水稻茎线虫检疫鉴定

水稻茎线虫检疫鉴定方法Methods for quarantine and identification of Ditylenchus angustus (Butler) Filipjev一、背景由来 水稻茎线虫 1912年首次在 孟加拉 发现，人们称之为 Ufra、 DakPora。二、地理分布 水稻茎线虫目前主要分布于 亚洲 和 非洲 的水稻生长区，包括 孟加拉、缅甸、泰国、乌兹别克、印度、菲律宾、印度尼西亚、巴基斯坦、越南、柬埔寨、埃及、苏丹、南非、阿联酋、马达加斯加、古巴 等国家。 我国目前未见分布报道三、寄主 水稻 （ Oryzae sativa） 是该线虫的最主要寄主，另外，该线虫还寄生 稻属 植物的其他一些种。 外寄生于水稻，生殖只能在稻株内进行，主要寄居于 花梗的基部 、 茎杆末节以上 以及 颖片之内 ，这些地方大多有包括 卵到成虫各个阶段 的大量线虫。四、危害症状 世界发病区平均减产水稻 30，部分地区更严重。 如 印度尼西亚 水稻受害减收 50，泰国水稻少收 20 90，还有少数地区水稻受害后绝收，中国未见报道。 田间早期症状表现为病株幼叶基部捻卷，出现白色或浅绿色斑点，叶片和叶鞘产生褐色斑，叶缘卷缩，叶尖弯曲，叫鞘扭曲。病株抽穗后基部通常卷曲，不能结实，或只有顶部小穗能产生正常稻粒，花轴和枝梗为暗褐色，穗和剑叶扭曲。有些病株在下部节位可能肿大，并产生不规则的分支， 穗包 在叶鞘内不能抽出或仅部分抽出。四、危害症状 在发病的水稻植株发育的各个阶段，都可发现水稻茎线虫的卵、幼虫和成虫。在水稻秧苗移栽后几天，在花芽顶端就可发现该线虫，并且随植物的生长到新形成的组织器官上营外寄生生活。在水稻的花期和 抽穗 期，线虫主要在茎的柔嫩部位，叶鞘、茎秆、未 授粉 的扭曲的谷粒和畸形花梗中活动。被为害的植株矮化，叶片常萎缩。最后一个节间上方的叶鞘和枝芽扭曲，蜷曲。总花梗蜷曲，花梗产生未授粉的小穗。在线虫所处部位以上的一至几个茎节上产生特征性病变。四、危害症状 Padwick(1 950)和 Webster(1972) 观察描述，根据是否出现圆锥花序，水稻受害后可分两类典型症状，一类是肿大 Ufra，其花序包在叶鞘里，不能抽穗，受侵染茎部分枝强烈增多；另一类是成热 Ufra，花序能抽出，但只有顶部小穗能产生正常稻粒花轴和枝梗为暗褐色，下部的花不结实，这主要是由于后期花序受害。重病植株生长仃滞，严重矮化，叶片萎蔫。 Cox和 Rahman(1980)又提出了另一类 Ufra ,这一类花序完全能抽出，但是有很多瘪粒。四、危害症状本病症状最明显是在穗期，但在水稻生育早期也可见到。病株类似条纹花叶病毒，褪色条纹纵贯全叶，随着时间增长而愈益清晰。全叶捻转或呈严重畸形，有时幼叶基部出现皱缩，然后褪变为白绿色。大田病状常在移栽后两个月出现，苗期叶片褪绿和变形，但病状常隐蔽不明显，易与健株混淆，需俟一段时间过后，才有少数褐色污斑在叶和叶鞘上出现。不久，污斑变黑而上部节间的秆也转为暗褐色。至抽穗期，由于被害时间和受侵程度不同，病株各异。上部叶片是主要被害部分，抽穗后，症状非常明显，极易识别。 分型如下： 四、危害症状膨肿型 线虫破坏始于穗形成的早期，这种病穗紧裹叶鞘里面，不能抽出，呈纺锤形肿大，剥去叶鞘，可见病穗已变为褐色，并捩曲歪扭，不结实。花的各部也退化难辨。 成熟型 穗形成的早期已过，线虫开始破坏。这种病穗，可以从叶鞘中抽出，并能结成一些正常谷粒，特别是靠近穗的顶部，但穗的下部小花全不受精，或仅有部分小花结实。花梗呈暗褐色到黑色。 中间型 穗仅部分抽出，显示细弱而不结实。病株常在被害处，形成分枝，即在同一叶鞘内伸出 2 4根扭曲的穗。其中有只有主穗形成的穗，大小正常。五、病原菌 水稻茎线虫 学名： Ditylenchus angustus （ Butler， 1913） Filipjev 。 英文名 :Rice stem nematode。 分类地位 :线虫门，侧尾腺纲，垫刃目 Tylenchida，粒线虫科Anguinidae ，茎线虫属 Ditylenchus Filipjev， 19361、分类地位五、病原菌 稻茎线虫一生中同样经过卵、一龄幼虫 (卵中渡过 )、二龄幼虫、三龄和四龄幼虫及成虫几个阶段，是典型线虫生活史型。线虫在病稻草、稻茬、种子及混在种子里的病残碎片中越冬，并成为初侵染源。水稻播种出苗后，潮湿条件下，稻的茎叶表面有水时，带到田里的病原线虫就从土壤往上爬，入侵茎杆的有关部位，为害生长点附近的叶和穗，据报道，在水稻移栽后几天内，生长点的顶芽上就发现了该病原线虫，并逐步蔓延到叶鞘、茎种子周围幼嫩的茎里，产生各种病害症状虽然稻株各部都能发现线虫，但它们只外寄生在各部幼嫩组织内寄生。2、生物学五、病原菌 在干旱和稻接近成熟时，病原线虫卷曲停止取食并变得不活跃，形成间生态，聚集成棉花团状，进行休眠，以渡过不良坏境。休眠的该种线虫在干燥条件下能活 15个月以上，待潮湿条件出现或水稻生长季中，它们立即恢复活动，在水中能存活 4个月。病原线虫入侵寄主的最适温度是 20一 30 。五、病原菌一般在耕种后 5-7月份、 11月份，线虫就在寄主植物内繁殖。 Buttler(1936b)报道线虫一季可繁殖 3代，每条雌虫能产卵 50-100个。 Miah和 Bahr(1977)观察到在温度为 28-30 、相对湿度超过 80%的条件下有利于线虫感染、病害发生及其繁殖。一龄幼虫在卵内完成，整个发育阶段从二龄幼虫开始只须 15天；在人为条件下，整个生活史则需 24天完成。在一般的条件下，如果卵直接产生在湿茎中，二龄幼虫就不用再花时间去寻找宿主，这样整个发育阶段就有可能缩短。四种幼虫可根据其体长不一来进行区分。 8月份，植株处在未成熟阶段而在水分充足的条件下，成虫数量达到顶峰，经过繁殖，成虫可由 1增加到 3000。 Catling等（ 1979）报道在一水稻茎杆中有30000条线虫，而且在寄主植物上可看到其生活史的各个阶段。五、病原菌 水稻茎线虫运动和发育都需要高湿度，从水稻播种开始，如果一生中雨水都多，湿度大，有利于病原线虫繁殖、运动和入侵寄主，病害发生就会加重，干旱季节，发病就轻。国外资料表明，在孟加拉国，一年种几季水稻，在雨季中长的水稻受害重，秋稻受害轻，固为线虫群体密度还没有达到高峰时，水稻就成热收获了。而 1月到 4月生长的第三季稻，因生长期是当地的干旱季节，几乎不受感染。另外，线虫在冬天和春天能活下来的群体数量越多，下一个生长季节就很活跃，加重病害发生。六、传播途径本病原可从秧苗移植传到大田，再靠田间排水、灌水及雨水，由一块田传到另一块田。在潮湿的条件下，病健株间彼此接触摩擦也可传播，收获后病田内的根茎、病株残体为下一年的初侵染源。病种子也能传播该线虫。1、适用范围 稻种 中的水稻茎线虫 稻草 中的水稻茎线虫 稻草编织物 （袋、绳、席等）中的水稻茎线虫七、检疫鉴定方法2、原理水稻茎线虫 Rice stem nematode， 学名：Ditylenchus angustus （ Butler， 1913） Filipjev ，线虫门，侧尾腺纲，垫刃目，粒线虫科，茎线虫属。外寄生于水稻，生殖只能在稻株内进行，主要寄居于花梗的基部、茎杆末节以上以及颖片之内，这些地方大多有包括卵到成虫各个阶段的大量线虫。水稻受害后叶面出现浅绿色斑点，叶缘卷缩，叶尖弯曲，整张叶片扭曲或呈畸形，严重时花穗捻转或包在叶鞘内不能抽出，小穗不孕，形成空粒。七、检疫鉴定方法2、原理本病主要由稻种内潜伏的线虫作远距离传播，通过引种传带到新稻区，还可通过患病的稻草作远距离传播。土壤中残留的线虫以及带线虫的病稻草、稻茬、种子或混在种子里的病残碎片为当地次年发病的主要来源。它的侵染循环、传播途径、寄主范围、生物学和形态学特征是该检疫鉴定方法的依据。3、仪器、用具 生物显微镜 体视显微镜 凹玻片 试管 载玻片 盖玻片 加热板（ 80oC以下） 烧杯（ 500ml、 1000ml） 漏斗 漏斗架 研钵 培养皿 剪刀 跳针 干燥器 冰箱3、仪器、用具 打孔器 酒精灯 乳胶管 纱布 止水夹 指形管 玻璃纤维（ 3mm5mm）、药品 指甲油 TAF固定液（ 40%甲醛 7ml、三乙醇胺 2ml和蒸馏水91ml混合而成） 乳酚油（苯酚 20ml、乳酸 20ml、甘油 40ml和蒸馏水混合而成） 石蜡5、现场检疫5.1.1 抽样方法：5.1 抽样棋盘式、五点式、随机抽样5.1.2 抽样数量5.1.2.1 稻种按总件数的 5% 20% 抽样，最低抽检 10件。取样的数量为： 10 kg 以下取 2 kg ； 11 kg 100 kg 取 4kg； 101 kg 500 kg 取 6 kg； 501 kg 000 kg 取 8 kg； 1001 kg 2000 kg 取 10 kg；2001kg 5000kg取 12kg； 5001kg 10000kg取 14kg；10001 100000kg每增加 5000kg增取 2kg；不足 5000kg余量记取 2kg。按总件数的 5%20% 抽样，每次检查不得少于10件且不少于 500根。取样的数量为： 50根以下取 5根， 51根 200根取 10根； 201根 1000根取 15根；1001根 5000根取 20根； 5001根以上，每增加 5000根增取 5根样品，不足 5000根的余量计取 5根样品。5、现场检疫5.1.2.2 稻草及其编织品5.2 外观症状的检查5.2.1 水稻种子的检查 首先要注意检查褐色畸形种子，其次要看稻种内是否混有稻草或其他水稻残体，同时注意是否夹带泥土等，收集后与采样的样品一并送实验室进行检查。5、现场检疫5.2.2 稻草及其编织品的检查注意检查叶鞘颜色异常、叶缘卷缩、叶尖弯曲、整张叶片扭曲或呈畸形、草秆短小的稻草及其编织品。收集上述可疑植物材料及所夹带的土壤等与采集的样品一并带回实验室检验。6、实验室检验 抽样所得种子，可将稻种去壳，利用 漏斗法分离 颖壳中可能带有的线虫。分离