实验一显微镜的使用及细菌的观察

实验室规则 接触到病原菌，一定要坚持无菌操作 进实验室穿上白大衣，离开时反折 严禁饮食，也不要以手抚摸头、面等部位 若发生吸入菌液，割破手指等事故，必须报告老师 接触过菌液的吸管、玻片等器材，投入含有 23%来苏儿的容器内 实验完毕，整理桌面微生物实验要求 做实验后要认真完成实验报告，所得结果必须真实记录浙江大学实验报告 课程名称： 实验类型： 实验项目名称： 学生姓名： 专业： 学号： 同组学生姓名： 指导老师： 实验地点： 实验日期： 年 月 日 实验目的和要求（必填） 实验内容和原理（必填） 主要仪器设备 操作方法与实验步骤 实验数据记录和处理 实验结果与分析（必填） 讨论、心得实验一 显微镜的使用及细菌的观察实验内容 操作： 油镜的使用 细菌材料玻片标本制备 革兰染色法 （ Gram Stain ） 示教 细菌的基本形态 链球菌 螺形菌 - 弧菌（霍乱弧菌） 细菌的特殊结构 鞭毛（变形杆菌） 荚膜（肺炎链球菌） 芽胞（破伤风梭菌）实验目的 掌握油镜的使用和保护 熟悉细菌的基本形态和特殊结构的镜下特点 掌握无菌操作 掌握革兰染色法显微镜的使用和保护 - 原理 油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间不是隔一层空气，而是隔一层油质称为油浸系。这种油常选用香柏油 如果玻片与物镜之间的介质为空气，称为干燥系，当光线通过载玻片后，受折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这就降低了视野的照明度 香柏油的折射率 n 1.515，与玻璃 n 1.52相近。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射油浸没物镜 介质：空气；香柏油油镜的识别 油镜的镜筒最长，透镜直径最小，上面刻有 90倍或 100倍或 Oil等油镜的使用 先按低倍镜到高倍镜的操作步骤找到物像，并将观察部分移至视野的中央。 转动旋转盘，使高倍镜移向一侧，在盖玻片上滴一滴香柏油，然后将油镜对准通光孔， 使油镜下端与香柏油接触 (注意操作动作要慢，以免压碎玻片或损坏镜头)。 从目镜内观察，微微上下转动细调节器，至视野内出现清晰的物像时为止。 油镜使用完毕后，必须用拭镜纸沾少许二甲苯将油镜上的香柏油擦净，并用干的拭镜纸檫去二甲苯。 显微镜用毕后，升高镜简，取下玻片标本，转动旋转盘，使每个物镜都不对准通光孔，再下降镜筒，使物镜接近载物台，将聚光镜降下，最后放回橱内。 细菌材料玻片标本制备 涂片 -干燥 -固定 涂片： 先取一接种环生理盐水放于载玻片的一端，左手持菌液试管，右手持接种环，用接种环从试管培养液中挑取少许 大肠杆菌或葡萄球菌 培养物与盐水混匀，涂成直径约 1厘米的涂片，涂片应薄而均匀。 干燥： 涂片最好放置室温中，待其自然干燥。 固定： 手执玻片的一端标本面向上，在火焰外层较快地来回通过三次，约 23秒，以玻片反面触及皮肤，以不觉过分地烫为度。待放置冷却后，进行染色。 掌握无菌操作 拔或塞试管帽时，应将试管口通过火焰略加烧灼； 接种环使用前后应在火焰上烧灼灭菌固定的目的 杀死微生物，固定其细胞结构 保证菌体能牢固地粘附在载玻片上，以免水洗时被水冲掉 改变菌体对染料的通透性，一般死细胞原生质容易着色。革兰染色法 由丹麦 C.Gram于 1884年创立，是细菌学中很重要的鉴别染色法，通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰阳性菌（ G+）和革兰阴性菌（ G-）两大类 细菌细胞壁的结构革兰染色法原理 G菌 胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入。同时乙醇使细胞壁脱水形成一道屏障，阻止结晶紫 碘复合物从胞内渗出，故细菌仍保留初染时的 紫色。 G菌 胞壁结构较为疏松，肽聚糖层很薄，外膜含大量脂质，易被乙醇溶解，致使细胞壁通透性变大，使结晶紫 -碘复合物被乙醇溶解析出而脱色，故细菌呈复染时的 红色革兰染色方法 初染：滴加 结晶紫 染液 ,染 1分钟 ,水洗 . 媒染：滴加 卢戈氏碘液 ,作用 1分钟后 ,水洗 . 脱色：加 95%酒精 23滴于涂片上 ,频频摇晃 35秒钟后 ,斜持玻片 ,使酒精流去 ;再滴加酒精 ,如此反复 23次 ,直至流下的酒精无色或稍呈淡紫色时为止 ,约半分钟。水洗 复染：滴加 稀释石炭酸复红 染 1/21分钟,水洗 ,待干 ,油镜检查 . （ 紫碘 酒 红 、分分半半）革兰染色结果 - 阳紫 阴红 凡能固定结晶紫与碘的复合物 ,而不易被酒精脱色 ,仍保留紫色 ,称为 革兰阳性菌 . 凡易能被酒精脱色 ,再经复染成红色的细菌 ,称为 革兰阴性菌阳球 阴杆 ，脑、淋、白、胞、抗例外仔细观察（染色性，形态，排列），绘图革兰染色的意义 鉴别细菌： 鉴别 G+, G-,初筛标本 选择用药 致病物质 大多 G+ 外毒素， G- 内毒素示教 - 细菌的基本形态 细菌从形态上分，主要有球菌、杆菌、螺形菌三种。 链球菌的示教片 霍乱弧菌的示教片示教 - 细菌的特殊结构 细菌的特殊结构：芽胞、荚膜、鞭毛，另一种菌毛在电镜下才可以见到。 芽胞 增强细菌对不良环境的抗性； 荚膜 抗吞噬、抗损伤、抗干燥； 鞭毛