分离以尿素为氮源的微生物

实验 2 分离 以尿素为氮源的 微生物细菌尿素 NH3中性 碱性酚红颜色： 黄色 红色(变色范围 pH6.4-8.2)任务 1：怎么从土壤中分离出它们呢？利用以尿素为唯一氮源的培养基进行筛选。配制培养基 尿素培养基葡萄糖 0.025gNaCl 0.12gK2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g酚红 0.25g尿素 10ml选择培养基琼脂是未被纯化的混合物 ,内含一定量的含氮化合物（ 1）将土壤中的固氮菌分离出来（ 2）将土壤中自养微生物分离出来举一反三（ 3）筛选出抗青霉素的微生物（ 4）筛选出耐高浓度食盐的微生物 2、要验证以尿素为唯一氮源的培养基对土壤中的细菌确实具有选择作用，你该如何设计实验。思考： 配制培养基 尿素培养基葡萄糖 0.025gNaCl 0.12gK2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g酚红 0.25g尿素 10ml LB培养基蛋白胨： 0.25g酵母粉： 0.12gNaCl： 0.25g琼脂糖： 0.5g 对照组选择培养基实验组3、请你提供一种方法，判断分解尿素的细菌确实能将尿素分解成氨。思考： 方法：在以尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂 ,接种培养该细菌，若指示剂变红，说明该种菌分解了尿素。二、实验目的 : 使用以尿素为 唯一氮源 的培养基分离细菌 (有脲酶) 通过指示剂（酚红） 颜色的变化 检知 培养基 pH的变化 (脲酶催化的化学反应 ) 统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生物的数量三、实验中涉及到的一些问题：（一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（选材的问题）（二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？（三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低？（四）统计微生物的数量可用哪些方法？没硬化，腐殖质丰富的土壤碳源、尿素、无机盐、水、酚红培养基红色的深浅稀释涂布平板法，显微镜直接计数法三、实验中涉及到的一些问题：（五）用稀释涂布平板法计数时，菌落数在 30-300计数。重复性原则对照原则 （排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验的可信度）做一系列浓度梯度实验，探究合适的稀释度（六）实验设计要遵循的原则：过滤灭菌后的尿素（二）制备细菌悬液制备成 10-2、 10-3、 10-4、 10-5土壤稀释液配制菌悬液1个 99ml无菌水 2个 4.5ml无菌水得 10-2, 10-3, 10-4的菌悬液1g土壤倒平板 需要倒 3个 LB平板， 9个尿素平板LB(对 照)尿素10-310-410-5每个稀释度 1个 LB对照平板 3个尿素平板 (平行重复组 )接种 取 0.1ml菌悬液涂布分离高浓度 低浓度，换枪头低浓度 高浓度，可不用换枪头涂布分离37 倒置培养按浓度捆成一摞恒温 37 培养10-4 、 10-3,、 10-2利用血球计数板的缺点 :不能区分死菌与活菌不适于对运动的细菌计数需要相对高的细菌浓度个体小的细菌在显微镜底下难以观察5.在做分离分解尿素的细菌实验时， A同学从对应 106培养基上筛选出大约 150个菌落，而其他同学只选择出大约 50个菌落。 A同学的结果产生原因可能有 ( ) 由于土样不同 由于培养基污染 由于操作失误 没有设置对照A B C D A 练习题1、选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 阻止 特定抑制2、常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有 直接计数。 显微镜 稀释度细菌30-3003、在同一稀释度下，至少对 3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。 平均数 4、用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为 106的培养基中得到以下几种统计结果，正确的是A涂布了一个平板，统计的菌落数是 230B涂布了两个平板，统计的菌落数是 215和 260，取平均值 238C涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 21、 212和 256，取平均值 163D涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 2l0、 240和 250，取平均值 233D 5.在做分离分解尿素的细菌实验时， A同学从