血红蛋白的提取和分离(完美修改)

1、主题5主题3血红蛋白的提取和分离学习目标1.了解凝胶色谱和电泳的基本原理，了解缓冲溶液的组成和功能；2.掌握血红蛋白提取和分离的基本过程和方法。一.基本知识蛋白质的物理化学性质：因此各种蛋白质被提取和分离。1.凝胶色谱(分配色谱):(1)概念：根据具有网络结构的凝胶分子筛的功能分离蛋白质的有效方法。(2)原理：大分子量分子通过多孔凝胶颗粒间隙，行程短，流动快；分子量小的分子通过多孔凝胶颗粒内部，行程长，流动慢。(3)凝胶材料：多孔的多糖化合物，如葡聚糖和琼脂糖。(4)分离过程：(图5-13b)混合物进入色谱柱分子流动快，分子流动慢收集分子收集分子(洗脱：从色谱柱顶部连续注入缓冲溶液促进蛋白质分

2、子的不同流动。)2.缓冲溶液(1)效果：能抵抗溶液的影响，保持酸碱度基本不变。(2)缓冲溶液的制备：由弱酸和相应的强碱弱酸盐(如H2CO 3-NaHCO 3；磷酸氢钠/磷酸氢二钠等。)。它通常是通过将缓冲液溶解在水中来制备的。3.凝胶电泳：(1)原理：不同的蛋白质在电场中具有不同的力的大小、方向和阻力，导致不同的蛋白质在电场中有不同的运动方向和速度。(2)分离方法：(3)分离过程：在一定的酸碱度下，蛋白质基团带正电荷或负电荷；加入大量负电荷的_ _ _ _ _ _ _形成“蛋白质- SDS复合物”，使蛋白质迁移率仅为_ _ _ _ _ _。二。试验设计1.蛋白质提取和分离的基本步骤是什么？，2

3、.选择实验材料(1)你认为从鸟血和哺乳动物血中提取血红蛋白最好的是哪种血液？为什么？_ ._ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ .(2)请阅读教材，了解哺乳动物的血液成分和血红蛋白特性。并考虑回答以下问题：血液由两部分组成。血细胞中的细胞数量最多，细胞含量最高的化合物为。该化合物由和组成，其中每个亚基包含能够与O2和CO2结合的基团。3.样品处理：从红细胞中分离血红蛋白的过程包括洗涤红细胞、释放血红蛋白、分离血红蛋白和透析。(1)洗涤红细胞：目的：去

4、除方法：离心思考：添加柠檬酸钠的目的是什么？(2)血红蛋白的释放：加入_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，红细胞破裂，释放血红蛋白。加入甲苯溶解细胞膜。(3)分离血红蛋白溶液：第一层(最顶层):第二层(无色透明)第二层(中上层):沉淀层(彩色薄层固体)第三层(中层和下层):水溶液层(液体)第4层(最底层):其他杂质的沉淀层(颜色)(4)透析：4.凝胶色谱的制备5.血红蛋白分离全过程：血红蛋白提取和分离过程可分为四个主要步骤，包括样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先，通过洗涤红细胞、释放血红蛋白、离心等操作，即样品处理，收集血红蛋白溶液；然后透析除去

5、分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后，用凝胶色谱法除去相对分子质量大的杂质蛋白质，即样品纯化；最后用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯度。三。整合实践1.蛋白质的凝胶色谱分离是基于()A.对其他分子的亲和力b .溶解度c .电荷d .相对分子质量2.用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质()A.距离越长，移动速度越慢C.较短的行程，较慢的移动速度3.能够进入凝胶内部通道的蛋白质是指A.高分子量b .高吸附性c .低分子量d .低溶解度4.凝胶色谱移动很快A.高相对分子质量b .高溶解度c .低相对分子质量d .低溶解度5.凝胶色谱法是根据()分离蛋白质的有效方法。A.分子大小b .相对分子质量c

6、.带电量d .溶解度6.使用凝胶色谱法分离蛋白质。首先洗脱的蛋白质的特征在于A.高相对分子质量b .高溶解度c .低相对分子质量d .高电荷7.蛋白质提取和分离分为哪几个步骤()A.样品处理、凝胶色谱、SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳样品处理、凝胶色谱操作和纯化C.样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定8.选择红细胞作为蛋白质分离的实验材料，有什么好处()A.血红蛋白是一种有色蛋白质b。红细胞没有细胞核。C.高红细胞蛋白质含量9.样品添加和洗脱的描述是正确的()A.加入1毫升透析过的样品b。在加入样品前，使缓冲液缓慢下降，所有液体流出C.如果红带移动均匀，色谱柱成功制造。缓冲溶液或清水可用于洗脱。凝胶色

7、谱中使用的凝胶化学的本质主要是A.碳水化合物b类脂c蛋白质d核酸11.以下哪一项可以代表凝胶中具有不同相对分子量的蛋白质的过程12.缓冲溶液的作用是抵抗外部影响，以保持下列哪种状态在一定范围内基本不变A.温度b. ph c .渗透压d .氧浓度13.初步血红蛋白分离实验中使用的缓冲液为A.h2co 3-碳酸氢钠缓冲液b. nh4oh-nh4cl缓冲液C.ch3cooh-ch3coona缓冲液d. h3po4缓冲液14.血红蛋白是红色的，因为它含有什么物质A.o2b.co.c.co2.d .血红素15.以下操作正确A.分离红细胞时采用低速长时间离心。只需加入蒸馏水即可从红细胞中释放血红蛋白C.将

8、血红蛋白分离溶液低速离心一小段时间。使用20摩尔/升磷酸盐缓冲液透析12小时。16.在使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳的过程中，不同蛋白质的迁移速度完全取决于A.多少电荷b .分子大小c .多少肽链d .分子形状的差异17.洗涤红细胞的目的是A.去除血清b .去除外来蛋白质c .去除血小板d .去除水分18.SDS在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的作用是A.增加蛋白质b的相对分子质量。改变蛋白质的形状C.掩盖不同蛋白质之间的电荷差异d .降低蛋白质的相对分子质量19.在下列哪种情况下，生物大分子的可离解基团会带正电荷或负电荷A.一定的温度，一定的酸碱度，一定的压力，一定的容器20.当带电粒子在电场作用

9、下电泳时，电极的移动方向及其电荷是A.b对c对d。21.血红素基团可以被携带A.一分子cob，一分子noc，一分子O2或CO2，一分子NO222.为了防止血液凝固，应事先在采血容器中加入抗凝剂A.nacib .甲苯c .蒸馏水d .柠檬酸钠23.以下关于血红蛋白提取和分离程度的陈述是不正确的A.样品处理是通过一系列操作收集血红蛋白溶液样品中分子量较大的杂质可以通过透析除去，透析是样品的粗提C.相对分子质量较大的杂质蛋白质可以通过凝胶色谱法除去，即样品的纯化血红蛋白的纯度可用聚丙烯酰胺凝胶电泳来鉴定24.以下陈述不正确A.当血红蛋白释放时，向原始血液中加入蒸馏水，并加入40%的甲苯充分搅拌离心后

10、血红蛋白溶液分成4层，第一层是白色薄层固体离心后血红蛋白溶液分为四层，第四层为深红色沉淀d .离心后血红蛋白溶液分为4层，第三层为红色透明液体，即血红蛋白水溶液25.血液由血浆和各种血细胞组成，其中()最为丰富。A.白细胞b血小板c红细胞d淋巴细胞26、凝胶色谱分离法分离蛋白质，凝胶种类较多，但其共同作用是()A.改变蛋白质分子通过凝胶的路径b、吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的运动速度C.将酶或细胞固定在凝胶中。与蛋白质分子发生化学反应，从而影响其移动速度27、下列各项，一般不影响凝胶色谱分离蛋白质的分离程度是()A.柱高b .柱直径c .缓冲溶液d .样品分布28.洗涤红细胞时，分离方

11、法如下A.低速长时间离心b .低速短时间离心c .高速长时间离心d .高速短时间离心第二，多主题选择29.以下血红蛋白提取和分离样品的处理措施是正确的A.采集血样后，通过高速和短时间离心获得血细胞如果洗涤三次后上清液仍为黄色，洗涤次数可增加，否则血浆蛋白不能完全去除。(c)在蒸馏水和甲苯的作用下，细胞破裂并释放血红蛋白D.血红蛋白被释放并被离心以从其他杂质中分离出血红蛋白30.蛋白质分离纯化技术是蛋白质研究中的重要技术。以下陈述是正确的A.根据蛋白质分子不能通过半透膜的特性，可以分离样品中的各种蛋白质B.根据蛋白质电荷性质和分子大小的不同，蛋白质可以通过电泳分离。根据蛋白质的相对分子质量，可用

12、凝胶色谱法分离蛋白质。根据蛋白质分子大小和密度的不同，可用离心沉淀法分离蛋白质。31.以下关于生物技术在实践中应用的陈述是错误的。A.酿造葡萄醋的温度低于酿酒的温度在任何情况下使用加酶洗衣粉都比普通洗衣粉好。凝胶色谱法是根据蛋白质不同的光吸收率来分离蛋白质的有效方法。D.固定化细胞比固定化酶具有更高的催化效率，适用于所有生产过程32.以下关于蛋白质分离和纯化的陈述是不正确的蛋白质分子的等电点不会影响蛋白质的游动速度能分离蛋白质的最佳方法包括透析等。如果要分离和纯化血红蛋白，所用的提取剂是碱性溶液D.根据血清蛋白醋酸纤维薄层电泳示意图，白蛋白是血清中含量最高的成分33.(2009江苏卷23)以下

13、关于DNA和蛋白质提取分离实验的陈述是正确的A.从细胞中提取DNA和蛋白质需要用蒸馏水破坏细胞用不同浓度的氯化钠溶液反复溶解沉淀脱氧核糖核酸，可以除去蛋白质C.蛋白质提取和分离过程中的透析可以从溶液中去除DNA蛋白质和DNA可以通过电泳分离和纯化34.红细胞含有大量的血红蛋白。红细胞的功能主要由血红蛋白完成。血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳。我们可以选择猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行提取和分离血红蛋白的实验。请回答以下问题：(1)血红蛋白的提取和分离程度可分为四个步骤：_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _、_ _ _ _、_ _ _ _、和_ _ _ _ _ _ _。(2)实验前取新鲜血液，记得事先在采血容器中加入柠檬酸钠，取血，立即离心，收集血红蛋白溶液。(1)添加柠檬酸钠的目的是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(2)上述过程为样品处理，包括_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _