菊花的组织培养PPT演示课件

.,1,欢迎各位同事老师前来指导！,.,2,课题一 菊花的组织培养,专题三 植物的组织培养技术,.,3,植物组织培养是二十世纪发展起来的新技术，近三十年来由于组织培养基础理论研究的深入，发展极为迅速，发表的文献浩如烟海，几乎以植物为研究对象的各个分支学科都在广泛进行组织培养。,植物组织培养：在人工培养基，把离体植物的器官、组织或细胞，培养并成完整植株的技术。,导入新课,.,4,课题背景,科学研究表明，当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整植株(条件？)。在本课题中，我们将通过菊花组织培养的实验来学习这一技术。,.,5,课题目标,1.说明植物组织培养的基本原理2.学习植物组织培养的基本技术3.进行菊花或其他植物的组织培养,.,6,(一)植物的组织培养的基本过程,基础知识,1.植物组织培养的原理,（1）细胞分化：,个体发育中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。,根本原因：,在特定的时间和空间条件下，基因的选择性表达。,.,7,生物体的细胞，具有使后代细胞形成完整个体的能力。,（2）细胞全能性：,离体、营养物质、激素和其他外界条件。,植物细胞表现全能性条件：,.,8,一、植物组织培养的基本过程,外植体,愈伤组织,芽、根,植物体,植物组织,愈伤组织,长出丛芽,生根,移栽成活,生长,.,9,外植体：,离体的植物器官或组织片段。,脱分化（去分化）：,高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。,愈伤组织：,通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。,再分化：,愈伤组织继续进行培养重新分化成根或芽等器官的过程。,愈伤组织：,丛芽,.,10,（二）影响植物组织培养的因素,1.外植体的选取（内因）, 不同植物的组织培养难度,例如：烟草和胡萝卜的组织培养较容易，枸杞愈伤组织的芽诱导较难。,同一植物材料、材料的年龄、保存时间的长短,例如：比如茎尖、根尖、幼嫩的叶片等；菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。,一般选择植物的幼嫩部分（？），保存时间越短，材料生命力越旺盛；保存时间越长，越容易受到污染。,（生命力旺盛，分裂分化能力强；含有的病毒少）,.,11,2.培养基的配制(MS培养基),大量元素：,N、P、K、Ca、Mg、S,微量元素：,B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co,有机物：,甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等,植物激素：,生长素、细胞分裂素、赤霉素等,.,12,讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？,微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等(营养因子)物质主要是为了满足离体植物细胞对特殊营养的需求。微生物培养基以有机营养为主。MS培养基则需提供大量无机营养。,.,13,3.不同植物激素浓度、使用顺序和使用量,有利于分裂，不利分化,既分裂也分化,分化频率提高,促根分化，抑芽形成,促芽分化，抑根形成,促进愈伤组织生长,.,14,菊花组织培养的条件：pH=5.8 、温度、控制在1822、每日光照12h。,pH、温度、光照等条件也很重要。,4. 环境条件,5.消毒和灭菌,在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境，是成功的关键。,.,15,【小结】植物组织培养过程:,离体组织或细胞,细胞分裂素生长素,愈伤组织,芽,根,植物体,细胞分裂素生长素,细胞分裂素生长素,不需要光？,需要光,生长,.,16,制备MS固体培养基,外植体消毒,接种,培养,栽培,移栽,实验操作,.,17,制备MS固体培养基,外植体消毒,接种,培 养,栽 培,移 栽,流水冲洗无菌纸吸干70%酒精无菌水冲洗无菌纸吸干0.1%氯化汞无菌水冲洗至少三次（流水是为消毒吗？能消毒的是什么？无菌水冲洗是为了干啥？）,（实验操作哪6步？）,1、配制各种母液（大量元素、微量元素各浓缩多少倍？用量较小的有机物呢？）2、配制培养基（菊花组培是否添加植物激素？）3、灭菌（哪种灭菌方法？）,注意接种时的各种无菌操作。将菊花茎段插入培养基时特别应注意什么？重复组、对照试验如何设置？,最好在哪儿培养？温度？光照？定期消毒？,直接移栽到土壤中吗？,.,18,（一） 制备MS培养基,1.配制各种母液,无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存。,激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液。,用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。,.,19,2.配置培养基,添加各种成分定容调pH分装,（成分添加顺序：蒸馏水琼脂蔗糖大量元素微量元素有机物植物激素）,注意：菊花的茎段的组织培养比较容易，不必添加植物激素。,3.灭菌,分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。,.,20,酒精摇动,（二）外植体消毒,流水冲洗,无菌水冲洗,无菌水冲洗,.,21,（三）接种,1.接种室消毒,接种前用体积分数为70%的酒精将工作台擦拭一遍，打开紫外灯照射20分钟。工作台消毒后，首先点燃酒精灯。,.,22,2.无菌操作,在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。,.,23,3.材料的切取和接种,插入时应注意方向，不要倒插，茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分。彼此之间留出一定空间，从而避免互相污染。,.,24,思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？,每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。,.,25,（四）培养,接种后的锥形瓶放在培养箱或培养室中培养。,培养条件：18-22， 每日光照12小时。,.,26,（五）移栽,1.打开封口膜,移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。,2.清洗转移,用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间。,（六）栽培,幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。,.,27,在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？,1.培养基的灭菌,高压蒸汽灭菌,2.外植体的消毒,酒精、氯化汞,3.接种的无菌操作,酒精、酒精灯灼烧,4.无菌箱中的培养,5.移栽到消过毒的环境中生存一段时间,.,28,结果分析与评价,1.接种3 4d后，观察外植体的生长情况，统计多少外植体被污染，多少能正常生长，分析被污染原因。,2.是否完成脱分化和再分化。,3.是否进行统计、对照与记录。,4.生根苗移栽是否合格。,.,29,课题延伸,一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养，如芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季。,.,30,【课堂小结】,菊花组织培养,基础知识,实验操作,植物体的组织培养,影响组织培养的因素,细胞分化细胞全能性组织培养过程,营养激素环境条件,MS固体培养基制备外植体消毒接种培养移栽栽培,.,31,1.在菊花的组织培养操作完成了34天后，观察同一温室中的外植体，发现有的瓶内外植体正常生长，有的瓶内外植体死亡，你认为外植体死亡的原因不可能是（ ）A接种时培养基灭菌不彻底B接种工具灼烧后未待冷却就接种外植体C愈伤组织形成初期没有给予充足的光照D培养过程中保持温度、pH的适宜，但没有及时调整各种营养物质、激素的比例,随堂练习,C,.,32,2.关于菊花组织培养的操作,下列说法不正确的是（ ）A培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌B幼苗要先移植到消过毒的蛭石或者珍珠岩等环境下生活一段时间C用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长,一旦感染杂菌则前功尽弃D接种时用镊子夹取菊花茎段插入培养基中即可,D,.,33,3.某兴趣小组拟用组织培养