实验一通课--2013-4

实验一通课实验一通课v 第一次上课时间为 4月 8日上午 8： 00， 5个学时。v 第一次课请教师提前 20分钟到，借示教镜，留学生名单及 班长电话 ；安排值日分组；学生实验报告册标出第几实验室。v第一次实验内容（ 3个）一、实验室生物安全 (0.5学时 )熟悉 （ 1）微生物学实验室生物安全意义（ 2）实验室规则二、革兰染色及细菌特殊结构观察 (3学时 ) （ 1）革兰染色（ 2.5学时），每人一张玻片。（ 2）细菌特殊结构（ 0.5学时），为示教内容。三、细菌接种技术 (1.5学时 ) 普通固体培养基： 9个斜面固体培养基： 9个半固体培养基： 9个液体培养基： 9个 内内 容容 提提 要要一 . 实验室生物安全 二 . 革兰染色 三 . 细菌接种技术 1.介绍实验室生物安全方面的相关知识，树立 “ 有菌的意识，无菌操作的观念 ” 。 2.掌握革兰染色方法，观察细菌的基本形态及特殊结构。3.掌握常用的细菌接种技术。实验目的v 生物危害源v 化学危害源v 物理危害源后两者的特性：1、可感知，易避免2、危害范围有限3、危害持续时间短一 .实验室生物安全 医学实验室的主要危害源包括哪些 ?v 惨痛的历史教训例一： 1956年，前苏联的一个实验室曾有 9支装有感染了 委内瑞拉马脑炎病毒 的鼠脑的安瓿被打破。由于 没采取必要的措施 ，结果在几天内造成 24名 工作人员感染。一 .实验室生物安全 例二： 2004年 4月，中国疾病预防控制中心科研人员，采用未经论证的非典病毒灭活方法， 在不符合防护要求的普通实验室内操作非典感染材料，造成北京、安徽发生非典疫情。一 .实验室生物安全 v 病原微生物实验室生物安全的核心是防扩散和防感染。一 .实验室生物安全 v 实验室感染的主要原因是：防护意识不强，操作失误，防护条件不足。v 1.进实验室必须穿白大衣， 离室需脱下反折。v 2.严禁在实验室进食、饮水， 不必需的物品不要携带入室。 v 3.如有传染性材料的污染，及时报告老师。v 4.实验后的材料要放在指定容器内 。v 5.离开实验室前，要用肥皂洗手； 接触过传染性强的实验 材料要用 0.1%的新洁尔灭浸泡消毒。v 6.值日生要作好值日工作，关好水、电、门窗，方可离开实验室。实验室规则二 .细菌的形态学检查染色标本检查单染法 ：简单染色，一种染料（美蓝染色）。 复染法 ：鉴别染色法，两种以上染料。 （革兰染色、抗酸染色） 革兰染色 (Gram stain)v 1884年由丹麦细菌学家 Gram创立。v 革兰染色是最常用的一种染色方法，可以将细菌初步分为 革兰染色阳性菌 和 革兰染色阴性菌 ，在临床上具有非常重要的意义。一、目的1.掌握细菌涂片的制备及革兰染色的方法。 2.熟悉革兰染色的原理和临床意义。二、原理G+菌 细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联度 高，脂质含量少，乙醇不易渗入。G-菌 细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄且交联度 低，含大量脂质，乙醇易渗入。通透性学说三、器材和试剂1.菌种： 白色葡萄球菌 大肠杆菌 2.试剂： 革兰染色液 初染液 结晶紫媒染液 卢戈氏碘液脱色液 95%乙醇复染液 稀释石碳酸复红3.其它： 接种环 载玻片 染色盘 洗液瓶 酒精灯等 冲洗3、使用油镜观察实验结果 四、 方法与步骤1、细菌涂片的制备涂片 干燥 固定 2、染色初染 （结晶紫） 媒染 （卢戈氏碘液） 脱色 （ 95%乙醇） 复染 （稀释石碳酸复红） 吸水纸吸干 1min 1min30s 30s冲洗 冲洗冲洗一 一 半 半 G+菌 G-菌 结晶紫卢戈氏碘液 95%乙醇石碳酸复红初染 媒染 脱色 复染 五、结果图一 图二v 无菌操作（接种环灭菌和取菌）v 涂片的厚度要适中v 染色的时间控制，一一半半v 冲洗的方法，不要对着涂片区冲洗六 、注意事项七、意义 1、鉴别细菌 2、研究与致病性 的关系 3、指导临床用药 G+菌 G-菌G+菌： 外毒素 G-菌 ： 内毒素 G+菌： 青霉素、头孢菌素等 G-菌： 链霉素、庆大霉素等 细菌的特殊结构（示教）（二毛荚一胞）寻找视野： 在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。增大光照强度： 将聚光器上升到最高位置，光圈开到最大，凹面镜取光。转高倍镜头、滴加镜油、换油镜头： 转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。注：油镜的使用方法物 镜 工作距离 (mm)低倍镜 10 5.40高倍镜 40 0.39油镜头 100 0.11透镜 折光率油 1.515 1.0 空气玻 1.52 璃 空 气油镜原理示意图v 概念： 人工配制的专供微生物生长繁殖的混合营养物制品。v 成分： 充足的营养物质（水分、碳源、氮源、无机盐）；合适的 PH；适宜的温度；适宜的气体环境。一、培养基 三 .细菌接种技术实验目的1. 掌握常用的细菌接种方法。2. 熟悉细菌生长现象的观察方法。二、培养基分类 按 物理性状 分 液体 培养基： 大量 繁殖 细菌 固体 培养基： 分离培养 细菌