实验二凝集反应

主讲教师：张秋玉 实验二 凝集反应基础医学院免疫学院Zhang Qiuyu凝集反应（ agglutination)沉淀反应 (precipitation)补体结合实验中和实验免疫酶标技术 (eg. ELISA)免疫荧光技术放射免疫技术发光免疫技术经典反应现代反应抗原抗体反应类型抗原或抗体的检测方法Zhang Qiuyu反 应类 型 抗原 类 型及例子凝集反 应 颗 粒性 Ag， 如 细 菌、 RBC、 表面 结 合可溶性 Ag的乳胶 颗 粒等沉淀反 应 可溶性 Ag， 如血清中免疫球蛋白、 补 体、FP、 HbsAg等补 体 结 合实验有 补 体参与， SRBC和其溶血素 组 成指示系 统中和 实验 特殊作用的 Ag， 如病毒、毒素、激素、 酶n 1.1 经典的血清学反应Zhang QiuyuZhang Qiuyu1.2 现代的抗原抗体反应： 现代抗原抗体反应用标记技术代替传统的肉眼可见反应，其特异性、敏感性均增加，且可以定性、定量甚至定位；缺点是需特殊精密检测仪 。 名称 标记物检测仪 器 缺点免疫 酶 标 技术酶 酶 标仪 免疫 荧 光技术荧 光 荧 光 显 微 镜 或流式 细 胞 仪放射免疫技 术 同位素 液 闪仪 放射性 污 染，有半衰期发 光免疫技术发 光剂发 光 现 微 测 定仪Zhang Qiuyu凝集反应的定义及基本类型1直接凝集试验颗粒性 Ag与相应 Ab的反应玻片法：如血型的鉴定、细菌菌种的鉴定试管法：肥达氏反应2间接凝集试验（可溶性 Ag+载体 =致敏颗粒）与相应 Ab的反应3间接凝集抑制试验可溶性 Ag与相应 Ab作用后，再与致敏颗粒反应4. 反相间接凝集试验（可溶性 Ab+载体 =致敏颗粒 )与相应 Ag的反应Zhang QiuyuZhang Qiuyu试管凝集反应示意图肥达氏反应 -用已知伤寒菌的 H(鞭毛 )和 O(菌体 )以及甲型 (A)与乙型 (B)副伤寒沙门氏菌的标准液与病人血清做凝集试验，用于伤寒副伤寒的辅助诊断或用于流行病学调查的免疫凝集实验。 Zhang QiuyuZhang QiuyuZhang QiuyuZhang Qiuyu人的红细胞表面有 20几种血型抗原系统ABO血型系统是第一个被描述的红细胞血型系统，由Landsteiner于 1901年提出：血型 A B AB O红细 胞上的凝集原（抗原） A B A和 B 无抗原血型鉴定的原理根据红细胞上所含抗原种类将人类血型分为如下血型：ABO血型系统中有两种抗原，分别称为 A抗原和 B抗原，均存在于红细胞膜的外表面。Zhang Qiuyu1. 抗原本质：血型抗原是镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白与糖脂， ABO抗原特异性是在 H抗原基础上形成的Zhang Qiuyu2. 抗体本质： 血浆中存在两种相应的抗体即抗 A抗体和抗 B抗体血型 A B AB O红细 胞上的凝集原（抗原） A B A和 B 无抗原血清中的凝集素（抗体） 抗 B 抗 A 无抗体 抗 A和抗 BABO血型系统的抗体为 天然抗体 ，主要为 IgM，不能通过胎盘。Zhang QiuyuZhang QiuyuZhang Qiuyu1. 如果交叉配血试验的两侧都没有凝集反应，为配血相合， 可以进行输血；2. 如果主侧有凝集反应，则为配血不合，不能输血；3. 如果主侧不引起凝集反应，而次侧有凝集反应，只能在应急情况下输血，输血时不宜太快太多（300ml），并密切观察，如发生输血反应，应立即停止输注。 Zhang QiuyuZhang Qiuyu载玻片 1块 /每人 *用完各自用水冲洗净置消毒缸三棱针 1根 /每人 用后弃垃圾斗棉签 根 /每人（先取再取 1) 用后弃垃圾斗牙签 1根 /每人（两端使用） 用后弃垃圾斗碘伏生理盐水试管试管架标记笔实验材料Zhang Qiuyu操作步骤 i 取血：搓揉左手无名指的指腹 碘伏消毒 用三棱针刺 1-2滴血 将无名指的指腹封住盛有盐水的试管管口，用倾倒法将血滴洗入盐水中并混匀形成 1%的血球悬液。 ii 鉴定：取洁净玻片一块，用标记笔在中央划线分区，标明 “A”、 “B”区 在 “A”、 “B”区分别滴加抗 A、抗 B血清各 1滴 用毛细吸管吸取待检的血球悬液滴入抗 A、抗 B血清中，用牙签两端分别拌匀 将玻片平持手中，前后左右转动使之充分混匀，室温放置 10-15分钟后观察结果。 Zhang QiuyuZhang Qiuyu注意事项 取血时，注意无菌操作，避免 HBsAg的交叉污染（ *HBsAg携带者）； 刺血时，尽可能一次性成功，用力适当，让血自然流出或搓揉后流出为佳，勿强行挤压。 鉴定时，滴 1滴抗血清及血球悬液即可，多则两边易混；牙签两头不可混用； O型血无凝集现象，无须反复检测。 Zhang Qiuyu血型 抗 B血清 抗 A血清O _ _A _ +B + _AB + +结果判断 Zhang QiuyuABO血型的遗传规律 ？父母血型分别为 A型、 B型，他们子女的血型可能是何种？父母分别为 A型和 O型，子女有无可能是 B型 思考 Zhang Qiuyu三、 E-花结形成实验 原理人的外周血 T淋巴细胞上特有能与绵羊红细胞结合的受体，称 E受体；在一定实验条件下，绵羊红细胞与该受体结合形成以 T细胞为中心，四周绕以绵羊红细胞的玫瑰花团，故称 E花结实验。E受体与 CD2分子、 LFA-2（ 淋巴细胞功能相关抗原）为同一物质。 Zhang Qiuyu花结 分类： Ea-RFC(效应 T细胞 )：正常值为 15-35%。 E-RFC(总和 )：正常