南医微生物实验课件二

微生物与免疫学试验（二）实验内容 1、录像：免疫标记技术 2、介绍：血清学反应 3、示教：单扩、双扩、火箭电泳、对流免疫电泳、淋转、 E花环 4、操作：玻片凝集血清学反应 抗原与相应抗体相遇可发生特异性结合，在外界条件影响下呈现肉眼可见的反应。实验所用抗体通常存在于血清中，故名。1) 特异性2) 可逆性3) 结合物的可见性与 带现象前带现象：抗体过剩后带现象：抗原过剩比例适当：较大的晶格状免疫复合物 特点 （ 抗原抗体反应的特点）抗原抗体反应的影响因素浓度与比例电解质温度酸碱度 血清学反应的种类1）凝集反应（ agglutination）2）沉淀反应（ precipitation）3） 补体结合试验（ complement fixation test, CFT）4） 中和反应（ neutralization）5）免疫标记技术抗原的分类与抗原抗体反应的分类颗粒性抗原凝集反应可溶性抗原沉淀反应（一）凝集反应颗粒性抗原可溶性抗原载体（与免疫无关） 直接凝集反应：玻片法：定性，测抗原试管法（肥达试验）：半定量，测抗体 间接凝集反应 间接凝集抑制试验（二）沉淀反应概念：可溶性抗原 + 抗体 沉淀物单向琼脂扩散、火箭电泳：抗原定量试验抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）双向琼脂扩散、对流免疫电泳：抗原分析、抗原定性试验等抗原、抗体同时扩散（自由、定向）单向 琼脂 扩散单向琼脂扩散试验 是一种定量试验。将一定量 已知 抗体混于琼脂中 ，制板， 在适当位置打孔 ， 将抗原加入孔中扩散 ， 与板中抗体相遇 ， 在比例合 适 处呈现白色沉淀环 ， 环的直径与抗原 含量 成正比 。主要用于 测定 血清各种 Ig和补体成分的含量单向定量免疫电泳 （ 火箭电泳 ）将一定量 已知 抗体混于琼脂中 ，制板， 在 板 的一端打一排小孔 ， 加入待检样品 ， 置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰 ， 状如火箭 ， 称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。敏感度与单扩相仿 ， 但需时较短。双向 琼脂 扩散在 琼脂板上打孔 ， 抗原和抗体分别加到相应孔中 ，二者自由 向四周扩散 ， 在比例合适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统 ， 可出现多条沉淀线。可用 于 分析和鉴定标本中多种抗原成分对流免疫电泳打孔： 金属打孔器打两排孔 ， 抗原孔与抗体孔间距离为 4毫米 至 5毫米。加样 ： 抗血清加于抗体孔内 ；待测抗原、 阳性 、 阴性对照 抗原 分 别 加于抗原孔内电泳 ： 将琼脂 板 置电泳槽 ， 抗原孔置阴极端 ，抗体孔置阳极端 。 板 两端分别用湿纱布与缓冲液相连 ，通电 30分钟。结果： 在相应抗原、抗体孔间 出现 沉淀线。（三）补体结合试验l方法：待检系统： Ag（未知） +Ab（已知） +补体指示系统：绵羊红细胞（ Ag）溶血素（ Ab）l结果：溶血 阴性不溶血 阳性（四）中和反应（ neutralization）病毒中和试验毒素中和试验（五）免疫标记技术将已知抗体或抗原标记显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。常用的标记物有：酶、荧光素、放射性同位素、胶体金等淋巴细胞转化试验转化百分率正常值为 70% 左右分裂相：即染色体型母细胞：大 4-5倍；核质疏松，有 1-3个核仁；核周透明区；胞浆有空泡过渡型：略大；核质略疏松；着色较淡小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少E玫瑰花环试验T细胞表面有绵羊红细胞受体，可在自然情况下与绵羊红细胞结合，形成 E玫瑰花环，由此可区分 T淋巴细胞与 B淋巴细胞。直接凝集反应 玻片凝集 材料：玻片 1张 /1人， 1号、 2号菌落，生理盐水，诊断血清，接种环 方法：取生理盐水 3 4环，菌落 1 2环，后加血清 2环轻摇玻片， 1 2分钟后观察 结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应*玻片