饲料中脂溶维生素检测技术及研究进展【ppt课件】

饲料中脂溶维生素检测技术及研究进展,国家饲料质量监督检验中心 （北京） 赵小阳,报告内容,维生素检测依据（现行标准及在研进展） 维生素质控案例分析及解决方案 维生素检测风险规避,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,饲料和饲料添加剂管理条例2012年5月1日起实行。目前饲料和饲料添加剂生产企业及用户最为关注的。第三章第十四条第三项中规定：饲料和饲料添加剂生产企业必须具备有必要的产品质量检验机构、人员、设施和质量管理制度。相关配套法规：饲料添加剂（混合剂）生产企业许可条件饲料生产企业许可条件中规定：固、液态维生素预混合饲料生产企业配备高效液相色谱仪（配备紫外检测器），要求能够检测维生素。,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,一.已颁布实施的13项饲料和饲料添加剂维生素A、D3、E、K3的国家标准： GB/T7292-1999 饲料添加剂 维生素A乙酸酯微粒 GB/T23386-2009 饲料添加剂 维生素A棕榈酸酯 GB/T9840-2006 饲料添加剂 维生素D3微粒 NY/T1246-2006 饲料添加剂 维生素D3（胆钙化醇）油 GB/T7293-2006 饲料添加剂 维生素E粉 GB/T9454-2008 饲料添加剂 维生素E GB/T9455-2009 饲料添加剂 维生素AD3微粒 GB/T7294-2009 饲料添加剂 亚硫酸氢钠甲钠醌（维生素K3） GB/T26442-2010 饲料添加剂 亚硫酸氢烟酰胺甲钠醌 GB/T17817-2010 饲料中维生素A的测定 高效液相色谱法 GB/T17818-2010 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法 GB/T17812-2008 饲料中维生素E的测定 高效液相色谱法 GB/T18872-2002 饲料中维生素K3的测定 高效液相色谱法,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,二.在研标准：GB/T7292-1999 饲料添加剂 维生素A乙酸酯微粒标准名称改为饲料添加剂 维生素A乙酸酯（微粒/油）；增加适用范围：包括：50万IU/g、65万IU/g、100万IU/g，或根据合同要求确定。鉴别实验补充高效液相色谱法鉴别。根据不同企业合成工艺，对提取方法进行改进，由超声提取10min改为30min；规定重复性：同一分析者对同一试样同时两次平行测定所得结果的相对偏差不大于5%。补充卫生指标及检验方法。补充了维生素A油剂的检验标准。,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,维生素A乙酸酯标准溶液色谱图,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,维生素A乙酸酯样品溶液色谱图,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,二.在研标准：GB/T9840-2006 饲料添加剂 维生素D3微粒参与的修订工作：建议补充反相色谱检验方法。NY/T1246-2006 饲料添加剂 维生素D3（胆钙化醇）油（制定强制性国家标准）进一步完善标准的适用范围，增加了反相色谱检验方法，增加了强制执行的卫生指标,技术关键点：预D3与D3的转换系数的测定。,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,维生素D3标准溶液反相色谱图,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,维生素D3标准溶液90加热30min后反相色谱图,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,维生素D3油剂样品反相色谱图,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,二.在研标准：GB/T18872-2002 饲料中维生素K3的测定 高效液相色谱法1224号公告在配合饲料或全混合日粮中的推荐添加量：猪：0.5mg/kg；鸡：0.40.6mg/kg；鸭：0.5mg/kg；水产动物：216mg/kg。最高限量：猪：10mg/kg；鸡：5mg/kg。定量限改为0.4mg/kg，补充MNB、MPB的检验方法，氨水水解改为碳酸钠水解。,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,三.饲料中维生素A、D3、E的检验方法标准： ISO方法：ISO 6867-2000 动物饲料 维生素E含量的测定 高效液相色谱法 ISO 14565-2002 动物饲料 维生素A含量的测定 高效液相色谱法AOAC (美国官方分析化学家协会)方法：AOAC Official Method 2001.13 Determination of Vitamin A(Retinol) in Foods Liquid Chromatography (First Action 2001)AOAC Official Method 999.15 Vitamin K in Milk and Infant Formulas Liquid Chromatographic Method (First Action 1999)AOAC Official Method 995.05 Vitamin D Infant Formulas and Enteral Products Liquid Chromatographic Method (First Action 1995),维生素检测依据（现行标准及在研进展）,国家标准与国际方法比较： ISO、AOAC方法：样品预处理也是皂化法，石油醚萃取，HPLC测定。 国家标准：对于维生素预混料的检测补充了快速提取法，可针对不同样品用不同提取方法，提高了工作效率，方法更加科学完善。,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,第一法：皂化提取法（仲裁法）:,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,第二法：直接提取法:适用范围：适用维生素预混料，第二法样品预处理简单、快速、准确，提高了实验室工作效率。原理：用甲醇提取维生素预混料中的维生素A、D3、E，经色谱柱分离，紫外检测器（或二极管矩阵检测器）测定，外标法计算含量。关键点：VA在甲醇中不稳定，样品处理之后，马上上HPLC检测。,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,维生素预混料中维生素A的色谱图：,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,维生素预混料中维生素D3的色谱图：,维生素检测依据（现行标准及在研进展）,维生素预混料中维生素E的色谱图：,维生素质控案例分析及解决方案,一.标准的适用范围：例如：本标准方法适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料和维生素预混料。案例一：送检的样品：液体多维（VA）、稚蟹粉（VD3）、竹叶提取物饲料添加剂预混料（A、D3、E、K3）、棕榈颗粒（A、D3、E、K3）酵母粉（VA）等，如果不在标准适用范围内，可以检测，但不接受检测结果的复议。,维生素质控案例分析及解决方案,二.适用范围符合,但是没有达到定量限案例二:生产企业自检：鱼用多维中维生素D3含量100万IU/kg（定量限500万IU/kg），用直接提取法检测含量不够，使用客户投诉生产企业。原因：使用检测方法不对，虽然是维生素预混料，但是含量没有达到方法规定的定量限，色谱峰基线没有回到原点，基线倾斜，积分误差大，结果偏低，必须用皂化方法处理样品，才能得到准确结果。由于皂化法很烦琐，处理两三个样品需要一整天的时间，多数维生素生产企业不愿意使用皂化方法。案例三:复合预混料中叶酸添加200mg/kg，未检出，标准方法中规定的定量限500mg/kg，生产企业可以跟使用企业协商用企标检验。,新标准对企业的影响-维生素质控案例分析及解决方案,维生素质控案例分析及解决方案,三.标准中的仲裁检验方法：如果使用标准中的非仲裁方法（快速、简便）检测结果不符，一般要再用仲裁法检测。案例四：送检维生素预混和饲料中的维生素D3,检测结果只有添加量的60%，为了查找原因又送来同一批六个维生素D3原料检测，用非皂化方法检测含量只有38-40万IU/g,用仲裁法检测，检测结果为54万IU/g。原因：维生素D3的剂型不同，水弥散型的剂型样品预处理必须皂化，直接用有机溶剂提取不完全，后来得知客户所用的该产品的生产企业确实生产水溶维生素D3。由于客户没有提供详细的样品信息，同时生产企业与使用企业之间对标准了解欠缺，造成了一些纠纷。,维生素质控案例分析及解决方案,维生素质控案例分析及解决方案,三.企业标准与国家标准产品含量规定不一致：饲料标签是强制执行的基础标准，标签上必须注明产品质量执行的标准。案例五：标签注明的是执行国家标准，国标中该产品含量计算时没有注明以干基计，但是标签上产品含量标注的是以干基计，与国标不一致。,维生素质控案例分析及解决方案,五.添加成分对检测结果的影响案例六：维生素预混料中烟酰胺含量检测结果偏高,原因：添加的是亚硫酸氢烟酰胺甲萘醌，GB/T2