临床标本的细菌学检验标准操作规程

临床标本的细菌学检验标准操作规程

脑脊液标本细菌学检验标准操作规程........................................147

穿刺液标本细菌学检验标准操作规程.......................................149

生殖道标本细菌学检验标准操作规程........................................151

粪便标本细菌学检验标准操作规程..........................................153

脓液伤口标本细菌学检验标准操作规程.....................................156

中心静脉导管标本细菌学检验标准操作规程.................................158

微生物检验实验室真菌标本检验标准操作规程...............................159

微生物检验实验室血液及骨髓标本细菌学检验准操作规程.....................162

文件编号：

XXX医院检验科XXX-JY-CZ-WSW-0570

脑脊液标本细菌学检

微生物检验实验室作版本：20140601

验标准操作规程

业指导书生效日期:20140615

共2页

1.目的

规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可

士.

4^o

2.适用范围

脑脊液培养。

3.标本

3.1标本类型脑脊液。

3.2标本采集由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液

2-3mL盛于无菌容器中送检。脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅

速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易于死亡。因此，脑脊

液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检。

3.3标本拒收标准

3.3.1标本标识与化验申请单不符。

3.3.2标本未用无菌试管留取。

3.4标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置

于室温，放置时间不应超过2小时，切勿放冰箱，否则影响检出率。

4.试剂、仪器

4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、

麦克凯平板、相关生化试剂等。

4.2VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药

敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、

药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。

4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、C02培养

箱等。

5.细菌鉴定和药敏质控

参见《质量管理程序》

6.检验步骤

接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

6.1涂片检查

6.1.1一般细菌涂片检查外观浑浊或脓性脑脊液可直接涂片，无

色、透明的脑脊液，应3000r/min离心10-15分钟后取沉淀物涂片、革

兰染色、就、镜检。根据染色及形态特征，常可初步提示细菌的种类。

6.1.2结核分枝杆菌涂片检查参见《分支杆菌属检验标准操作规

程》

6.1.3新生隐球菌涂片检查取脑脊液的沉淀物作墨汁负染色，或

取脑脊液的离心沉淀物接种于沙氏培养基，置于35摄氏度培养2-5

日，根据菌落特性，涂片染色镜检作出报告。必要时可作生化反应进

一步鉴定。

6.2分离培养

6.2.1用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种

于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯平板，置于5%〜10%CO2环

境中35摄氏度培养18〜24小时，观察细菌生长情况，根据菌落特点、

形态与染色及生化反应鉴定细菌，并作药敏试验。

6.2.2结核分枝杆菌培养参见《分支杆菌属检验标准操作规程》

7.结果报告

无论是涂片还是培养，一旦检测到阳性细菌应立即电话或书面通

知临床医师。查见细菌，报告菌名和药敏结果。经培养48小时，仍无

细菌生长者，报告“培养2日无细菌生长”。

8.注意事项

8.1抽取的脑脊液分置于无菌试管中，迅速送至实验室，病毒、

真菌分支杆菌培养样本置于4。C保存待送。

8.2流感嗜血杆菌容易在外界环境中死亡，脑膜炎奈瑟菌对寒冷

和干燥均很敏感，在体外容易自溶，故不论是涂片镜检还是进行培养,

均应及时送检。

9.临床意义

正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示细菌性（急性化脓性或

结核性等）脑膜炎。化脓性脑膜炎最多见脑膜炎奈瑟菌，肺炎链球菌

居第二位。3个月至5岁儿童细菌性脑膜炎的主要致病菌是流感嗜血

杆菌，新生儿脑炎多由大肠埃希菌、B群溶血性链球菌和脑膜败血黄

杆菌引起的，特别是早产的婴儿。结核分枝杆菌引起结核性脑膜炎。

85%脑脓肿病人脑脊液培养可检出厌氧菌，有时可为厌氧菌和需氧菌

混合感染。

10.危急值报告

直接涂片找到细菌或培养阳性均作危急值报告。若检测出脑膜炎

奈瑟菌则应做传染病报告。

参考文献

[1]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL32:2008医学实验室

质量和能力认可准则在微生物学检验领域的指南.2008

[2]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科

学技术出版社，2007

[3]叶应妩，王毓三，申子瑜主编全.国临床检验操作规程第.三

版.南京：东南大学出版社，2006

[4]MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9th

ed.Washington：ASMPress,2007

[5]IS015189:2007医学实验室-质量和能力认可准则.2007

编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员

批准人：_______

XXX医院检验科穿刺液标本细菌学检文件编号：

微生物检验实验室作验标准操作规程XXX-JY-CZ-WSW-0571

业指导书版本：20140601

生效日期:20140615

共2页

1.目的

规范穿刺液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可

士.

4^o

2.适用范围

穿刺液标本培养。

3.标本

3.1标本类型胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。

3.2标本采集采用无菌方法采集体内可疑感染部位的液体约

2ml,注入无菌试管，或抽取穿刺液l-2ml注入多功能液体培养瓶，或

抽取穿刺液2-5ml注入血培养瓶，混匀，立即送检。如怀疑厌氧菌感

染，应做床边接种或接种运送培养基。

3.3标本拒收标准

3.3.1标本标识与化验申请单不符。

3.3.2标本不是无菌留取，容器不符合要求。

3.4标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置

于室温，放置时间不超过2小时。

4.试剂、仪器

4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、

麦克凯平板、相关生化试剂等。

4.2VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药

敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、

真菌鉴定卡（YBC）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参

见试剂说明书。

4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、C02培养

箱等。

5.细菌鉴定和药敏质控

参见《质量管理程序》

6.检验步骤

接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

6.1涂片检查脓性标本直接涂片。浆液性标本先离心

（3000r/min）15分钟，取沉淀物涂片作革兰染色，观察有无细菌，以

及细菌的形态。

6.2分离培养

6.2.1一般细菌培养接种于接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板

和麦康凯（或EMB、中国蓝）琼脂平板，置于5%-10%CO2环境中，

35°C培养18-24小时，根据菌落及染色形态特点，作出初步判断。

6.2.2增菌-分离培养法将多功能体液培养瓶颠倒混匀使液体覆

盖整个固体面，然后置35°C孵育培养箱（固体面在上，液体在下）。

次日观察固体表面菌苔生长及瓶中液体是否浑浊。如发现有菌生长，

立即涂片镜检、生化鉴定和药敏试验。此法可提高阳性检出率。

6.2.3厌氧菌培养床边接种或从厌氧菌运送培养基转种后，立即

置于厌氧环境中，35°C培养24-48小时；挑取可疑菌落作耐氧试验,

确定为厌氧菌。

6.2.4结核分枝杆菌培养：参见《分支杆菌属检验标准操作规

程》。

7.结果报告

培养48小时无菌生长，报告“培养2日无细菌生长”。查见细菌,

报告菌名和药敏结果。

注意事项

标本的采集一定要严格履行无菌操作技术，避免污染。

加入抗凝剂的标本（如胸腹水）采集后要与抗凝剂充分混匀并及

时送检。

体液均需做厌氧培养，故运送过程严格厌氧环境。

临床意义

各个部位穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液等）的

细菌学检查对于确定该部位是否有细菌感染具有重要的诊断价值。正

常穿刺液是无菌的，若从病人穿刺液中查见致病菌或条件致病菌则提

示该部位有细菌感染。胸腔感染的病原菌以结核分枝杆菌多见，其次

是金黄色葡萄菌、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等，腹

腔感染的病原菌以肠道细菌如大肠埃希菌、溶血性链球菌、粪肠球菌,

以及结核分枝杆菌多见；心包炎和关节炎以金黄色葡萄菌、溶血性链

球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等多见。

10.危急值报告

涂片发现细菌或培养阳性均需要及时向临床报告结果。

参考文献

[1]中国合格评定国家认可委员会CNAS-CL32:2008医学实验室

质量和能力认可准则在微生物学检验领域的指南.2008

[2]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学

技术出版社，2007

[3]叶应妩，王毓三，申子瑜主编全.国临床检验操作规程第.三版.

南京：东南大学出版社，2006

[4]MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington：

ASMPress,2007

[5]ISO15189:2007医学实验室-质量和能力认可准则.2007

编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员

批准人：_______

文件编号：

XXX医院检验科XXX-JY-CZ-WSW-0572

生殖道标本细菌学检

微生物检验实验室作版本：20140601

验标准操作规程

业指导书生效日期:20140615

共2页

1.目的

规范生殖道标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可

士.

4^o

2.适用范围

生殖道标本培养或涂片检查。

3.标本

3.1标本类型生殖道标本。

3.2标本采集

3.2.1女性由临床医师用无菌棉拭子采集阴道、宫颈分泌物。

怀疑盆腔炎厌氧菌感染时，由医师用注射器从阴道后穹窿穿刺抽取标

本，立即床边接种于厌氧菌平板。

3.2.2男性翻转包皮，用肥皂水清洗尿道口，清水冲洗，采集

尿道口分泌物。采集前列腺液时，先冲洗尿道和膀胱，用手指从肛门

内按摩前列腺，使前列腺液溢出。

3.2.3梅毒螺旋体标本从外生殖器的硬下疳处蘸取渗出液，置

于载玻片上，加盖玻片后立即送检。

3.3标本拒收标准

3.3.1化验申请单与标本不符。

3.3.2标本不是用无菌容器留取。

4.试剂、仪器

4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、

麦克凯平板、相关生化试剂等。

4.2VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药

敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPD、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、

真菌鉴定卡（YBC）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参

见试剂说明书。

4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、C02培养

箱等。

5.细菌鉴定和药敏质控

参见《质量管理程序》

6.检验步骤

接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

涂片检查

6.1.1革兰染色镜检观察阴道分泌物中有无细菌，以及细菌形

态和染色性，尤其注意观察有无白细胞内外的革兰阴性双球菌（淋病

奈瑟菌），以及有无覆盖大量革兰阴性菌的上皮细胞，（线索细胞，提

示可能有阴道加特纳菌感染）。

6.1.2梅毒螺旋体图涂片检查直接暗视野检查，观察有无纤细、

发亮、前后旋转的密螺旋体，或冯泰纳染色，观察有无棕黑色的密螺

旋体。

6.2分离培养

6.2.1一般细菌培养接种于血琼脂平板和麦康凯平板，置于

5%-10%CO2环境中，35°C培养18-24小时。

6.2.2淋病奈瑟菌培养接种于GC琼脂平板，置于5%-10%CO2

环境中，35°C培养18-24小时，观察有无较小、灰白色、露滴状菌

落形成，进一步生化鉴定。

6.2.3阴道加特纳菌培养接种于5%羊血琼脂平板，

5%-10%CO2环境中环境培养48小时，观察有无形成针尖大小

（0.3-0.5）、圆形、光滑、不透明、不溶血（在人血或兔血琼脂平板上

可出现B溶血）的菌落。

结核分枝杆菌培养参见《分支杆菌属检验标准操作规程》。

7.结果报告

报告菌名和抗菌药物药敏结果试验结果。

注意事项

取阴道分泌物之前避免性生活、阴道冲洗和用药。

临床意义

正常的内生殖道是无菌的，而外生殖器（包括男性尿道口和女性

阴道）有多种细菌寄生，如尿道口的常见有葡萄球菌、类白喉棒状杆

菌和非结核分枝杆菌，阴道常见有乳杆菌、双歧杆菌、消化球菌等。

查见病原菌提示有细菌感染，如急、慢性前列腺炎，睾丸炎、精囊炎、

附睾炎、阴道炎，急慢性淋病等。常见病原菌主要有葡萄球菌、肠球

菌、链球菌、淋病奈瑟菌、大肠埃希菌、变形杆菌等。

参考文献

[1]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL32:2008医学实验室

质量和能力认可准则在微生物学检验领域的指南.2008

[2]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学

技术出版社，2007

[3]叶应妩，王毓三，申子瑜主编全.国临床检验操作规程第.三版.

南京：东南大学出版社，2006

[4]MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington：

ASMPress,2007

[5]ISO15189:2007医学实验室-质量和能力认可准则.2007

编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员

批准人：_______

文件编号：

XXX医院检验科XXX-JY-CZ-WSW-0573

粪便标本细菌学检验

微生物检验实验室作版本:20140601

标准操作规程

业指导书生效日期:20140615

共3页

1.目的

规范粪便标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。

2.适用范围

粪便培养。

3.标本

3.1标本类型粪便、直肠拭子。

3.2标本采集

3.2.1自然排便采集自然排便后，挑取其脓血、黏液部分2-3g,

液体粪便取絮状物2-3ml,盛于灭菌容器内，或置于保存液(运送培

养基)、增菌培养基中送检。

3.2.2直肠拭子如不易获得粪便时，或排便困难病人及婴儿，

可用直肠拭子采取，即以无菌棉拭用保存液或生理盐水湿润后，插入

肛门内4-5cm(幼儿约2-3cm)轻轻转动取出，插入卡-布(Cary-Blair)

运送培养基内或无菌容器内送检。

3.2.3粪便标本应该立即送检，室温保存不超过2小时，如不能

及时送检放入磷酸盐甘油(PH7.0)或转运培养基，但不能超过24小

时。培养艰难梭菌的标本保存于-20°C以下。培养沙门菌和志贺菌的

标本应放置磷酸盐甘油溶液中保存。保存弯曲杆菌和弧菌的标本，需

加CaC12(100mg/L)试剂。

3.3标本拒收标准

3.3.1粪便标本放置时间超过2小时。

3.3.2送检的粪便标本混有尿液。

3.3.3直肠拭子未置于运送培养基中。

4.试剂、仪器

4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、

麦克凯平板、相关生化试剂等。

4.2VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药

敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、

真菌鉴定卡（YBC）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参

见试剂说明书。

4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、C02培养

箱等。

5.细菌鉴定和药敏质控

参见《质量管理程序》

6.检验步骤

接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

涂片检查粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形

态无法分辨是否为病原菌。因此

粪便标本一般不作涂片检查。只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致

腹泻时，才作直接涂片检查（观察动力和菌群比例）。

培养

6.2.1沙门-志贺菌培养参见《沙门菌属检验标准操作规程》、《志

贺菌属检验标准操作规程》。

6.2.2致病大肠埃希菌培养参见《致病大肠埃希菌检验标准操

作规程》。

6.2.3霍乱弧菌培养参见《霍乱弧菌检验标准操作规程》。

6.2.4副溶血弧菌培养参见《副溶血弧菌检验标准操作规程》。

6.2.5小肠结肠炎耶尔森菌培养参见《小肠结肠炎耶尔森菌检验

标准操作规程》。

6.2.6空肠弯曲菌培养《空肠弯曲菌检验标准操作规程》。

6.2.7金黄色葡萄球菌培养《金黄色葡萄球菌检验标准操作规

程》。

6.2.8艰难梭菌培养取水样或黏液样粪便立即接种于环丝氨酸

头抱西丁果糖琼脂（简称CCFA）平板上，并将粪便作102-106稀释

后定量接种。35°C厌氧环境下培养48小时后，选择粗糙型黄色菌落,

移种于葡萄糖苞肉培养基作毒素测定；同时涂片，悬滴检查动力、革

兰染色及生化鉴定。

6.2.9真菌培养参见《结核分枝杆菌检验标准操作规程》。

6.2.10气单胞菌和邻单胞菌的培养参见《气单胞菌检验标准

操作规程》和《邻单胞菌检验标准操作规程》。

6.2.11结核分枝杆菌参见《结核分枝杆菌检验标准操作规

程》。

7.结果报告

8.注意事项

查出肠道致病菌，报告其菌名和药敏结果。

8.1空肠弯曲菌是微需氧菌,初次分离时需5%-10%CO2和85氮。

8.2痢疾病人要采集大量脓血标本另行培养。

8.3粪便标本有很多杂菌，但不能由此认为粪便标本的采集就无

需注意杂菌污染，为防止污染必须注意标本的采集方法。

9.临床意义

正常情况下肠道中多种细菌寄生，包括大量的厌氧菌、肠球菌、

大肠埃希菌、肠杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌等。引起感染性腹泻的

病原微生物有：（1）细菌性：产毒素型腹泻，包括霍乱孤菌、肠毒型

大肠埃希菌等；侵袭型腹泻，包括志贺菌、肠致病型大肠埃希菌和肠

侵袭性大肠埃希菌等；食物中毒，包括沙门菌、金黄色葡萄球菌、副

溶血弧菌、蜡样芽抱杆菌和肉毒梭菌等；伪膜性型肠炎，包括艰难梭

菌或金黄色葡萄球菌；慢性腹泻，可能由结核分枝杆菌引起。（2）真

菌性：念珠菌、毛霉菌等。（3）病毒性：轮状病毒等。

危急值报告

培养出霍乱弧菌、伤寒沙门菌、致病性大肠埃希菌0157等及时

按传染病报告，同时送CDC复核。

参考文献

[1]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL32:2008医学实验室

质量和能力认可准则在微生物学检验领域的指南.2008

[2]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学

技术出版社，2007

[3]叶应妩，王毓三，申子瑜主编全.国临床检验操作规程第.三版.

南京：东南大学出版社，2006

[4]MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington：

ASMPress,2007

[5]ISO15189:2007医学实验室-质量和能力认可准则.2007

编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员

批准人：_______

XXX医院检验科脓液伤口标本细菌学文件编号：

微生物检验实验室作检验标准操作规程XXX-JY-CZ-WSW-0574

业指导书版本：20140601

生效日期：20140615

共2页

1.目的

规范脓及伤口标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确

可靠。

2.适用范围

脓液培养或涂片检查。

3.标本

3.1标本类型脓液。

3.2标本采集

3.2.1开放性脓性和脓性分泌物用无菌盐水或75%酒精擦去表

面渗出物，用拭子深入溃疡处采集2支拭子，1支为涂片检查用，1

支作培养用。

3.2.2大面积烧伤的创面分泌物用灭菌棉拭取多部位创面的脓

液或分泌物，置灭菌试管内（注明采集部位）送检。

3.2.3封闭性脓肿消毒局部皮肤或粘膜表面后，用注射器抽取，

将脓液注入多功能培养瓶或无菌试管内送检。疑为厌氧菌感染时，应

作床边接种或置厌氧运送培养基内送检。

3.3标本拒收标准

3.3.1标本标识与化验申请单不符。

3.3.2标本不是无菌留取。

3.3.3送标本的时间在采集标本后超过2小时。

4.试剂、仪器

4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、

麦克凯平板、相关生化试剂等。

4.2VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药

敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、

真菌鉴定卡（YBC）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参

见试剂说明书。

4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、C02培养

箱等。

5.细菌鉴定和药敏质控

参见《质量管理程序》

6.检验步骤

接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

6.1涂片检查革兰染色镜检，报告“查见革兰X性菌，形似X

X菌”或报告“未查见细菌”。

6.2培养

6.2.1一般细菌培养标本接种于接种于血琼脂平板、巧克力琼脂

平板和麦康凯（或EMB、中国蓝）琼脂平板，置于5%-10%CO2环境

中，35°C培养18-24小时，根据菌落及染色形态特点，作出初步判

断，作出初步判断，再按各类细菌的生物学特性进行鉴定。

6.2.2厌氧菌培养取脓液标本接种于厌氧血琼脂平板及其他选择

平板，置于厌氧菌环境培养，根据生长情况及涂片染色结果，按厌氧

菌生物学特性进行鉴定。

6.2.3嗜血杆菌及奈瑟菌培养接种于巧克力琼脂平板，置

5%-10%CO2环境中培养。

6.2.4结核分枝杆菌培养参见《结核分枝杆菌检验标准操作规

程》。

6.2.5真菌培养可用沙氏培养基。

7.结果报告

查见致病菌，报告菌名和药敏结果。

8.注意事项

8.1对于某些特殊病人（如气性坏疽病人），在菌种鉴定及药敏试

验结果尚未报出之前，根据涂片镜检情况，采取治疗措施。

8.2厌氧菌培养取得样本后，拭子应立即置于厌氧运送管，尽可

能少让样本暴露于空气中。穿刺时最好以针筒直接抽取，避免接触环

境中氧气。

9.临床意义

从脓液及创伤标本中能检出的病原菌微生物种类很多，最常见的

由葡萄球菌和链球菌引起的局部化脓性感染，包括有毛囊炎、疳、痈、

甲沟炎、扁桃体炎、乳腺炎、中耳炎、外耳道拜肿、外耳道炎、细菌

性结膜炎、脓疱疮、外科切口及创伤感染等。化脓性骨髓炎、化脓性

关节炎的主要致病菌是金黄色葡萄菌。慢性骨髓炎和慢性化脓性关节

炎病原菌中，除上述细菌外，主要为结核分枝杆菌。脓液标本中可检

出铜绿假单胞菌、变形杆菌和类白喉棒状杆菌等，常为继发感染或污

染所致。气性坏疽主要致病菌为产气荚膜梭菌，其次为水肿梭菌、败

毒梭菌和溶组织梭菌等。坏疽常继发葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌

或其他需氧菌感染。器官脓肿和机体深部组织的脓肿多为厌氧菌感染。

危急值报告

培养出产气荚膜梭菌及时按传染病报告。

参考文献

[1]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL32:2008医学实验室

质量和能力认可准则在微生物学检验领域的指南.2008

[2]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学

技术出版社，2007

[3]叶应妩，王毓三，申子瑜主编全.国临床检验操作规程第.三版.

南京：东南大学出版社，2006

[4]MurrayPR.ManualofClinicalMicrobilogy.9thed.Washington：

ASMPress,2007

[5]ISO15189:2007医学实验室-质量和能力认可准则.2007

编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员

批准人：________

文件编号：

XXX医院检验科中心静脉导管标本细XXX-JY-CZ-WSW-0575

微生物检验实验室作菌学检验标准操作规版本:20140601

业指导书程生效日期:20140615

共1页

1.目的

规范中心静脉导管标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果

准确可靠。

2.适用范围

中心静脉导管细菌培养。

3.标本

中心静脉导管标本。

4.试剂、仪器

4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、

麦克凯平板、相关生化试剂等。

4.2VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌

药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、

真菌鉴定卡（YBC）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参

见试剂说明书。

4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、C02培

养箱等。

5.细菌鉴定和药敏质控

参见《质量管理程序》

6.检验步骤

用无菌镣子将5cm导管（近心端）在血琼脂平板和麦康凯平板上

交叉滚动四次，然后弃之，在35°C,5%-10%CO2孵育箱培养18-24

小时，根据菌落及染色形态特点，作出初步判断，再按各类细菌的生

物学特性进行鉴定。

7.结果报告

7.1若48小时无细菌生长，报告“培养2日无细菌生长”。

7.2报告菌名和抗菌药物药敏试验结果。

8.注意事项

8.1如血琼脂平板上生长》15个菌落，提示有潜在导管相关性感

染，应进行细菌鉴定和药敏试验，同时建议抽血作血培养。

8.2若为2种细菌生长，且菌落计数均215个菌落/平板，均应进

行细菌鉴定和药敏，建议作血培养确证。

9临床意义

判断中心静脉导管是否有细菌生长，指导临床医师是否拔除导管

还是保留导管。

参考文献

口］吴爱武主编.床微生物学与检验实验指导.第三版.北京：人民

卫士出版社，2007

⑵中华医学重症医学专业委员会.血管内导管相关感染的预防

与治疗指南(2007).2007

编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员

批准人：________

XXX医院检验科真菌标本检验标准操文件编号：

微生物检验实验室作作规程XXX-JY-CZ-WSW-0576

业指导书版本:20140601

生效日期：20140615

共3页

1.目的

规范真菌标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可

士.

4^o

2.适用范围

各类真菌检测的标本。

3.标本采集及处理

3.1标本类型痰、尿、粪、脓液、脑脊液、血、拭子、皮屑、

甲屑、气管穿刺抽取的痰液等。

3.2标本采集与处理

3.2.1痰液、气管穿刺抽取的痰液。

3.2.2尿液早晨中段尿10ml,离心取沉淀液1ml,作真菌涂片

及培养。

3.2.3口腔、咽喉、外耳道、阴道、和直肠粘膜的标本应迅速

放入内装l-2ml无菌蒸镭水的试管送检。常规KOH涂片及SDA培养。

3.2.4粪便无菌盒送检，挑取黏液、脓血接种于含氯霉素培养

基上。

3.2.5脓液脓液标本应置无菌广口有盖玻璃瓶或小的无菌平皿

中，立即送检。

3.2.6脑脊液采集于无菌试管3-5mL立刻送检。离心后以无菌

吸管吸取离心沉淀物1mL作墨汁涂片镜检和培养(SDA)25°C及

37°一周。

3.2.7血液分别于左右两侧无菌抽血3-5mL立即置于脑心浸出

液肉汤。

3.2.8体液支气管积液、关节腔积液、心包积液、腹水等10ml

离心沉淀后取0.5ml沉淀液作直接镜检（注意颗粒）及培养。

3.2.9组织标本置于无菌平皿中立即送检，置无菌研钵或组织

匀浆器加2ml蒸储水，研磨成浆或切成l-2mm3的小块作真菌直接镜

检（KOH涂片）及培养。

3.2.10皮屑皮损的边缘、疱壁、脓液、深层趾（指）间皮屑或

活动边缘皮屑。取材前75%酒精棉球消毒取材处，标本作真菌直接镜

检（KOH涂片）及培养。

3.2.11甲屑用细铿或牙签研磨钻取病甲与正常甲交界处并且贴

近甲床部的甲屑，标本用酒精浸泡待干燥后以十点接种法分别种于含

放线菌酮及不含放线菌酮的SDA平皿，25°C-28°C培养3周，并

同时作KOH涂片。

3.2.12毛发取病发15根、75%酒精消毒,3-5根作直接镜检，

5-10根种于SDA斜面（加氯霉素），稍划破斜面掩埋。

3.3标本拒收标准及处理参见《标本拒收程序》

4.试剂、培养基及仪器

4.1接种针、电热灼烧器、显微镜、恒温培养箱、冰箱、全排式

生物安全柜等。

4.2常用培养基及血培养瓶放置于2-8°C冰箱，并在有效期内

使用。

4.3沙氏葡萄糖琼脂（SDA）,科玛嘉念珠菌显色培养基米粉吐

温琼脂，察氏琼脂，马铃薯葡萄糖琼脂，七叶甘琼脂，咖啡酸琼脂，

API20CAUX板条，10%KOH,正常人或羊血清。

5.真菌鉴定的质控（略）

6.检验步骤

接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

6.1涂片检查标本置于载玻片后加1滴10%KOH,覆上盖玻片,

微加热后轻压盖玻片，驱逐气泡并压匀标本，再以滤纸条吸去周围溢

液。先在低倍镜下寻找（遮去强光源），发现真菌的菌丝或泡子后经高

倍证实，报告“真菌直接镜检阳性”。

6.2培养

6.2.1粪、痰标本可用无菌棉签或接种针挑取带血、黏液的病理

部分，接种于含氯霉素的沙氏葡萄糖琼脂及科玛嘉念珠菌显色培养

基，置于37°C培养48小时。

6.2.2支气管保护性毛刷标本悬液、肺泡灌洗液、体液及尿等液

体标本，可以无菌吸管吸取离心沉淀物约0.5mL接种于上述培养基,

37°C孵育48小时后如未见菌落生长，可报告“无真菌生长”。

6.2.3脑脊液取离心沉淀物约0.5ml接种于2管沙氏葡萄糖琼脂斜

面，分别置25°C及37°C孵育一周。

6.2.4血分别左右两侧无菌抽血3〜5m1,立即置于脑心浸出液

肉汤。

6.2.5皮屑、毛发接种于沙氏葡萄糖琼脂斜面，置25°C〜38°C

培养2周。

6.2.6甲屑以十点接种法分别种于含放线菌酮及不含放线菌酮的

沙氏平皿25°C〜28°C

培养3周。

7.结果报告

所有的标本如分离出真菌，应尽可能鉴定至种，报告“XX菌生

长”，尤其对于念珠菌中克柔念珠菌对氟康噗天然耐药，光滑念珠菌

对嗖类药物也逐渐表现出不敏感倾向。

8.注意事项

真菌血培养每天检查完毕后需摇动培养基，37°C振荡培养可加

速真菌的生长，提高检出率；不作直接镜检，因其直接镜检阳性率低。

9.临床意义

真菌根据感染部位不同分为浅部真菌和深部真菌两大类，前者主

要累及皮肤、毛发及甲板，后者感染皮下组织及内脏器官。准确鉴定

至种的水平可以为临床诊断及治疗提供重要依据，特别四部分种对抗

真菌药物的敏感性存在差异。制定真菌鉴定规范的操作程序是保证结

果的准确性与可靠性的基础。

危急值报告

血培养阳性涂片确定真菌及脑脊液墨汁涂片发现新型隐球菌后，

应及时向临床报告。

安全防护措施

12.1操作人员在工作过程中要穿隔离衣、戴口罩和手套。

12.2所有报告结果后的标本及污染物，必须经高压灭菌、焚烧或

浸泡杀菌剂中。

12.3若送检途中培养瓶不慎打破，应封锁现场，进行消毒处理。

11.4标本运送应采用密封容器。

参考文献

川孙鹤龄主编.医学真菌鉴定初稿.北京:科学出版社,1987

⑵吴绍熙主编.现代医学真菌检验手册.第二版.北京:中国协和医

科大学出版社,2005

⑶上海第一医院华山医院皮肤科真菌室.临床真菌检验.上海:上

海第一医院出版社.1975

[4]王家俊主编，临床真菌检验,上海:上海医科大学出版社,1995

[5]秦启贤主编.临床真菌学.上海:上海医科大学出版社,2001

[6]王端礼主编，医学真菌学一实验室检验指南，北京：人民卫生

出版社，2004

[7]GlennSBulmer,郑岳臣主编，汉英对照医学真菌学，上海：

上海科学技术出版社，2005

编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员

批准人：________

XXX医院检验科血液及骨髓标本细菌文件编号：

微生物检验实验室作学检验标准操作规程XXX-JY-CZ-WSW-0577

业指导书版本:20140601

生效日期：20140615

共3页

1.目的

规范血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准

确可靠。

2.适用范围

血液及骨髓。

3.标本

3.1标本类型血液及骨髓。

3.2标本采集

3.2.1采血时间抗菌药物治疗前，发热初期或高峰时抽血。

3.2.2采血频率对怀疑菌血症的成年病人，推荐同时在不同部位

采集2-3套（每套包括一瓶需氧瓶，一瓶厌氧瓶或者两套需氧瓶），对

感染性心内膜炎和真菌血症则应多次采血；婴幼儿病人，推荐同时在

不同部位采集2套，可不做厌氧培养。

3.2.3采血量以培养基的1/10为宜，成人一次采血5-lOml,婴

幼儿为l-2mlo

3.2.4骨髓标本用骨髓穿刺针从骼骨采集。

3.3标本拒收标准

3.3.1血培养瓶破裂或有明显污染。

3.3.2血培养瓶标识与化验申请单不符。

3.3.3用过期的培养瓶采集标本、采血量不足等。

3.3.4对于不合格标本，应及时通知采集人员重新留取标本。

3.3.5标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置

室温，切勿放入冰箱。冬季血培养瓶在送检过程应采取一定的保暖措

施。

4.试剂、仪器

4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、

麦糠凯平板、相关生化试剂等。

4.2BACT/ALERT3D或BACTEC9000全自动血培养系统、鉴

定系统。成人需氧培养瓶、厌氧培养瓶、儿童培养瓶、革兰阴性菌鉴

定卡（GNI+）、革兰阴性菌药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、

革兰阳性菌药敏卡（GBS）、真菌鉴定卡（TBC）、药敏纸片、TTB板

条等。

4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、co2培养

箱等。

4.4试剂的有效期和使用参照试剂说明书。

5.细菌鉴定和药敏质控。

参见《质量管理程序》

6.检验步骤

接收标本后，立即对标本进行编号、登记。门诊病人要同时登记

住址，联系电话等病人信息。

6.1自动化培养将血培养瓶置全自动血培养仪中。当标本有菌

生长时，仪器发出阳性报警，应立即用无菌注射器抽取瓶内培养液作

直接涂片革兰染色，镜检，将结果向临床医师报告，同时转种血琼脂

平板，麦糠凯平板或加做巧克力平板，并进行直接药敏试验，置35°

C、5%CO2培养箱培养18-24小时。从琼脂平板上挑取菌落进行涂片

染色及触酶和氧化酶试验。革兰阳性菌和革兰阴性菌分别选用GPI及

GNI上机进行细菌鉴定和药敏试验或者做K-B法药敏试验(具体操作

见《药物敏感性标准操作规程》)

6.2手工培养

6.2.1将血培养置35°孵育箱，经18-20小时孵育在血琼脂平板或

巧克力平板上盲目转种一次。

6.2.2盲目转种后，培养瓶继续孵育至第五日，每日观察一次有

无菌生长，并摇匀继续培养，下列几种情况提示有细菌生长。

根据肉眼观察,对有细菌生长迹象,取菌悬液涂片做革兰染色,

同时分离培养，接种需氧血琼脂平板、麦糠凯平板或加做巧克力平板,

并进行直接药敏试验，置35°C、CO2培养箱培养18-24小时。次日

纯培养再进行鉴定及药敏试验。