化学品毒性鉴定技术规范

化 学 品 毒 性 鉴 定 技 术 规 范2005 年 6 月目 录一 、 总 则 3二 、 试 验 方 法（ 一 ） 第 一 阶 段 试 验 151、 急 性 吸 入 毒 性 试 验 162、 急 性 经 皮 毒 性 试 验 203、 急 性 经 口 毒 性 试 验 234、 急 性 眼 刺 激 性 /腐 蚀 性 试 验 265、 皮 肤 刺 激 性 /腐 蚀 性 试 验 326、 皮 肤 变 态 反 应 试 验 （ 皮 肤 致 敏 试 验 ） 36（ 二 ） 第 二 阶 段 试 验 541、 鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌 回 复 突 变 试 验 （ Ames 试 验 ） 552、 体 外 哺 乳 动 物 细 胞 染 色 体 畸 变 试 验 623、 体 内 哺 乳 动 物 骨 髓 细 胞 染 色 体 畸 变 试 验 684、 体 内 哺 乳 动 物 骨 髓 嗜 多 染 红 细 胞 微 核 试 验 755、 哺 乳 动 物 精 原 细 胞 /初 级 精 母 细 胞 染 色 体 畸 变 试 验 ， 或 79精 子 畸 形 试 验 876、 啮 齿 类 动 物 显 性 致 死 试 验 907、 免 疫 毒 性 评 价 试 验 方 法 958、 亚 急 性 吸 入 （ 14/28 天 ） 毒 性 试 验 1049、 亚 急 性 经 皮 （ 21/28 天 ） 毒 性 试 验 11010、 亚 急 性 经 口 （ 28 天 ） 毒 性 试 验 115（ 三 ） 第 三 阶 段 试 验 1211、 亚 慢 性 吸 入 毒 性 试 验 1222、 亚 慢 性 经 皮 毒 性 试 验 1263、 亚 慢 性 经 口 毒 性 试 验 13014、 致 畸 试 验 1365、 两 代 繁 殖 毒 性 试 验 1426、 迟 发 性 神 经 毒 性 试 验 147（ 四 ） 第 四 阶 段 试 验 1531、 慢 性 吸 入 毒 性 试 验 1542、 慢 性 经 皮 毒 性 试 验 1603、 慢 性 经 口 毒 性 试 验 1664、 致 癌 试 验 ， 或 172慢 性 毒 性 /致 癌 性 合 并 试 验 1805、 毒 物 代 谢 动 力 学 试 验 1896、 接 触 人 群 调 查 与 观 察 （ 参 考 国 内 外 有 关 专 著 或 教 科 书 ）（ 五 ） 参 考 试 验 1961、 皮 肤 变 态 反 应 试 验 -局 部 淋 巴 结 法 1972、 大 肠 杆 菌 回 复 突 变 试 验 2023、 酵 母 菌 基 因 突 变 试 验 2104、 体 外 哺 乳 动 物 细 胞 正 向 基 因 突 变 试 验 2145、 果 蝇 伴 性 隐 性 致 死 试 验 2206、 枯 草 杆 菌 基 因 重 组 试 验 2247、 体 外 哺 乳 动 物 细 胞 程 序 外 DNA 合 成 （ UDS） 试 验 2328、 体 内 哺 乳 动 物 外 周 血 细 胞 微 核 试 验 2389、 体 外 哺 乳 动 物 姊 妹 染 色 单 体 交 换 （ SCE） 试 验 24410、 体 内 哺 乳 动 物 骨 髓 细 胞 姊 妹 染 色 体 交 换 （ SCE） 试 验 25011、 繁 殖 /生 长 发 育 毒 性 筛 选 试 验 25612、 亚 急 性 毒 性 合 并 繁 殖 /发 育 毒 性 筛 选 试 验 26213、 一 代 繁 殖 试 验 26914、 神 经 毒 性 筛 选 组 合 试 验 2742总 则General Principles31 依 据根 据 中 华 人 民 共 和 国 职 业 病 防 治 法 、 作 业 场 所 使 用 有 毒 物 品 劳 动 保 护 条例 、 危 险 化 学 品 安 全 管 理 条 例 、 职 业 卫 生 技 术 服 务 机 构 管 理 办 法 、 化 学 品毒 性 鉴 定 管 理 规 范 制 定 本 规 范 。2 范 围本 规 范 规 定 了 化 学 品 毒 性 鉴 定 的 毒 理 学 检 测 程 序 、 项 目 和 方 法 ， 适 用 于 化 学品 毒 性 鉴 定 和 评 价 。3 规 范 性 引 用 文 件GB 14924-2001 实 验 动 物 与 饲 料 标 准GB 14925-2001 实 验 动 物 环 境 及 设 施OECD Guideline for Testing of Chemicals (1981 2002)USA Code of Federal Regulations, Title 40, Volume 28USEPA OPPTS Health Effects Test Guidelines (1996 2000)4 术 语 解 释化 学 品 （ Chemicals） ： 本 规 范 所 称 化 学 品 ， 系 指 工 业 用 和 民 用 的 化 学 原 料、中 间 体 、 产 品 等 单 分 子 化 合 物 、 聚 合 物 以 及 不 同 化 学 物 组 成 的 混 合 剂 与 产 品 。 不包 括 法 律 、 法 规 已 有 规 定 的 食 品 、 食 品 添 加 剂 、 化 妆 品 、 药 品 等 。急 性 吸 入 毒 性 （ Acute Inhalation Toxicity）：实 验 动 物 短 时 间 （ 24h 内 ）持 续 吸 入 一 种 可 吸 入 性 受 试 样 品 后 ， 在 短 期 内 出 现 的 健 康 损 害 效 应 。半 数 致 死 浓 度 （ Median Lethal Concentration， LC50） ： 指 在 一 定 时 间 内 经 呼吸 道 吸 入 受 试 样 品 后 引 起 受 试 动 物 发 生 死 亡 概 率 为 50%的 浓 度 。 以 单 位 体 积 空 气中 受 试 样 品 的 质 量 (mg/m3)来 表 示 。急 性 经 皮 毒 性 （ Acute Dermal Toxicity）：实 验 动 物 短 时 间 （ 24h 内 ） 经 皮肤 接 触 受 试 样 品 后 ， 在 短 期 内 出 现 的 健 康 损 害 效 应 。急 性 经 口 毒 性 （ Acute Oral Toxicity） ： 一 次 或 在 24h 内 多 次 经 口 给 予 实 验动 物 受 试 样 品 后 ， 动 物 在 短 期 内 出 现 的 健 康 损 害 效 应 。半 数 致 死 剂 量 （ Median Lethal Dose， LD50）： 在 一 定 时 间 内 经 口 或 经 皮 给予 受 试 样 品 后 ， 使 受 试 动 物 发 生 死 亡 概 率 为 50%的 剂 量 。 以 单 位 体 重 接 受 受 试 样4品 的 质 量 (mg/kg bw 或 g/kg bw)来 表 示 。皮 肤 刺 激 性 （ Dermal Irritation） ： 皮 肤 涂 敷 受 试 样 品 后 局 部 产 生 的 可 逆 性 炎性 变 化 。皮 肤 腐 蚀 性 （ Dermal Corrosion） ： 皮 肤 涂 敷 受 试 样 品 后 局 部 引 起 的 不 可 逆组 织 损 伤 。眼 刺 激 性 （ Eye Irritation） ： 眼 球 表 面 接 触 受 试 样 品 后 产 生 的 可 逆 性 炎 性 变化 。眼 腐 蚀 性 （ Eye Corrosion） ： 眼 球 表 面 接 触 受 试 样 品 后 引 起 的 不 可 逆 性 组 织损 伤 。皮 肤 致 敏 （ 过 敏 性 接 触 性 皮 炎 ） (Skin Sensitization ， Allergic ContactDermatitis)： 皮 肤 对 一 种 物 质 产 生 的 免 疫 源 性 皮 肤 反 应 。 对 于 人 类 这 种 反 应 可 能以 瘙 痒 、 红 斑 、 丘 疹 、 水 疱 、 融 合 水 疱 为 特 征 。 动 物 的 反 应 不 同 ， 可 能 只 见 到 皮肤 红 斑 和 水 肿 。亚 急 性 经 口 毒 性 （ Subacute Oral Toxicity） ： 实 验 动 物 在 14 28 天 内 ， 每 日经 口 接 触 受 试 样 品 后 所 引 起 的 健 康 损 害 效 应 。亚 急 性 经 皮 毒 性 （ Subacute Dermal Toxicity） ： 实 验 动 物 在 14 28 天 内 ， 每日 经 皮 接 触 受 试 样 品 后 所 引 起 的 健 康 损 害 效 应 。亚 急 性 吸 入 毒 性 （ Subacute Inhalation Toxicity） ： 实 验 动 物 在 14 28 天内，每 日 经 呼 吸 道 接 触 受 试 样 品 后 所 引 起 的 健 康 损 害 效 应 。致 突 变 性 （ Mutagenicity） ： 受 试 样 品 引 起 原 核 或 真 核 细 胞 、 或 实 验 动 物 遗传 物 质 发 生 结 构 和 /或 数 量 改 变 的 效 应 。免 疫 毒 性 （ Immunotoxicity） ： 受 试 样 品 引 起 机 体 免 疫 功 能 抑 制 或 异 常 增 强的 效 应 。神 经 毒 性 （ Neurotoxicity） ： 受 试 样 品 对 神 经 系 统 功 能 或 结 构 的 损 害 效 应 。亚 慢 性 经 口 毒 性 （ Subchronic Oral Toxicity） ： 实 验 动 物 在 其 部 分 生 存 期 （ 不超 过 10%寿 命 期 ） 内 ， 每 日 经 口 接 触 受 试 样 品 后 所 引 起 的 健 康 损 害 效 应 。亚 慢 性 经 皮 毒 性 （ Subchronic Dermal Toxicity） ： 实 验 动 物 在 其 部 分 生 存 期（ 不 超 过 10%寿 命 期 ） 内 ， 每 日 经 皮 接 触 受 试 样 品 后 所 引 起 的 健 康 损 害 效 应 。亚 慢 性 吸 入 毒 性 （ Subchronic Inhalation Toxicity） ： 实 验 动 物 在 其 部 分 生 存期 （ 不 超 过 10%寿 命 期 ） 内 ， 每 日 经 呼 吸 道 接 触 受 试 样 品 后 所 引 起 的 健 康 损 害 效应 。5蓄 积 毒 性 （ Cumulative Toxicity） ： 受 试 样 品 在 体 内 蓄 积 引 起 的 有 害 效 应 ，蓄 积 有 两 种 形 式 ： （ 1） 物 质 蓄 积 ， 即 长 期 反 复 接 触 受 试 样 品 时 ， 由 于 吸 收 速 度 超过 消 除 速 度 导 致 的 该 物 质 在 体 内 逐 渐 增 多 ；（ 2） 功 能 蓄 积 ， 即 受 试 样 品 虽 然 在 体内 的 代 谢 和 排 出 速 度 较 快 ， 但 其 造 成 的 损 伤 恢 复 慢 ， 在 前 一 次 的 损 伤 未 恢 复 前 又发 生 新 的 损 伤 ， 如 此 残 留 损 伤 的 累 积 称 为 功 能 蓄 积 。致 畸 性 （ Teratogenicity） ： 受 试 样 品 在 胚 胎 发 育 期 引 起 胎 仔 永 久 性 结 构 和 功能 异 常 的 效 应 。生 殖 毒 性 （ Reproduction Toxicity） ： 受 试 样 品 对 亲 代 繁 殖 功 能 或 能 力 的 影 响和 /或 对 子 代 生 长 发 育 的 损 害 效 应 。生 长 发 育 毒 性 （ Developmental Toxicity） ： 妊 娠 动 物 接 触 受 试 样 品 而 引 起 的子 代 在 出 生 以 前 、 围 产 期 和 出 生 以 后 所 显 现 出 的 机 体 缺 陷 或 功 能 障 碍 。无 可 见 有 害 作 用 水 平 （ No Observed Adverse Effect Level， NOAEL）：在规定 的 试 验 条 件 下 ， 用 现 有 的 技 术 手 段 或 检 测 指 标 未 观 察 到 任 何 与 受 试 样 品 有 关 的毒 性 作 用 的 最 大 染 毒 剂 量 或 浓 度 。最 低 可 见 有 害 作 用 水 平 （ Lowest Observed Adverse Effect Level， LOAEL）：在 规 定 的 试 验 条 件 下 ， 受 试 样 品 引 起 实 验 动 物 形 态 、 功 能 、 生 长 发 育 等 发 生 有 害改 变 的 最 低 染 毒 剂 量 或 浓 度 。慢 性 毒 性 （ Chronic Toxicity） ： 实 验 动 物 在 其 正 常 生 命 期 的 大 部 分 时 间 内 接触 受 试 样 品 所 引 起 的 健 康 损 害 效 应 。致 癌 作 用 （ Carcinogenesis） ： 受 试 样 品 引 起 肿 瘤 发 生 率 和 /或 类 型 增 加 、 潜伏 期 缩 短 的 效 应 。基 线 剂 量 （ Benchmark Dose, BMD）：由于 NOAEL 和 LOAEL 都 是 实 验 中的 具 体 剂 量 值 ， 易 受 每 组 样 本 含 量 大 小 和 组 间 距 宽 窄 等 因 素 影 响 ， 故 设 定 基 线 剂量 ， 可 选 择 ED1（ 概 率 为 1%的 受 试 个 体 出 现 效 应 的 剂 量 ）， 或 选 择 ED5（ 概 率 为5%的 受 试 个 体 出 现 效 应 的 剂 量 ） 或 ED10（ 概 率 为 10%的 受 试 个 体 出 现 效 应 的 剂量 ） 的 95%可 信 限 下 限 。毒 物 代 谢 动 力 学 （ Toxicokinetics） ： 定 量 研 究 毒 物 在 体 内 吸 收 、 分 布 、 生 物转 化 、 排 泄 等 过 程 随 时 间 变 化 的 动 态 规 律 的 学 科 。安 全 系 数 （ Safety Factor， SF） ： 在 以 动 物 试 验 数 据 外 推 到 人 ， 或 以 小 范 围人 群 调 查 结 果 判 断 所 评 价 的 化 学 品 对 大 范 围 人 群 的 有 害 作 用 时 ， 为 排 除 所 涉 及 的不 确 定 因 素 而 设 定 的 系 数 ， 用 于 制 定 化 学 品 控 制 标 准 ， 以 保 证 接 触 人 群 的 安 全 。6危 险 性 参 考 剂 量 （ Risk Reference Dose， RfD） ： 危 险 度 达 到 可 接 受 程 度 的 剂量 。危 险 性 参 考 浓 度 （ Risk Reference Concentration， RfC） ： 危 险 度 达 到 可 接受 程 度 的 浓 度 。日 允 许 摄 入 量 （ Acceptable Daily Intake， ADI） ： 终 身 每 日 摄 入 化 学 物 而 不引 起 可 检 出 的 健 康 损 害 效 应 的 剂 量 ， 一 般 以 mg/kg bw.d 表 示 。（ 致 癌 物 的 ） 实 际 安 全 剂 量 （ Visual Safe Dose， VSD） ： 化 学 品 引 起 致 癌 率有 99%的 把 握 低 于 10-6 的 剂 量 水 平 。职 业 接 触 限 值 （ Occupational Exposure Limit， OEL） ： 是 职 业 性 有 害 因 素的 接 触 限 制 量 值 ， 指 劳 动 者 在 职 业 活 动 过 程 中 长 期 反 复 接 触 对 机 体 不 引 起 急 性 或慢 性 有 害 健 康 影 响 的 容 许 接 触 水 平 。最 高 容 许 浓 度 （ Maximal Allowable Concentration， MAC） ： 指 工 作 地 点 、在 一 个 工 作 日 内 、 任 何 时 间 均 不 应 超 过 的 有 毒 化 学 物 的 浓 度 。5 化 学 品 毒 性 鉴 定 程 序 和 方 法化 学 品 毒 性 鉴 定 分 为 4 个 阶 段（ 1） 第 一 阶 段 （ 急 性 毒 性 试 验 、 眼 刺 激 试 验 和 皮 肤 刺 激 试 验 ）主 要 是 急 性 毒 性 参 数 的 测 定 和 了 解 受 试 样 品 对 皮 肤 、 粘 膜 的 刺 激 性 以 及 致 敏性 ， 为 毒 性 分 级 和 标 签 管 理 提 供 依 据 。 同 时 ， 可 了 解 受 试 样 品 对 机 体 造 成 急 性 损害 的 可 能 性 和 严 重 程 度 ， 并 为 第 二 阶 段 各 项 试 验 的 剂 量 设 计 提 供 依 据 。 在 测 定LD50 时 ， 一 般 要 求 用 两 种 动 物 ， 染 毒 途 径 应 包 括 所 有 人 体 可 能 的 接 触 途 径 。急 性 吸 入 毒 性 试 验急 性 经 皮 毒 性 试 验急 性 经 口 毒 性 试 验急 性 眼 刺 激 性 /腐 蚀 性 试 验皮 肤 刺 激 性 /腐 蚀 性 试 验皮 肤 变 态 反 应 试 验 （ 皮 肤 致 敏 试 验 ）（ 2） 第 二 阶 段 （ 亚 急 性 毒 性 试 验 和 致 突 变 试 验 ）主 要 是 了 解 受 试 样 品 的 亚 急 性 毒 性 和 遗 传 毒 性 ， 为 第 三 阶 段 各 项 试 验 剂 量 设计 和 观 察 指 标 的 选 择 提 供 依 据 ， 并 对 受 试 样 品 的 致 癌 性 进 行 预 测 。鼠 伤 寒 沙 门 氏 菌 回 复 突 变 试 验 （ Ames 试 验 ）体 外 哺 乳 动 物 细 胞 染 色 体 畸 变 试 验7体 内 哺 乳 动 物 骨 髓 细 胞 染 色 体 畸 变 试 验体 内 哺 乳 动 物 骨 髓 嗜 多 染 红 细 胞 微 核 试 验哺 乳 动 物 精 原 细 胞 /初 级 精 母 细 胞 染 色 体 畸 变 试 验 ， 或精 子 畸 形 试 验啮 齿 类 动 物 显 性 致 死 试 验免 疫 毒 性 评 价 试 验 方 法亚 急 性 吸 入 （ 14/28 天 ） 毒 性 试 验亚 急 性 经 皮 （ 21/28 天 ） 毒 性 试 验亚 急 性 经 口 （ 28 天 ） 毒 性 试 验（ 3） 第 三 阶 段 （ 亚 慢 性 毒 性 试 验 、 致 畸 试 验 、 繁 殖 试 验 ）通 过 亚 慢 性 试 验 进 一 步 确 定 多 次 重 复 染 毒 的 毒 作 用 性 质 和 靶 器 官 ， 初 步 确 定NOAEL 或 LOAEL， 为 第 四 阶 段 各 项 试 验 的 剂 量 设 计 和 观 察 指 标 的 选 择 提 供 依据 ； 通 过 致 畸 试 验 判 断 受 试 样 品 的 胚 胎 毒 性 及 其 是 否 有 致 畸 性 。 通 过 繁 殖 试 验 ，可 判 断 受 试 样 品 对 生 殖 过 程 的 损 害 作 用 。 通 过 迟 发 性 神 经 毒 性 试 验 ， 可 判 断 受 试样 品 是 否 具 有 迟 发 性 神 经 毒 作 用 。亚 慢 性 吸 入 毒 性 试 验亚 慢 性 经 皮 毒 性 试 验亚 慢 性 经 口 毒 性 试 验致 畸 试 验两 代 繁 殖 毒 性 试 验迟 发 性 神 经 毒 性 试 验（ 4） 第 四 阶 段 （ 慢 性 毒 性 试 验 和 致 癌 试 验 ）通 过 慢 性 毒 性 试 验 可 确 定 受 试 样 品 的 NOAEL 和 LOAEL， 为 推 算 受 试 样 品的 安 全 接 触 限 值 提 供 依 据 。 通 过 致 癌 试 验 可 以 确 定 受 试 样 品 对 受 试 实 验 动 物 的 致癌 性 。 通 过 代 谢 动 力 学 试 验 可 以 了 解 受 试 样 品 的 吸 收 、 分 布 、 代 谢 和 排 泄 特 点 ，了 解 蓄 积 毒 性 作 用 及 其 可 能 的 靶 器 官 和 毒 作 用 机 理 。参 考 方 法慢 性 吸 入 毒 性 试 验慢 性 经 皮 毒 性 试 验慢 性 经 口 毒 性 试 验致 癌 试 验 或 慢 性 毒 性 试 验 合 并 致 癌 试 验毒 物 代 谢 动 力 学 试 验皮 肤 变 态 反 应 试 验 -局 部 淋 巴 结 法8大 肠 杆 菌 回 复 突 变 试 验酵 母 菌 基 因 突 变 试 验体 外 哺 乳 动 物 细 胞 正 向 基 因 突 变 试 验果 蝇 伴 性 隐 性 致 死 试 验枯 草 杆 菌 基 因 重 组 试 验体 外 哺 乳 动 物 细 胞 程 序 外 DNA 合 成 （ UDS） 试 验体 内 哺 乳 动 物 外 周 血 细 胞 微 核 试 验体 外 哺 乳 动 物 姊 妹 染 色 单 体 交 换 （ SCE） 试 验体 内 哺 乳 动 物 骨 髓 细 胞 姊 妹 染 色 体 交 换 （ SCE） 试 验繁 殖 /生 长 发 育 毒 性 筛 选 试 验亚 急 性 毒 性 合 并 繁 殖 /发 育 毒 性 筛 选 试 验一 代 繁 殖 试 验神 经 毒 性 筛 选 组 合 试 验6 化 学 品 毒 性 鉴 定 项 目 的 选 择 原 则6.1 试 验 项 目 的 选 择