点击欢迎界面中选项，打开Gene5程序界面File>NewProtocol显示程序编辑元件列表其中已经介绍了Procedure、PlateLayout、DataReduction和ReportBuilder通过对这几项的设置，我们可以完成一次完整的实验，下面介绍一下其他元件的设置。对每一元件进行设置时，双击该图标，进入编辑界面功能双击该图标酶标仪在读板时，软件会显示相应的板信息，在下面的对话框里手动输入提示信息，在读板时会自动提示。功能，创建导出报告模板双击该图标在左侧列表中选择要输出的原始数据，点击Add，添加到右侧的列表栏中，点击Remove可以移去右侧列表中多选的或者不需要的数据，选择结束后点击确定保存设置。功能，创建超级导出报告模板双击上面的图标，Gene5将所选择的导出报告构建在Excel表格中，使用者可以随意安排报告的样式和位置单击PowerExportBuilder工具栏每一项的下拉框，选择要输出的数据，单击Excel表格中某一位置，放置表格，并设置表格的各项参数，模板设置结束后单击工具栏中的Close，保存设置，回到主界面。功能，设计数据显示列表双击上面的图标，对话框中显示出所有数据的表示形式选中任何一种数据显示模式，可以对其进行添加、修改、隐藏/显示以及设为默认值的四种设置。设置结束后，关闭对话框，回到主界面。功能，对编辑好的程序进行设置双击上面的图标，显示对话框，在左侧的下拉菜单中选择程序需要定义的参数，在右侧相应的对话框中对该参数进行具体的设置。功能：为程序自带的一种检测跟踪功能，对实验的结果进行检测，该功能取决于Gene5的运行水平，一个或多个检测程序对正在运行的实验进行监测并创建信息，这些信息是不能编辑和删除的，他们是永久包含在程序或实验中的必要信息文件。第三章Gene5使用技巧利用数据库中的模板程序进行编程：1选择File>OpenProtocol2在弹出的对话框上方单击按钮后选择sample文件夹3双击sample文件夹，出现吸光、荧光和发光三种检测模式的sample文件夹4双击打开要选择的一种检测模式文件夹，再双击protocol5选择适合的程序类型双击打开，可以查看、修改和运行这个程序注意：1如果您对模板程序进行了修改，在选择保存的时候请选择saveas，另存为其他的名称，这样不会将原有的程序覆盖！2如果要使用模板程序进行检测，要事先检验程序的正确性3另外有些模板程序可能与您的酶标仪不兼容，会出现无法打开的情况使用屏幕教程学习如何编程Gene5通过人性化的设计为您提供了屏幕教程，帮助快速掌握软件的使用双击欢迎界面图标，进入教程软件在Demo下拉列表中可以选择需要演示的内容，点击Start开始演示点击工具栏可以实现开始、暂停、快进和后退等功能。如何将数据导入到Excel表格中在File>OpenExperiment中选择打开一个实验的结果选择不同的数据结果，并在Data下拉框中选择要导出的数据点击按钮，将当前看到的数据结果直接导入到Excel表格中。这个方法和PowerExportBuilder的功能不同，PowerExportBuilder是将所有需要导出的数据同时导入到一个Excel表格中。利用Help功能进行实时帮助在Gene5软件中操作的每一个界面中都有Help嵌入功能，对所操作的当前步骤进行实时帮助功能。第四章程序编辑实例（仅显示Procedure、PlateLayout、DataReduction和ReportBuilder步骤）吸收光检测实例：步骤1：设置吸收光波长步骤2：布板，排列样品孔、空白孔和标准孔的位置浓度步骤3：数值转化计算，对检测的数值进行赋值和公式计算并定义标准曲线步骤4：设计报告模板荧光检测实例步骤1：设置激发光波长、发射光波长、滤镜位置、检测灵敏度和光源1）使用光栅进行荧光检测不选择UseFilterWheels，分别在Excitation和Emission框中输入激发和发射光的波长；在Senstivity框中输入检测灵敏度；在LightSource中选择合适的光源，普通荧光检测一般使用Tungsten。2．使用滤光片进行荧光检测选择UseFilterWheels，分别在Excitation和Emission下拉框中选择激发和发射光的波长；在Senstivity框中输入检测灵敏度；在LightSource中选择合适的光源，普通荧光检测一般使用Tungsten。在OpticsPosition中选择合适的二向色镜。步骤2：布板，排列样品孔和标准孔的位置浓度步骤3：步骤3：数值转化计算，定义标准曲线步骤4：设计报告模板发光实例步骤1：设置分液、振动、读数以及样品的分布情况IntegrationTime：选择孔间间隔时间，Emission选择Hole，Sensitvity：敏感度选择100-160之间的数值步骤编辑结束后界面如下：在上面的程序中我们定义了连续的两次读板过程，用不同的分液器对不同的孔进行分液，并读数luc1和luc2步骤2：布板步骤3：赋值转换计算步骤4：设计报告五、常见问题处理错误代码当SynergyTM2系统工作过程中出现错误时，一个错误代码会出现在控制电脑上。例如下图所示，Gen5TM屏幕上出现错误提示，代码为0201：错误代码包括四个字符，第一个是0、1、2、3、4或A：·0、1、2、3或4代表非严重错误，仪器仍然可以对命令作出响应。要了解更多信息，请参见186页开始的非严重错误。您可以根据错误代码查询造成错误的可能原因。·“A”代表在储存和操作过程中产生了严重的错误。这种情况下，仪器可能无法对命令产生响应，需要关机，然后重新开机。您可能需要重新启动仪器后才能使用。见下一页的严重错误。对于一些错误代码，第四个字符给出了该错误的更多信息。如果出现了错误代码，请运行系统检测以对错误进行诊断：·在Gen5中，选择System>Diagnostics>RunSystemTest。如果在您接收完数据后出现错误信息，您可能需要验证所获得的信息的可信度。BioTek服务/TAC的联系方式使用手册中的该部分内容诊断出现的问题，并解决它们。如果您遇到了严重错误或需要帮助，请与BioTek的技术服务中心联系。电话：800－242－4685（美国国内免费咨询电话）802－655－4740（美国之外）传真：802－655－3399E－Mail：※如果在使用配有Bio－StackTM储板器的Synergy2时出现错误，请参见Bio－Stack操作手册。严重错误（A100－A900）严重错误代码的出现表明需要立即对出现的情况作出反应。如果一个错误代码显示出来，请关掉仪器，然后重新开机。如果仪器自检无法通过，例如报警声始终不断，请记下错误代码，并与BioTek技术服务中心联系。代码描述A100任务控制模块不能正常A300马达不能正常工作给错误代码表面有一个马达不能正常工作，但不能确定是哪个马达。A600数据记录超时A700数据读取与记录不一致A900内存分配错误※按下进板按钮，以使警报声停止。非严重错误非严重错误代码表明有不太严重的错误出现。请记下错误代码，或截屏。根据代码在下表中查询可能的原因。只有您可以自行解决的错误列在下表中。如果您在表中找不到相关错误描述或者自己无法解决，请与BioTekTAC联系。※试着在根据屏幕上显示的错误代码，在下表