临床标本的细菌学检验

瑞金临床医学院检验系1病原学检查的主要任务1研究感染性疾病的病原体特征 传统感染性疾病的病原体研究条件致病菌和耐药菌的研究临床感染优势菌的组成和变迁规律新出现病原体的研究22提供快速、准确的病原学诊断以分离培养为核心，微生物的分离鉴定及确证实验为诊断依据的活菌检验非培养方法的快速检验33.指导临床合理使用抗生素对分离的病原体进行抗生素敏感试验参与临床，提出合理用药的建议44对医院感染进行监控Nosocomial infection：又称医院获得性感染（hospital acquired infection）， 指患者在入院时不存在，也不处于潜伏期，而在医院内发生的感染，包括医院内获得的而在出院后发病的感染。广义的医院感染对象不仅指住院患者，还包括门诊病人、医院职工、探视人员与陪护人员等。 医患之间、病人之间、病人内源性感染、操作不当引起的医源性感染。5监控内容 基本原则与病原体感染类似，但更应注意正常菌群的污染以及条件致病菌在医院感染中的地位。 定期对医院环境进行病原体监测。 定期对医疗器械的消毒效果进行监测。6 血液（败血症）的细菌学检查 中枢神经系统感染的细菌学检查 呼吸系统感染的细菌学检查 泌尿生殖道感染的细菌学检查 胃肠道感染的细菌学检查 外科感染的细菌学检查7Precedures for bacterial detectionspecimenStain of smear Culture and isolation Enriched cultureAnaerobic cultivation Cultivation with carbon dioxideObservation of colonial morphologyPicking colony Stain of smear microscopic detection Serological identification Biochemical identificationAntimicrobialsusceptibility testingDetermination of pathogenic bacterial detection8 临床标本采集基本原则1. 尽早采集标本采集的最适时机 :尽量在抗菌药物使用前，临床症状和体征最明显的时候采集标本。92. 无菌采集： 减少或避免机体正常菌群及其他杂菌污染。盛标本容器须经灭菌处理，但不得使用消毒剂。103. 不同的采集方法和标本种类114. 保存和运送：标本采集后应立即送至实验室。床边接种可提高病原菌检出率。125. 安全采集13Step1. 接受每一份标本时都应该用肉眼或 显微镜检查，以便评价其是否适合 进一步检查。临床标本检验程序14Step2. 明确标本来源、来源科室及检验 项目有助于对病原菌的正确诊断 。requisitionThe patient,s name and hospital number.Age and sex.Collection date and time.Exact nature and source of the specimen.Objective.1516Step3. 选择适合特定标本类型的初次培养 基、孵育的温度和气体，以便有效 地发现潜在的致病菌。17181920Step4. 初次培养基上的分离物，可能存在 多种细菌：区分正常菌群与致病菌确定优势菌群21化脓性链球菌菌落特征 （ 溶血）铜绿假单胞菌菌落特征（血琼脂平板）22涂 片 检 查 快速 是 “ 指南针 ” 对确诊报告提供参考意义 不要过分依赖、过分夸大它的作用23血液、分泌物、排泄物、穿刺液、脑脊液等标本和液体培养物可直接涂片镜检，有些细菌可做出初步诊断。病 种 标 本 方 法 结 果鼠 疫 痰，腺穿刺液 GS， 亚甲兰染色 G-两极 浓 染，多形态霍 乱 水样便 GS， 制动试验 G-弧菌，流星样运动炭 疽 痰，渗出物 GS， 亚甲兰染色 /串珠试验G+大 杆菌 ，竹节状排列，有芽胞和荚膜白 喉 假膜，咽拭子 GS， 亚甲兰染色 G+棒状，异染颗粒 /特殊排列淋 病 尿道 /阴道分泌物 GS G-双球菌，位于脓细胞内 /外流 脑 脑脊液、瘀血癍 GS G-双球菌，位于脓细胞内 /外肺结核 痰 抗酸染色 兰色背景中红色杆菌梅 毒 病变渗出液 暗视野 白色折光活动的密螺旋体241） 选择有价值的试验选择有价值的试验 ： 所选项目大结果可能为阴性所选项目大结果可能为阴性 /阳性，但阳性阳性，但阳性 /阴性率应大于阴性率应大于 90%，否则无意义。，否则无意义。2） 选择快速简便的项目选择快速简便的项目 ： 鞭毛染色、氧化酶、凝固鞭毛染色、氧化酶、凝固酶、触酶、酶、触酶、 O/F等应做为首选项目。等应做为首选项目。 3）一种试验有多种方法时，应了解不同试验的敏）一种试验有多种方法时，应了解不同试验的敏感性和特异性。感性和特异性。 鉴定实验的选择鉴定实验的选择 25革兰阳性 需氧 球菌鉴定触酶+凝固酶DNA酶+葡萄球菌属-溶血现象溶血 溶血 溶血optochin胆汁七叶苷6.5 Nacl杆菌肽CAMP胆汁七叶苷6.5 Nacl-26革兰阴性杆菌鉴定需氧菌 厌氧菌脆弱拟杆菌梭杆菌属其他氧化酶KIA,O/F KIA,O/F发酵菌 F 非发酵菌 O/-肠杆菌科苯丙氨酸VP动力不动杆菌属- +弧菌科-+发酵菌 F 非发酵菌 O/-动力嗜麦芽寡养单胞菌假单胞菌属产碱杆菌属黄杆菌属莫拉氏菌属27 Step5. 在已鉴定的细菌中，确定哪一种要进行怎样的微生物敏感性 试验。28医生、护士、检验师正确采集 运送标本微生物科直接镜检、免疫学和分子生物检测、病原体分离培养鉴定、药敏实验报告 结果医生明确诊断、合理用药29败血症的细菌学检查 血液标本的细菌培养是诊断败血症的基本方法。 如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。 Sepsis： The presence of pathogenic microorganisms or their toxins in tissues or in the bloo