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β-半乳糖苷酶活性测定(β-galactosidaseassays)1、将过夜培养的菌液按1%接种量到新鲜培养基中培养,待OD600至0.6时取出,放置于冰上;(或可检测不同OD600时,菌的酶活性)2、取50-100μl菌液至1.5ml的离心管中,加370-420μlZbuffer;3、加20μl氯仿和10μl0.1%SDS,振荡混匀,裂解细胞,放置于冰上30分钟;4、向离心管中加入100μl浓度4mg/ml的ONPG,混匀后立即置于30℃反应30-60分钟;5、待颜色变黄后,加入250μl1MNa2CO3中止反应,准确记录变色反应的时间;6、取200μl上清,测定420nm和550nm处的吸光度;7、计算β-半乳糖苷酶酶活力:MillerUnits=1,000×[(OD420-1.75×OD550)]/(t×V×OD600),其中,OD420和OD550----显色后的反应液读数;OD600----用于显色分析的培养液的细菌密度;t----显色反应时间(单位min);V----用于显色分析的培养液体积(单位ml)。Zbuffer(总体积100ml):Na2HPO4·12H2O100mM3.5814gNaH2PO4·H2O40mM0.624gKCl10mM0.07455gMgSO4·7H2O1mM0.0246gβ-mercaptoethanol5.4μl/ml540μl加水到总体积90ml,待试剂溶解后调pH至7.0,最后定容到100ml,4℃储存。Substratesolution(总体积10ml)----现用现配Na2HPO4·12H2O60mM0.215gNaH2PO4·H2O40mM0.0624gONPG4mg/ml0.04g终止液(100m
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