肾功能检查的方法评价

肾功能检查的方法评价一、概述肾病常用实验室检查尿液检查肾活检病理检查肾功能检查肾小球滤过功能肾小管功能第2页,共27页，2024年2月25日，星期天肾小球功能检查内生肌酐清除率血清肌酐测定血清尿素测定GFR测定血β2-微球蛋白测定肾小球功能检查第3页,共27页，2024年2月25日，星期天肾小管功能检查近端肾小管功能检测：尿

2、α1微球蛋白肾小管功能远端肾小管功能检测昼夜尿比密尿渗量自由水清除值（CH2O）尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶

（NAG）第4页,共27页，2024年2月25日，星期天测定血液中非蛋白氮成份是衡量肾功能的重要指标。血液非蛋白成份：指除了蛋白以外的低分子量含氮化合物的总称，主要是尿素，约占50%左右，其它尚有尿酸（UA）、肌酐（Cr）、氨基酸(aa)、核苷酸、肽类及氨等。它们由蛋白分解而来，主要由肾脏排出。第5页,共27页，2024年2月25日，星期天方法过去是测定NPN（非蛋白氮，non-proteinnitrogen）的量，操作繁琐、结果分析复杂。现在是测定尿素、

Cr等肾功指标。第6页,共27页，2024年2月25日，星期天二、血清尿素（Urea）的测定1、早期的生化方法测定尿素是用氮定量的方法，故临床上仍习惯将尿素测定称为尿素氮测定。每60克尿素含氮28克,1mmol/LBUN=1/2mmol/LUrea。2、尿素来源：是体内氨基酸分解的终产物之一，由氨基酸生成NH3和CO2,主要在肝脏经鸟氨酸循环的代谢过程而逐步合成，经血液运输至肾、由尿液排出体外。全血值较血清值低，临床上常测血清标本。3、单位：WHO推荐用mmol/L

Urea表示浓度。第7页,共27页，2024年2月25日，星期天血清尿素（Urea）测定的方法直接法---二乙酰一肟法：WHO推荐的常规方法间接法---尿素酶法（参考方法）决定性方法---ID-MS第8页,共27页，2024年2月25日，星期天（一）二乙酰一肟法1、原理：尿素与二乙酰一肟在强酸溶液，经加热生成红色二嗪衍生物，称为Fearon氏反应，在540nm比色。二乙酰一肟+H2O+H+

双乙酰+羟胺

双乙酰+尿素+H+

红色二嗪衍生物+2H2O加热加热第9页,共27页，2024年2月25日，星期天2、注意事项①羟胺是干扰物质，要用氧化剂除去，如过硫酸盐、砷酸、过氯酸、氯胺T以及一些阳离子。现在磷酸即做酸介质又作氧化剂。②加入氨基硫脲和Fe3+

（有氧化作用可以消除羟胺的干扰）或Cd2+（镉离子）可增加呈色的稳定性，提高反应灵敏度。③在呈色反应时，A要逐渐降低，30分钟内降低6%，1h降低12%，2h降低15%，所以宜在30分钟内比色。第10页,共27页，2024年2月25日，星期天3、评价

优点①WHO推荐的常规方法，简便快速精确②550nm波长比色最灵敏，且可摒除蛋白干扰，故标本无需作去蛋白处理③线性范围宽，达140mol/L④干扰因素少：黄疸、溶血、BIL一般无影响⑤特异性较好：少量鸟氨酸循环的中间产物（瓜氨酸）等要干扰反应，但含量甚微，可认为无影响第11页,共27页，2024年2月25日，星期天缺点①特异性不如酶法②强酸有刺激性、腐蚀性③反应期间有臭味第12页,共27页，2024年2月25日，星期天（二）尿素酶法（脲酶法）1、原理：先用尿素酶特异性地水解尿素，生成氨和CO2，再用一些方法来定量。尿素+H2O

2NH3+CO2进一步可用以下方法定量：①②③④尿素酶第13页,共27页，2024年2月25日，星期天①Berthelot氏反应（尿素酶-靛酚显色法、酚-次氯酸显色法、脲酶－波氏比色法）：原理：

NH4++NaClO+2酚吲哚酚+5NaCl+5H2O吲哚酚：蓝色解离型（630nm）催化剂：亚硝基铁氰化钠评价：简便，专一性好灵敏度高、结果准确，批内CV2.7-3.9%，血清用量少（10μl即可），最终稀释度大，故不需要去蛋白。参考值：2.86-8.2mmol/LOH-第14页,共27页，2024年2月25日，星期天②尿素酶-纳氏试剂显色法碳酸铵+纳氏试剂+8NaOH→2[Hg2ONH2]I棕黄色沉淀+8KI+6NaI+NaCO3+6H2O③尿素酶-谷氨酸脱氢酶法:α-酮戊二酸+NH4++NAD(P)H+H+反应要消耗NAD(P)H，340nm测A的减少，用终点法或速率法。④电化学方法尿素由非离子化状态→NH4+，可用自动化电导仪测定导电率变化；或用NH4+ISE来测定电位变化。谷氨酸脱氢酶NAD(P)++H2O+谷氨酸第15页,共27页，2024年2月25日，星期天2、评价优点：特异性强、灵敏度高、准确性好要求：①尿素酶是蛋白，故酸、碱、重金属均会破坏或影响其活性。②pH、温度、时间要严格掌握③防止环境中的NH3污染。(①②为酶促反应的特点)第16页,共27页，2024年2月25日，星期天三、肌酐(Cr)的测定肌酐是肌酸的代谢产物，由肾脏排出。血液中也有少量的肌酐，一般与BUN同时测定，用以了解肾功，两者比值(血清BUNmg/dl:血清Crmg/ml)在正常情况下为12~20，计算比值可粗略判断肾性或肾外因素所致的氮质血症，还可测血与尿中肌酐，以计算肾小球滤过率。方法：决定法方法ID-MS、离子交换层析法，

参考方法：HPLC

常规方法：去蛋白苦味酸显色(Jaffe反应)法、不去蛋白Jaffe拟一级动力学法(速率法)酶法第17页,共27页，2024年2月25日，星期天(一)、苦味酸法(Jaffe氏反应)1、原理：Jaffe于1886年报告的。肌酐与苦味酸在碱性介质中生成橙红色(510nm)的苦味酸肌酐复合物。2、消除假肌酐干扰的方法：

假肌酐：血浆中的葡萄糖、VitC、丙酮酸、蛋白质、乙酰乙酸、丙酮等均能与碱性苦味酸作用，生成红色化合物。在Jaffe氏反应中，约占总量的1/4，RBC内更高，故测定肌酐时一般用血浆或血清标本。消除假干扰的方法：①②③④⑤第18页,共27页，2024年2月25日，星期天①制备无蛋白血滤液或在反应体系中加入十二烷基硫酸钠(SDS)，与蛋白形成不与苦味酸起反应的复合物，加入硼砂与葡萄糖、VitC形成非反应的复合物。②二次比色法：特异性高，可用血清直接测定。Jaffe氏反应后先进行第一次比色，测得真假肌酐的总A，再在反应体系中加入肌酐酶或6N的醋酸，以分解真肌酐，再进行一次比色测假肌酐，二次A值之差即为真肌酐的A值第19页,共27页，2024年2月25日，星期天③用硅酸铝土或阳离子交换树脂等吸附真肌酐，再洗脱、Jaffe氏反应。方法繁杂、准确度受影响。④用控制pH值的方法来消除干扰：在pH12时，假肌酐的干扰很小。在pH10时，作一个血清蛋白，减去空白和蛋白干扰纠正常数⑤速率法：特异、快速，用于自动化分析仪在Jaffe氏反应中，乙酰乙酸在最初20秒与苦味酸形成复合物较快，在20~80秒间则主要是真肌酐起起反应，80秒以后是其他干扰物。于是测定反应后20~60秒间A第20页,共27页，2024年2月25日，星期天(二)、酶法评价：特异性高、快速、操作简便。但酶试剂来源较困难、操作中温度、pH值、保温时间均要控制。方法：①部分酶法:Jaffe氏反应后肌酐酶二次比色法、肌酐酶法②全酶法：第21页,共27页，2024年2月25日，星期天1、肌酐亚氨基水解酶(肌酐酶)法肌酐+H2O

NH4++N-甲基乙内酰脲再对NH4+进行定量，方法如下：①NH4+离子选择电极法②用指示剂(溴酚蓝)与铵染色定量③偶联谷氨酸脱氢酶法：

α-酮戊二酸+NH4++NAD(P)H+H+

NAD(P)++H2O+谷氨酸(340nm测定A值变化)注：以上方法测NH4+要防止内源性氨、环境氨的污染肌酐酶谷氨酸脱氢酶第22页,共27页，2024年2月25日，星期天2、肌酐酰氨基水解酶法(全酶法)谷氨酸脱氢酶肌酸肌酐+H2O评价：特异性高、可用终点法或速率法肌酸激酶磷酸肌酸ATPADP丙酮酸激酶丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸NAD(P)H+H+NAD+LDH测定340nmA值的变化第23页,共27页，2024年2月25日，星期天3、HPLC：参考方法应用离子对技术，反向柱，于200nm波长定量评价：高度特异性，但要一定的技术条件第24页,共27页，2024年2月25日，星期天内生肌酐清除率测定(Ccr)外源性肌酐肌酐内生性肌酐

大部分从肾小球滤过，不被肾小管重吸收，排泌量很少，其清除率基本代表GFR。第25页,共27页，2024年2月25