免疫组化结果判断及常见问题的分析

免疫组化结果判断及常见问题分析武汉大学病理学教研室 杨飞肝脏： CK8理想着色，胆管上皮细胞强阳性，肝细胞呈不同层次阳性。pan CK（ AE1/AE3） 在肝脏理想的染色，采用了热修复。肝细胞膜、胆管强而清晰的着色。背景干净。一、特异性染色的判断1.特定的定位 细胞阳性 根据靶抗原不同而呈现胞膜型、胞浆型或胞核型间质阳性 表现为细胞外着色，局限性或弥散性2.染色的不均一性阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少 3.排除人为造成的非特异性染色切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。4.颗粒性显色DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER合格 的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提不合格 的免疫组化染色切片容易导致误判C-erbB-2优良中差4321ER子宫内膜 PR染色，修复不足 子宫内膜 PR染色，修复良好 PR编 号 阳性片 待 检 片 阴性 对 照 结论12345操作失 误 ，抗体失效非特异性着色阳性片不含靶抗原待 检 片不含定位抗原待 检 片含定位抗原二、染色结果的判断PCNA S-P400S-P4001-day CM4-day CM阳性强度2010视野下，随机选取 5个视野，测 100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度。三、结果分析P53阳性细胞百分比计数 100个瘤细胞，其中阳性细胞的比例： 5% （）5%30% （）30%50% （ ） 50% （ ）PCNABarnes法A： 瘤细胞显色有无及深浅0（不着色） 1（浅黄色）2（棕黄色） 3（棕褐色）B： 显色细胞的比例1（ 1%10% ）2（ 11%50% ）3（ 51%80% ）4（ 80% ）评分 =AB0分：阴性14分：弱阳性 4分：强阳性胶原染色阳性面积百分比4010视野，选取 5个视野，计算阳性区域面积占整个参考面积的百分率。CD34Weidner 法（ MVD计数）1. 孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管。2. 低倍镜下找到组织内密度最高区域。3. 4010视野下计数微血管数目。K-ras VEGF附：定量分析 图象处理系统1、图象处理 ：利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。1） “狭义 ”指消除图象的模糊不清部分，校正畸变。2） “广义 ”包括对图象的结构分析，提取特征进行测量。2、图象处理系统组成图象输入（显微镜、扫描仪）图象处理运算（病理图文分析软件）图象、数据输出3、图象处理系统功能几何形态学定量分析细胞核、浆的大小、面积、核浆比； 细胞分布密度、个数； 血管、腺体的面积、密度；间质的面积免疫组织化学分析按着色灰度分类，计算阳性、阴性细胞的面积含量DNA倍体分析计算正常细胞及肿瘤细胞 DNA 含量，给出倍体参数、 DNA参数分布直方图AgNOR分析颗粒分析：数目、大小、面积、比例四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着色原因 对 策操作 过 程冲洗不充分 每步冲洗 35min内源性 过 氧化物 酶 3 H2O2封 闭内源性生物素 使用生物素阻断 试剂 盒阻断电 荷吸附 非免疫 动 物血清封 闭抗体不 纯 采用 单 克隆抗体切片制片不当 改善取材和制片加 试剂