病毒病实验室诊断-病毒的血凝抑制试验（动物微生物学课件）

新城疫血凝与血凝抑制试验1新城疫概述2新城疫血凝试验原理3操作方法鸡新城疫腺胃乳头出血，肌胃黏膜皱襞的脊出血新城疫概述鸡新城疫腺胃乳头出血，肌胃黏膜皱襞的脊出血新城疫概述鸡新城疫卵泡出血新城疫概述鸡新城疫临床症状新城疫概述病鸡呼吸困难，口腔内有粘液新城疫概述病鸡排绿色稀便新城疫概述新城疫血凝与血凝抑制试验试验原理有些病毒表面有血凝素，如禽流感病毒、新城疫病毒等，能与鸡、豚鼠、人等某些动物的红细胞表面受体结合，从而出现红细胞凝集现象，故可以来推测材料中有无该病毒的存在，称为病毒的血凝现象。试验仪器及材料普通托盘天平、普通离心机、微型振荡器（MH-2）、DRAGON微量移液器（0.005～0.05mL）、DRAGON微量移液器（0.1～1mL）、Thermo微量移液器（2～10mL）、板式微量移液器架、96孔V型血凝反应板、烧杯、禽用采血器、具盖塑料离心管、指型离心管、试管架、细记号笔、生理盐水、3.8%柠檬酸钠溶液、新城疫标准抗原75%酒精棉球、干棉球、标签纸、非免疫公鸡等。新城疫血凝与血凝抑制试验操作过程配制1%鸡红细胞悬液新城疫血凝与血凝抑制试验新城疫血凝与血凝抑制试验血凝试验（HA）血凝试验（HA）结果判定凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数，称为该病毒的血凝价或血凝滴度。新城疫血凝与血凝抑制试验新城疫血凝与血凝抑制试验1新城疫血凝抑制试验原理2试验操作方法3试验结果判定新城疫血凝与血凝抑制试验试验原理有些病毒，如禽流感病毒、新城疫病毒等，能凝集某种动物的红细胞，故可以来推测材料中有无该病毒的存在。如有能凝集红细胞的病毒，其凝集性可为相应的抗体所抑制，这种抑制还有特异性，故病毒的血凝抑制试验，可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体，也可用已知血清来鉴定未知病毒。新城疫血凝与血凝抑制试验试验仪器及材料新城疫血凝与血凝抑制试验新城疫血凝与血凝抑制试验操作过程配制4单位病毒液血凝抑制试验（HI）新城疫血凝与血凝抑制试验试验结果判定在红细胞对照孔红细胞完全沉淀，即呈明显纽扣状沉到孔底，并且抗原对照孔红细胞完全凝集于孔壁时观察试验结果，只有当阴性血清与标准抗原对照的HI滴度不大于2log2，阳性血清与标准抗原对照的HI滴度与已知滴度相差在1个稀释度范围内，并且作用阴、阳性血清都不发生自凝的情况下，HI试验结果方判定有效。新城疫血凝与血凝抑制试验新城疫血凝与血凝抑制试验血凝抑制试验（HI）结果判定结合临床进行结果的分析一般认为鸡的免疫临界水平为1:8(成年)或1:16(雏鸡)，随地区不同而稍有差异。

鸡血清HI抗体效价高于1:16时可适当推迟新城疫免疫的时间，HI抗体效价在1:16以下须进行新城疫疫苗接疫种，在新城疫流行的地区或鸡场，鸡的免疫临界水平应稍提高。新城疫血凝与血凝抑制试验结合临床进行结果的分析鸡群的HI抗体水平是以抽检样品的HI抗体效价(㏒2)的几何平均值表示的。如果某鸡群的10份样品中，HI抗体效价(㏒2)为8的有3份样品，为7的有5份样品，为6的有2份样品，它们的平均值为（8*3+7*5+6*2）/（3+5+2）=7.1平均水平在4(10g2)以上说明该鸡群为免疫鸡群。新城疫血凝与血凝抑制试验结合临床进行结果的分析大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于0.1%一0.5%，小型鸡群，抽样率应有所增加，一般认为理想的抽样率应为2.0%。鸡群接种新城疫疫苗后，经2-3周测血清中的HI抗体效价，若提高2个滴度以上，表示鸡的免疫应答良好，疫苗接种成功，若HI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。新城疫血凝与血凝抑制试验结合临床进行结果的分析若有10%以上的鸡群出现11(10g2)以上的高血凝抑制滴度，说明鸡群已受新城疫强毒感染。若监测鸡群的免疫水平，用血凝抑制滴度在4(10g2)的鸡群保护率为50%左右，在4(10g2)以上保护率达90-100%，在4(10g2)以下的非免疫鸡群保护率约9%，免疫过的鸡群为43%。