酶的提取和分离纯化

酶的提取和分离纯化Tag内容描述：<p>1、第三节 酶的精制 (纯化) 酶纯化的基本原则： 建立一个方便灵敏的分析方法； 选择有效的纯化方法，尽可能减少纯化步骤； 常在低温（4）条件下进行纯化，以避免酶的变性。,第三章 酶的提取与分离纯化,一、膜分离 借助一定孔径的高分子薄膜，将不同大小、形状、性质的颗粒或分子进行分离的技术。,1 扩散膜分离 透析（dialysis）,溶质分子Y 从高浓度一侧通过膜向低浓度一侧移动,蛋白质透析,透析膜 材 料：纤维素衍生物 袋的形状: 管状 目 的: 除杂质 保 存: 防腐剂冷藏。,2 加压膜分离 根据所截留物质颗粒大小的不同，分为：,微滤(Microfiltra。</p><p>2、酶的提取与分离纯化,（制作人：王众 黄文辉 王晨）,要点,：细胞破碎 ：提取 ：沉淀分离 ：离心分离 ：过滤与膜分离 ：层析分离 ：电泳分离 ：萃取分离 ： 结晶 10：浓缩与干燥,1 细胞破碎,细胞破碎是通过各种过程使细胞外层结构破坏的技术过程。 细胞破碎的方法 机械破碎法 物理破碎法 化学破碎法 酶促破碎法,机械破碎法,1 捣碎法 定义 利用捣碎机的高速旋转叶片所产生的剪切力将组织细胞破碎的方法。 使用范围 动物内脏 植物叶芽 细菌 2 研磨法 利用研钵，石磨，细菌磨，球磨等研磨器械所产生的剪切力将组织细胞破碎的方法。必要时加入石。</p><p>3、11 酶的提取与分离纯化,暨南大学食品科学与工程系 包惠燕 tbhyjnu.edu.cn,食品酶学-包惠燕-11,思考题,1.酶提取纯化过程中应注意些什么？ 2.酶提取前进行的预处理包括什么？ 3.酶提取过程 中为什么要破细胞？破细胞的方法有哪些？其中哪些可用于大规模生产？ 4.酶的抽提剂中常见成分的作用？ 5.酶和其它蛋白质的分离常依据哪些性质差异？分别有哪些主要的分离方法？ 6. SDS-PAGE指什么？试述其原理和应用。 7.试述亲和色谱原理，画出示意图。,本章主要内容,酶的提取、纯化的基本原则 细胞破碎 酶的抽提 浓缩与初步提纯 酶的分离纯化方法 酶。</p><p>4、第三章 酶的提取与分离纯化 预处理（pretreatment）：包括固液分离和细胞破碎（分离胞内产物）等。 初步纯化（rough fractionation） （提取）：除去与目的产物性质差异很大的杂质。 高度纯化（fine fractionation） （精制）：除去与产物性质相似的杂质。 浓缩与干燥（concentration and desiccation）（成品加工）:使酶与溶剂分离的过程。,第一节 酶的分离 一、发酵液预处理 (一)发酵液的相对纯化 1. 无机离子的去除 2. 杂蛋白质的去除 3. 色素及其他物质的去除,(二）发酵液的固液分离 1 . 影响发酵液过滤的因素 1）菌种 2）培养基组成 。</p><p>5、酶的提取与分离纯化,重点,一 酶的下游加工流程,1.预处理 2.细胞过滤分离 3.酶提取 4.酶分离纯化 5.酶浓缩、结晶、干燥 6.酶保存 7.酶制剂成型 酶工程下游技术操作条件,二 预处理,1.加热：使温度达到最适温度 2.凝聚，絮凝 3.加酸碱：达到最适PH,三 细胞过滤分离,1.细胞破碎法 机械破碎法：研磨、搅拌、匀浆 物理破碎法：温度差法、压力差法、超声 波空穴效应 化学破碎法：酸碱，有机溶剂破坏细胞壁、膜 酶破碎法：加酶破坏细胞壁、膜；最适条件培 养，使溶酶体破裂自溶 2.过滤方法：加压、常压、减压过滤法 空穴效应：超声波使发酵液中产。</p><p>6、第三章 酶的提取与分离纯化,电泳（electrophoresis, EP） ：指带电粒子在电场中向着与其所带电荷性质相反的电极方向移动的过程。 电泳技术是根据各种带电粒子在电场中迁移速度的不同而对物质进行分离的实验技术。,第四节 电 泳,一、电泳的基本理论 1. 原理:,在一定pH条件下（用buffer），不同大小、形状及带电颗粒在电场中的移动速度不同（用迁移率表示），各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。,+,-,影响迁移率的因素： 颗粒性质：Q越大、r越小、形状越接近球形，v 越快。 电场强度：E越高，v越快。 电泳液： pH值：离pI越远，v越。</p>