HYT 078-2005 海洋生物质量监测技术规程

中华人民共和国海洋行业标准海洋生物质量监测技术规程Technicalspecificationofmarinebiologicalqualitymonitoring2005-05-18发布 I Ⅱ 2规范性引用文件 3监测方案设计 3.1监测生物 3.2测站布设 3.2.1布设原则 3.2.2布站方法 3.3监测频率和时间 3.4监测项目 24.1样品采集 4.1.1样品类型 4.1.2现场样品采集 4.1.3采样工具与试剂 34.1.4采样现场描述与样品登记编号 34.2样品的保存与运输 34.2.1样品的保存 4.2.2样品的运输 34.3样品制备 4.3.1贝类样品的制备 44.3.2虾样制备 4.3.3鱼样制备 4.3.4大型藻类样制备 44.3.5无菌样品制备 5质量保证 45.2样品测定的质量保证 56样品测定及其监测结果 7监测报告编写 5附录A(规范性附录)海洋生物样品采集登记 6附录B(规范性附录)海洋生物标本标签 7附录C(规范性附录)海洋生物质量监测样品测定方法 8附录D(规范性附录)海洋生物质量监测结果报表 9附录E(规范性附录)海洋生物质量监测报告格式与内容 I本标准的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E均为规范性附录。本标准由国家海洋局海洋环境保护司提出。本标准由国家海洋标准计量中心归口。本标准起草单位：国家海洋环境监测中心。Ⅱ为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国海洋环境保护法》,防止和控制海洋生物的污染，在保障经济发展的前提下，更有效地保护海洋生物资源和其他海洋资源，有利于海洋资源的可持续利用，维护海洋生态平衡，提高海洋生物质量，保障人体健康，特制定本标准。1海洋生物质量监测技术规程本标准规定了海洋生物质量监测的主要内容、技术要求和方法。本标准适用于中华人民共和国领海、毗连区、专属经济区、大陆架以及中华人民共和国管辖的其他海域所进行的海洋生物质量监测工作。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB17378.2海洋监测规范第2部分：数据处理与分析质量控制GB17378.6海洋监测规范第6部分：生物体分析GB17378.7海洋监测规范第7部分：近海污染生态调查和生物监测HY/T069—2005赤潮监测技术规程海洋生态环境监测技术规程国家海洋局2002原子荧光法测定海洋生物体中汞的技术规程国家海洋局2003原子荧光法测定海洋生物体中砷的技术规程国家海洋局20033监测方案设计3.1监测生物海洋生物质量监测以贝类为主，根据海区(滩涂)特征可增选鱼、虾和大型藻类作为监测生物。3.2测站布设3.2.1布设原则监测站位布设的主要原则为：——监测站的布设应覆盖或代表监测海域(滩涂)生物质量，样品采自潮间带、潮下带和外海海域；——依据监测海域(滩涂)范围，以最少数量测站，所获取的数据能够满足监测目的需要；——尽可能沿用历史测站，尽量使监测站位与沉积物污染调查站位相一致；——不同类型滩涂、增养殖海区，测站布设应有所不同，采样站位尽可能避开污染源；——应考虑监测海域(滩涂)的水动力状况和功能，开阔海区，测站可适当减少，半封闭或封闭海区，测站可适当加密。3.2.2布站方法具体站位布设应根据实际情况，以覆盖和代表监测海域(滩涂)生物质量为原则，可采用扇型(河口近岸海域)或井字型、梅花型、网格型方法布设控制断面和监测站位。3.3监测频率和时间根据各地的具体情况，在生物成熟期(如贝类的成熟期一般为8月-10月)进行一次生物质量监测，不同年份的采样时间应保持不变。3.4监测项目海洋生物质量监测推荐项目为：石油烃、总汞、镉、铅、铜、砷、六六六(666)、滴滴涕(DDTs)、多氯联苯(PCBs)、粪大肠菌群、异养菌总数量、腹泻性贝毒(DSP)、麻痹性贝毒(PSP)。24.1样品采集4.1.1样品类型4.1.1.1生物残毒样品生物残毒样品主要包括：——潮间带测站定点采集的贝类样品；——沿岸潮下带和外海海域的贝类、鱼、虾、大型藻类样品。4.1.1.2赤潮生物、细菌学指标样品赤潮生物、细菌学指标样品主要包括：——赤潮生物样品(应符合HY/T069—2005的相关规定);——异养菌样品；——粪大肠菌群样品。4.1.1.3贝毒样品贝毒样品可选用生物残毒样品中所采集的贝类样品。4.1.2现场样品采集4.1.2.1采样的一般要求与原则现场采集样品，一定要保持生物个体不受损伤。栖息在岩石或其他附着物上的生物个体，要用凿子铲取。栖息在沙底或泥底中的生物个体可用铲子采取，或铁钩子扒取。在选取生物样品时要去掉壳碎的或损伤的个体(指机械损伤),但在特殊情况下(如溢油或其他事故),对采集的生物样品不能丢掉，保存起来，带回实验室分析其原因。要挑选完好的生物个体，每种样品必须选择大小、性别、年龄都相同(或相近)的个体，记录其体长(贝类应记录壳长、壳高和壳宽)、性别、年龄等。现场无法确定生物种名时，需将该样品(取2个～3个个体)放在广口玻璃瓶中，用5%福尔马林溶液或70%酒精溶液保存，待实验室进一步鉴定。在养殖场、渔船、渔港采集或选取样品时，其原则同上。在大尺度全海域同一监测项目中，应在相同(或相近)的采样时间内，尽可能地采集相同年龄、相似个体大小的同一种贝类，以提高监测结果的可比性。采集贝类一般推荐如下8种：菲律宾蛤仔、文蛤、四角蛤蜊、紫贻贝、翡翠贻贝、毛蚶、缢蛏、僧帽牡蛎。其中，长江以北沿岸优先采集顺序为紫贻贝、菲律宾蛤仔、文蛤、四角蛤蜊、毛蚶；长江以南沿岸优先采集顺序为翡翠贻贝、僧帽牡蛎、缢蛏、毛蚶、菲律宾蛤仔、文蛤。优先选择采集贻贝类和蛤类，河口区优先选择采集文蛤。4.1.2.2贝类样品的采集挑选采集体长大致相似的贝类个体约1.5kg左右(如牡蛎为40个左右、贻贝为60个左右)。如果壳上有附着物，应用不锈钢刀或比较硬的毛刷剥掉，彼此相连个体应用不锈钢小刀分开。用现场海水冲洗干净后，放入双层聚乙烯袋中冰冻保存(一10℃～—20℃),分别用于生物残毒分析或贝毒检测。4.1.2.3大型藻类样品的采集采集大型藻类(次年以上的)样品1.5kg左右，用现场海水冲洗干净，放入双层聚乙烯袋中冰冻保存(-10℃～-20℃)。4.1.2.4细菌学指标样品的采集检测细菌学指标(粪大肠菌群、异养细菌)的生物样品，现场用凿子铲取栖息在岩石或其他附着物上的生物个体。栖息在沙底或泥底中的生物个体可用铲子采取，或铁钩子扒取。在选取生物样品时要去掉壳碎的或损伤的个体(指机械损伤),将无损伤、生物活力强的个体装入预先做好标记的一次性塑料袋中。然后将样品放入冰瓶冷藏(0℃～4℃)保存不得超过24h,全程应严格无菌操作。34.1.2.5虾、鱼类样品的采集虾、鱼类等生物取样量为1.5kg左右，为了保证样品的代表性和分析用量，应视生物个体大小确定生物的个体数，保证选取足够数量(至少需要100g肌肉组织)的完好样品用于分析测定。用现场海水冲洗干净，冰冻保存(-10℃~-20℃)。4.1.3采样工具与试剂4.1.3.1采样工具采样工具主要包括：——铁锨(控取栖息在泥沙中的动物);——铁把手(采集栖息在浅层泥沙中的贝类);——凿子(采集栖息在岩石或岩石缝隙内的生物，如牡蛎等);——解剖不锈钢刀(各种类型镊子及剪不锈钢刀);——冰瓶(保存样品);——组织捣碎机(样品匀浆);——医用酒精棉球；——一次性塑料袋；——一次性乳胶手套；主要试剂为：——酒精(70%):95%的酒精70mL,加25mL蒸馏水；——福尔马林(5%):40%的甲醛水溶液5mL,加入95mL蒸馏水或海水；——碘液：2g碘化钾加1g碘溶于200mL蒸馏水。4.1.4采样现场描述与样品登记编号4.1.4.1采样现场(环境)描述野外采样时，要做好观察和记录。采样时，应注意观察生物个体的颜色、个体大小、性别、年龄、死亡数量、机械损伤或其他异常个体，记录生物个体生活的环境等。必要时应进行拍照或录像。生物样品的名称一律用学名和拉丁名同时记录。4.1.4.2样品登记编号样品采集后，按照附录A表A.1的内容填写样品采集登记表。同时还要根据附录A表A.1中相应的样品编号，写一纸签或竹签(见附录B表B.1),放入瓶内或袋内，并在瓶外或袋外写上相应的样品编号，以防差错。记录时用铅笔，不能用墨水笔和圆珠笔。4.2样品的保存与运输4.2.1样品的保存样品运输前，应根据采样记录和样品登记表清点样品，填好装箱单和送样单，由专人负责，将样品送回实验室冷冻保存。生物残毒和贝毒检测样品应保存在一20℃以下的冰柜中。细菌学指标样品冷藏(4℃左右)运回实验室后，应立即进行无菌样品制备和检测。4.2.2样品的运输样品采集后，若长途运输，需把样品放入样品箱(或塑料桶)中，对无须封装的样品应将现场清洁海水淋洒在样品上，保持样品润湿状(不得浸入水中);若样品处理，须在采样24h后进行，可将样品放在聚乙烯袋中，压出袋内空气，将袋口打结。将此袋和样品标签一起放入另一聚乙烯袋(或洁净的广口玻璃44.3样品制备4.3.1贝类样品的制备将贝类样品解冻后，用蒸馏水或清洁海水漂洗每一个个体，并使其自然风干。用卡尺测定每一个贝类的体长(从壳前缘至后缘的距离),称重量，并记录。有足丝的贝类需将足丝拉出，用于分析石油烃、666、DDTs、PCBs、DSP、PSP的样品，可用不锈钢刀切开闭壳肌组织(不得丢失体液)将多个个体合并匀浆，放入广口玻璃瓶中密封，冰冻保存。4.3.2虾样制备将样品解冻后，用蒸馏水或清洁海水漂洗每一个个体并风干。测定并记录每一个体体长和重量，然的样品，用不锈钢刀沿腹部外甲边缘切开，用镊子或竹签取下内侧的外甲并弃去，用另一把不锈钢刀搅4.3.3鱼样制备取解冻并清洗好的个体样品，测定鱼的叉长(从头至尾鳍的长度)并称量。中、小型鱼样，需逐个测量并称重。然后用不锈钢刀切除胸鳍并切开背鳍附近自头至尾部的鱼皮，在鱼鳃附近和尾部，横过鱼体各切一不锈钢刀，在鱼腹部，鳃和尾部两侧各切一不锈钢刀(均切在鱼体一侧，但不得切得太深，以免切开内脏，沾污肉片)。然后将鱼皮和肉分开，谨防外表皮沾污肉片，用另一把不锈钢刀将肌肉与脊椎分离，用镊子或竹签将肌肉取出。若一侧肌肉不足，用同样方法取出另一侧肌肉。将足够分析测定用的鱼同样方法取出另一侧肌肉。将足够分析测定用的鱼样合并匀浆后放入聚乙烯袋中封闭，冰冻保存。4.3.4大型藻类样制备取大型藻类样品清洗干净后，除去根和末稍，切成段(或细条),然后在组织捣碎机中匀浆后，放入广4.3.5无菌样品制备用于生物体内细菌学指标检测的无菌样品制备，应符合海洋生态环境监测技术规程的相关规定。5质量保证——制定一个科学的采样计划，选择合理的采样地点、采样时间和采样方法，确保采样的代表性；——严格各类样品采集、取样、包装、运输和储存的一切器具的选择及按规定清洗，防止样品被——过滤膜和相关设备必须保持清洁，用酸和其他洗涤剂清洗；——消过毒的瓶子必须保持在灭菌状态直到样品采集。消毒纸或铝箔失效，或顶部封口破裂，则——样品保存或运输过程中要冰冻保存，不得放在水中；——样品采集、运输和交接等过程应有相应的记录。55.2样品测定的质量保证海洋生物样品测定中的质量应符合GB17378.2、GB17378.6、GB17378.7、HY/T069—2005、海洋生态环境监测技术规程、原子荧光法测定海洋生物体中汞的技术规程和原子荧光法测定海洋生物体中砷的技术规程的相关规定。6样品测定及其监测结果海洋生物质量监测样品测定方法应符合附录C表C.1的相关规定。海洋生物质量监测结果应按附录D表D.1填写。7监测报告编写海洋生物质量监测报告编写应符合附录E的规定。6(规范性附录)海洋生物样品采集登记海洋生物质量监测的生物样品采集应按表A.1填写。表A.1海洋生物样品采集登记表产地(站号)日期种名地名性别7(规范性附录)海洋生物标本标签用于海洋生物质量监测的生物样品应按表B.1填写标本标签。表B.1海洋生物标本标签产地(站号):8海洋生物质量监测样品的测定方法应按表C.1的相关分析项目2总汞原子荧光法测定海洋生物体中汞的技术规程3镉4铅5铜6砷荧光法测定78滴滴涕9多氯联苯9(规范性附录)海洋生物质量监测结果报表海洋生物质量监测结果应按照表D.1填写。表D.1海洋生物质量监测结果报表(鲜重)站号样品总汞镉铅铜砷异养细菌注：666含量为四种异构体含量的总和，DDTs含量为四种异构体含量的总和，PCBs含量为各单体含量的总和。(规范性附录)海洋生物质量监测报告格式与内容E.1文本格式E.1.1文本规格海洋生物质量监测报告文本外形尺寸为A4(210mm×297mm)。E.1.2封面格式海洋生物质量监测报告封面格式如下。第一行书写：×××海区或省市×××海域(一号宋体，加黑，居中);第二行书写：海洋生物质量监测报告(一号宋体，加