dna的粗提取与鉴定

第1部分专题5课题1理解教材新知把握热点考向应用创新演练知识点一知识点二考向一考向二1.DNA在 0.14 mol/L NaCl溶液中溶解度最低。2 DNA不溶于酒精，但是 细 胞中的某些蛋 白 质 溶于酒精，可利用酒精将 DNA和蛋 白 质 分开。3 DNA对 蛋白 酶 、高温和洗 涤剂 有耐受性。4在加 热 条件下， DNA遇二苯胺会被染成 蓝 色。5哺乳 动 物成熟的 红细 胞不含 细 胞核，不能作 为 提取 DNA的实验 材料。若 选 取肝 脏细 胞或植物 细 胞， 则 必 须 充分研磨。6 实验 中加入 柠 檬酸 钠 的作用：作 为 抗凝 剂 ，防止血液凝固。自读教材 夯基础 1原理(1)DNA和蛋白 质 等其他成分在 溶液中溶解度不同，利用 这 一特点， 选择 适当的 就能使 DNA充分溶解，而使 沉淀，或者相反，以达到分离目的。(2)DNA不溶于酒精溶液，但是 细 胞中的某些蛋白 质溶于酒精， 这样 可将 DNA和蛋白 质进 一步分离。不同 浓 度的 NaCl盐浓 度杂质(3)DNA的 鉴 定： DNA 。二苯胺 蓝 色元贝驾考 元贝驾考 2016科目一 科目四金手指考试 金手指驾驶员考试2 DNA的耐受性(1)蛋白 酶 不能水解 ，能水解 。(2)DNA在 变 性，大多数蛋白 质 在 就可以 变 性。(3)洗 涤剂 不能分解 ，但可以瓦解 。DNA 蛋白 质80 以上 60 80 DNA 细 胞膜如何将 DNA进 一步提 纯 ？提 纯 后是否能得到 纯净 的DNA?提示： 利用 DNA不溶于冷酒精，而蛋白 质 溶于冷酒精的原理 进 一步提 纯 DNA。提 纯 后的 DNA中仍含有一定量 杂质 。跟随名师 解疑难溶解 规 律 2 mol/LNaCl溶液0.14 mol/LNaCl溶液DNA 溶解 析出蛋白质NaCl溶液 浓 度从 2 mol/L降低的 过 程中，蛋白 质 溶解度逐 渐 增大部分 发 生 盐析沉淀 溶解DNA的溶解度溶解 规 律2 mol/LNaCl溶液0.14 mol/LNaCl溶液总结 DNA和蛋白 质 等其他成分在不同 浓 度的 NaCl溶液中溶解度不同。在 NaCl溶液 浓 度低于 0.14 mol/L时， DNA的溶解度随 NaCl溶液 浓 度的增加而逐 渐 降低；在 0.14 mol/L时 ， DNA溶解度最小；当 NaCl溶液 浓 度继续 增加 时 ， DNA的溶解度又逐 渐 增大 选择 适当的 盐浓 度就能使 DNA充分溶解，而使杂质 沉淀，或者相反，以达到分离目的自读教材 夯基础 DNA含量相 对较 高蒸 馏 水洗 涤剂NaCl溶液嫩肉粉60 75 木瓜蛋白1可否 选 用哺乳 动 物成熟 红细 胞作 实验 材料， 为 什么？提示： 不可以，因 为 哺乳 动 物成熟 红细 胞无 细 胞核。2提 纯时 ， 为 什么要 选 用体 积 分数 为 95% 的冷酒精？提示： 冷酒精提 纯 效果更好。跟随名师 解疑难 1 实验 材料的 选 取(1)鸡 血适宜作 为实验 材料的两个原因：一是因 为鸡血 细 胞核中的 DNA含量丰富，材料易得；二是因 为鸡 血细 胞易吸水 涨 破。(2)材料的 处 理 (以 鸡 血 为 例 )：2.实验过 程中的几点注意事 项(1)两次使用蒸 馏 水的作用：第一次用蒸 馏 水是使 鸡血 细 胞吸水 涨 破，提取核 DNA；第二次用蒸 馏 水稀 释NaCl溶液，使 DNA析出。 (2)实验 中三次 过滤 操作的比 较 ：过滤 次数 过滤 目的第一次 过滤 核外物 质 ，除去不溶的 杂质第二次 过滤 除 DNA外的其他核内物 质 ，尤其是核蛋白第三次 过滤 DNA滤 液(3)用玻璃棒 搅 拌 时 ， 动 作要 缓 慢且沿同一方向 进 行，目的是防止 DNA被破坏。(4)实验过 程中最好使用塑料的 烧 杯和 试 管，可减少提取 过 程中 DNA的 损 失。3 结 果分析及 评 价(1)现 象是否明 显 及可能原因：若 实验结 果不明 显 ，可能的原因是： 材料中核物 质 没有充分 释 放出来，如研磨不充分或蒸 馏 水的量不 够 。 加入酒精后 摇动 或 搅 拌 时过 猛， DNA被破坏。 二苯胺最好 现 配 现 用，否 则 二苯胺 变 成浅 蓝 色，影响 鉴 定效果。 析出含 DNA的黏稠物 时 ，蒸 馏 水要沿 烧 杯内壁慢慢地加入，不能一次快速加入，否 则 会影响 实验结 果。 实验 中有多次 搅 拌，但是其目的及操作方法是不同的，要注意区分，否 则 也会影响 结 果。(2)分析 DNA中的 杂质 ：本 实验 提取的 DNA粗制品中有可能仍然含有核蛋白、多糖等 杂质 。特 别 提醒 若 选 取肝 脏细 胞或植物 细 胞， 则 必 须 充分研磨。 柠 檬酸 钠 的作用是作 为 抗凝 剂 ，防止血液凝固。 吸去上清液的原因是 DNA主要存在于 细 胞核中。例 1 关于 “DNA的粗提取与 鉴 定 ”的 实验 ， 该实验 依据的 实验 原理不是 ( )A DNA在 NaCl溶液中的溶解度，随着 NaCl溶液 浓 度的不同而不同B利用 DNA不溶于酒精的性 质 ，可除去 细 胞中溶于酒精的物 质 而得到 较纯 的 DNAC DNA是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶 剂D在沸水中 DNA遇二苯胺会出 现蓝 色反 应解析 本 实验 依据的原理是 A、 B、 D项 三个方面。必 须明确的是 NaCl的 浓 度 为 0.14 mol/L时 ， DNA的溶解度最小，具体操作 时 用 2 mol/L的 NaCl溶液，再加水稀 释 至黏稠物 (主要是DNA)不再增多 时 ，此 时该 溶液 浓 度即 为 0.14 mol/L。 C项 是DNA的性 质 ，不能作 为该实验 的原理。答案 C(1)甲基 绿 染色法： DNA甲基 绿 染液 绿 色。(2)紫外灯照射法：用蒸 馏 水配制 质 量分数 为 0.05% 的溴化乙 锭 (EB)溶液，将玻璃棒上 缠绕 的白色絮状物抹到蜡纸 上，再滴 1滴 EB溶液染色。将蜡 纸 放在紫外灯 (260 nm)下照射 (暗室中 )，可呈 现 橙 红 色的 荧 光 (DNA的紫外吸收高峰在 260 nm处 )。(3)电 泳法：此方法适合 鉴 定 纯 度 较 高的 DNA。例 2 (2010江苏高考 )某生物 兴 趣小 组 开展 DNA粗提取的相关探究活 动 ，具体步 骤 如下：材料 处 理：称取新 鲜 的花菜、辣椒和蒜黄各 2份，每份 10 g。剪碎后分成两 组 ，一 组 置于 20 、另一 组 置于 20 条件下保存 24 h。DNA粗提取：第一步：将上述材料分 别 放入研 钵 中，各加入 15 mL研磨液，充分研磨。用两 层纱 布 过滤 ，取 滤 液 备 用。第二步：先向 6只小 烧 杯中分 别 注入 10 mL滤 液，再加入 20 mL体 积 分数 为 95% 的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓 地向一个方向 搅 拌，使絮状物 缠绕 在玻璃棒上。第三步：取 6支 试 管，分 别 加入等量的 2 mol/L NaCl溶液溶解上述絮状物。DNA检测 ：在上述 试 管中各加入 4 mL二苯胺 试剂 ，混合均匀