猪伪狂犬疾病

伪狂犬（PR/AD）2DrAladarAujeszky3概要历史：1902年在匈牙利由Aujeszky博士首次发现损失巨大：g/f—12美元隐性感染：病毒与抗体并存常与猪瘟相混淆现状USA--98年底根除PR计划未实现丹麦于88年根除PR国内PR发病率高，损失巨大：1988-1995，广东26个猪场发生，感染母猪19750头，约占100多个集约化猪场母猪总数的30%4伪狂犬病病毒(PseudorabiesVirus,PRV),或奥叶兹基氏病病毒(Aujeszky’sDiseaseVirus,ADV),或猪疱疹病毒1型(HerpesVirus1)结构核衣壳内线形双链DNA有囊膜糖蛋白(Glycoprotein)：14种gB(gII),gC(gIII),gD(gp50),gE(gI),gG(gX),gH,gI(gp63),gK,gL,gM(Mettenleiter,1994)病原学5复制：主要在扁桃体及呼吸道增殖、攻击神经组织及白细胞核内复制，形成包涵体感染特点可终生感染、带毒，个体或场内不易清除潜伏感染：病毒基因组保存于神经元细胞中周期性复发潜伏病毒任何时间可被激活，引起发病引起机体免疫抑制鼠：感染耐过，散毒期可达131天病原学6病原学抵抗力干净水泥地面 1-2小时人皮肤 4小时塑料或钢地板 3天粪或粪池 2天pH6-8 稳定7自然宿主：猪，可耐过急性感染而存活，成为病毒天然贮藏库一些哺乳动物感染：致死性--牛、羊、狗潜伏期：36小时--10天，一般3--6天感染途径通过飞沫、摄食、创伤感染垂直传播病毒血症：白细胞携带病毒突然爆发，持续时间短：<2周流行病学8病毒如何传入猪群？ 途径 机会

猪 ++++ 鼠 +++ 鸟 + 昆虫 + 人 +

空气 ++ 车辆 + 排泄物 ±9传播引进病毒携带猪空气/气溶胶：场--场传播主要原因(Gloster,1984)精液、胚胎移植污染的饲料、饮水其它（野生）动物人流行病学10高度免疫性康复猪具有高度的免疫性：中和抗体可持续18个月人工接种强毒：不发病母源抗体：可达15周，但6-12周具保护力（攻强毒，无临床症状）母源抗体：阻止病毒复制，保护仔猪不感染，切断病毒传播（Bouma等，1977）疫苗免疫可减少损失，可缩短散毒时间，减轻临床症状，但不能阻止病毒感染，感染后，不能阻止病毒在体内复制、散毒，免疫特性11免疫特性免疫后，接触野毒可促进潜伏感染主动免疫和被动免疫不能阻止野毒感染免疫可减少损失，但免疫不当，会使病毒也因此持续存在于猪群中某些药物、化学物品可激活休眠状态的PRV，如地塞米松12

与日龄、毒力、感染剂量、途径、免疫状态、应激、其它疾病、环境、管理等因素有关全身的神经症状：脑膜炎、脑炎呼吸综合征：支气管炎、间质性肺炎、肺水肿病变：肝、脾、扁桃体、皮肤坏死，肠道病变多种形式的繁殖障碍死亡率上升生长速度减慢临床症状皮肤疱疹15哺乳仔猪：高死亡率<15日龄，最急性，病程<72小时，死亡率100%呼吸困难，发烧（41-42℃），大量流涎，厌食，呕吐，腹泻和精神沉郁后躯麻痹而呈犬坐，运动失调，眼球震颤，狂奔，间歇性抽搐，昏迷，24-36小时死亡母猪免疫水平差异：几窝或同一窝内部分仔猪发病，而其它窝或同窝其它仔猪正常临床症状18断奶仔猪：与哺乳仔猪相似，但较轻3-4周死亡率近50%感染3-6天，41-42℃，沉郁，厌食呼吸症状：打喷嚏，流鼻涕，呼吸困难，咳嗽病程持续5-10天，消瘦，体重下降

上述仔猪在体温和厌食症状消失后，可恢复CNS和/或呼吸系统继发感染（P.m，APP），常可致死5-9周龄，良好治疗和管理，死亡率不超过10%存活猪，僵猪，晚上市1-2个月临床症状19育成育肥猪：呼吸症状发病率高，近100%；死亡率低（仅PR），1-2%偶有CNS：肌肉震颤，剧烈抽搐、惊厥41-42℃，沉郁，厌食呼吸症状：打喷嚏，流鼻涕，剧烈咳嗽，呼吸困难（尤其驱赶后）继发感染：PRV抑制AM功能，降低防御功能，易引起继发感染--APP，P.m，损失更大病毒源临床症状20支原体支原体+伪狂犬病支原体与伪狂犬病的互作肺部病变百分比21种猪：繁殖障碍基础母猪和公猪：类似育成育肥猪的呼吸症状后备母猪：流产妊娠母猪感染在：前30天：吸收，返情40-90天：流产、死胎、弱仔产前：仔猪带毒，出生1-2天，死亡繁殖失败：20%死亡率：很少超过2%临床症状22病理变化肝、脾：1-2mm白色坏死点--哺乳和断奶仔猪坏死性扁桃体炎、咽炎、气管炎肺水肿脑膜充血，脑脊液增多肾乳头、皮质淤血点23诊断临床症状仔猪高死亡率和神经症状呼吸症状流产病理变化：肝、脾坏死灶，非化脓性脑炎病毒分离PK-15，18-96小时出现CPHE染色，嗜酸性核内包涵体动物实验：兔或豚鼠，皮内注射脑组织匀浆24脾脏和肝脏的白色斑点25诊断血清学VNIFELISA：区别gE缺失疫苗和野毒感染产生AbPCR：可检测潜伏感染乳胶凝集试验（LA）：快速、可现场操作Dot-ELISA琼胶免疫扩散(Agar-gelimmunodiffusiontest)IHA放射免疫放射免疫扩散酶试验（RIDEA）26诊断组织病理学脑膜炎：血管套管现象肝细胞坏死，核内包涵体间质性肺炎27脑膜炎（血管充血），血管套管现象28肝脏坏死29肝脏坏死，核内包涵体30间质性肺炎和坏死31预防管理+免疫管理引进无PR种猪：主要感染源----阳性猪引进种猪隔离、检疫防止外界车辆携带防止饲料污染鸟类、野生动物、人的携带早期断奶、严格AIAO32预防管理+免疫免疫：弱毒疫苗（MLV）、灭活疫苗弱毒疫苗：免疫原性好Bartha株：第一个MLV株，鸡胚传100代（Bartha1961）BUK株：Skoda，1964TK（胸腺嘧啶激酶基因）缺失的BUK突变株自然缺失糖蛋白gE（g1）的BUK株、Bartha株Begonia株DNA疫苗灭活疫苗：免疫原性与毒力相关安全，无整合与返强的可能免疫效力差，剂量大，过敏反应33控制与净化清群和重新扩群品种价值本地流行情况资金和人员素质扩群的难易度隔离仔猪：设施监测与淘汰：猪群内流行程度（高低）管理与免疫：病毒来源和存在生产阶段34易感猪群中病毒传播感染周期35传染性ADV的分离和/或抗原检测ADV侵入再次激活ADV抗体水平急性感染潜伏感染3急性感染与潜伏感染36美国 始于90年10月份德国始于91年4月份荷兰始于93年9月份>1996,所有EU国家开始伪狂犬病净化使用淘汰方法净化使用免疫接种方法净化英国丹麦控制与净化为什么采用淘汰的方法来净化伪狂犬？37欧洲伪狂犬病的净化净化AD的重要成功因素只使用缺失疫苗：gE优质高效的疫苗毒株：良好的免疫原性和安全性致弱活毒疫苗密集免疫接种计划良好的管理后备种猪的严格控制38免疫接种作用病毒感染所需剂量加大：猪易感性降低给哺乳仔猪提供良好的保护感染后，病程缩短排毒量减少，排毒时间缩短病毒传播机会减少减少潜伏感染和反复感染的机会39免疫攻毒后排毒情况0123456712345678910天排毒BegoniaUnisolveBegoniaDiluvacF.Phlaxiaw/oemuls.Controls40伪狂犬病毒基因图RepeatRepeatULUSgBgCgp80TKgGgIgDgE41病毒主要基因gE（gI）：毒力和鉴别基因。缺失后，减少细胞感染，组织损伤轻微gG（gX）：美国早期用于鉴别TK：毒力基因，病毒能在脑组织内复制，致脑组织损伤。缺失后抑制病毒复制gI（gp63）：缺失可减弱毒力，对免疫作用不大gB（gII）：保护性免疫gC（gIII）：保护性免疫，偶用鉴别gD（gp50）：控制病毒对细胞的穿透能力、保护性免疫rr：毒力基因gB、gC、gD产生保护性抗体WJpathology42AD野毒gE43免疫44标记疫苗gBgCgp80tkgGgIgDgE

gE缺失疫苗免疫猪不产生

gE抗体野毒感染产生

gE抗体45标记疫苗疫苗 缺失

疫苗毒株 缺失

糖蛋白 TKRepeats活苗 “Natural” Bartha gE,gI + + Marker Norden gE + + BUK gE + + NIA-4 gE + + Aloft26 gI + + rDNA Begonia,783 gE - - deletion Omnimark gC - +

PRV-Marker gG - - Tolvid gG - + Alfort26 gE + + MK35 gE - +灭活 rDNA Phylaxia gE + + deletion Geskypur(Ka) gE n.a. n.a.46疫苗特性>105

TCID50/头份Begonia株gE、tk基因缺失：人工基因重组可与现场野毒区分抗体配以敌露威（DiluvacForte）佐剂，可极大地提高免疫力每剂量2ml47Begonia是

NIA-3(2.4-N3A)的一个变异株(Quintc.s.;J.Gen.Virol.,1987)Begonia株的免疫效果NIA-3变异株完全保护猪只、抵抗野强ADV的攻毒所造成的发烧及生长缓慢攻毒后病毒的散播也降至最低，特别是用NIA-3变异株免疫本变异株完全阻止攻毒2/5猪的排毒48与DiluvacForte敌露威配合使用dl-.维生素E为基质的水溶性佐剂引起短时、轻微的局部组织反应疫苗效力保持不变易于注射49表1、注射后发生组织反应的统计50表2、DiluvacForte与不同抗原组合接种后的局部反应照片1、使用2头份剂量DiluvacForte配制的伪狂犬病弱毒疫苗注射后14天的图象照片2、使用2头份剂量NIA-783水剂疫苗注射后14天的图象照片1的显微组织学图象A=Lymphocytic/plasmacellularinfiltration照片2的显微组织学图象B=Lymphocyticandgranulomatousreaction；C=Degenerationofmusclefibers；D=vacuoles照片3、使用2头份剂量DiluvacForte配制的伪狂犬病弱毒疫苗注射后28天的图象照片4、使用1头份剂量油包水乳剂配制的伪狂犬病弱毒疫苗注射后28天的图象照片3的显微组织学图象A=Lymphocytic/plasmacellularinfiltration；E=slightintramuscularfibrosis照片4的显微组织学图象C=Degenerationofmusclefibers；F=Vacuolessurroundedbygranulomatousreaction；G=Multinucleatedgiantcells59表3、DiluvacForte对繁殖性状的影响60图161表4、攻毒前后的平均日增重（克）62图263表5、使用油包水乳剂(o/w)与磷酸盐缓冲液(PBS)配制Bartha

株疫苗接种后血清学阴性育肥猪的百分率（%）64表6、使用DiluvacForte与传统稀释液配制Begonia株疫苗接种后血清学阴性育肥猪的百分率（%）65表7、使用DiluvacForte配制PorcilisBegonia伪狂犬病弱毒疫苗免疫前后的繁殖性状66绵羊、牛、猫、一日龄雏鸡、小鼠安全犬口服时安全安全性：DiluvacForte佐剂的PorcilisBegonia猪接种后不引起生长阻滞不同日龄猪只安全：包括各怀孕阶段母猪无垂直传播其它动物67DiluvacForte佐剂的PorcilisBegonia免疫抗体反应不常与保护力正相关充分的保护力需要体液免疫和细胞免疫的协同:对T细胞的基础免疫,既为诱导充分保护力所必需,又对免疫猪之净化感染野毒起关键作用活毒疫苗能诱导比灭活疫苗更高的免疫力所有猪伪狂犬病毒株虽然毒力可能不同,但抗原性相同切除gE和tk基因后的ADV,免疫原性几乎不变68ADV的净化：DiluvacForte佐剂的PorcilisBegonia免疫程序(I)：种猪群2次基础免疫，间隔4周净化开始时猪场所有种猪所有新引进的后备母猪和公猪每隔4个月所有母猪和公猪同天接种1次69ADV的净化：DiluvacForte佐剂的PorcilisBegonia免疫程序(II)：其它猪肥育猪：2次，间隔4周，首免在10-12周龄自留后备种猪 1、2次，间隔4周，首免在10-12周龄

2、20-26周龄，第3次免疫70鼻腔免疫接种母源抗体半衰期为10天，可维持到16周免疫的母猪，仔猪肌肉注射时，母源抗体干扰明显猪群发生伪狂犬时，可采取鼻腔接种方式：快速产生局部免疫避开母源抗体的干扰阻断潜伏感染免疫力持续时间短71未接种肌肉注射鼻腔免疫试验性严重感染后鼻腔接种可减少排病排毒猪百分比72猪场级肥育猪ADV的净化（荷兰，Diessen地区）免疫接种计划开始73猪场级种猪ADV的净化（荷兰，Diessen地区）12243674（荷兰，Diessen地区）肥育猪生产性能比较（净化前后）75（荷兰，Diessen地区）地区级ADV的净化7600,511,522,5396-196-296-397-197-297-3母猪肥育猪国家级ADV的净化（荷兰，96-97年猪群感染率变化）77只从阴性猪场购买后备公猪/母猪筛选高效疫苗和制定合理免疫程序强化饲养管理,完善生物安全措施全进全出早期断奶(不超过21日龄)将配种至分娩舍，与保育-育成-肥育舍分开强化场内猪只转运管理等泰国正大种猪公司猪伪狂犬病的净化78泰国正大种猪公司猪伪狂犬病的净化

高效疫苗的筛选1977 Dr.BunmebSatyasujaree报道首宗AD爆发1981-1987

使用Intervet和Rhomeriux灭活苗1987-1996 使用Intervet和Rhomeriux基因缺失弱毒苗1997- 使用Intervet

Begonia株疫苗

PorcilisBegoniainDiluvacForte79 免疫程序 英特威建议怀孕母猪 分娩前4-3周 3次/年公猪 2次/年 3次/年