第二章 药物的鉴别试验9

药物的鉴别试验Identification test of drug第二章p药物的鉴别试验p药物的杂质检查p药物定量分析与分析方法验证药品检验工作的基本规律Basic regularity of drug inspectionIdentification test of drugp 鉴别试验的内涵p 鉴别试验的项目p 鉴别试验的方法p 鉴别试验的条件药物的鉴别试验p根据药物的分子结构，采用化学、物理化学或生物学方法来判断其真伪。p鉴别试验用方法仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物的鉴别。p鉴别试验方法应专属，每个品种一般 2-3条。鉴别试验的内涵Test meaning性状项和物理常数确认 鉴别项下规定的试验 原料药鉴别制剂鉴别鉴别试验的项目Test items 性 状 （ Description）定义：反映药物特有的物理性质，如外观、溶解度和物理常数等。外 观 溶解度 物理常数外观： 指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。 如 中国药典 对维生素 B1的描述为 “ 本品为白色结晶或结晶性粉末；有微弱的特臭，味苦；干燥品在空气中迅即吸收约 4%的水分 ” 。对于链霉素片的描述为 “ 本品为糖衣片或薄膜衣片，除去包衣后，显白色至微带黄绿色 ” 。 溶解度： 一定程度上反映了药品的纯度 。药品在不同溶剂中的溶解性能用 “ 极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶 ” 来描述。 方法：称取研成细粉的供试品或量取液体供试品，于 25 2 一定容量的溶剂中，每隔 5min强力振摇 30s；观察 30min内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒或液滴时，即视为完全溶解。 物理常数： 用于药品鉴别，反映其纯杂程度 。药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。 性 状 （ Description）熔 点固体熔化成液体的温度 熔融同时分解的温度 自初熔至全熔的一段温度 性 状 -物理常数（ Physical Constants）比旋度 ：在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每 1ml中含有旋光性物质 1g的溶液时测得的旋光度。用 表示。吸收系数 ：在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。中国药典收载是 。这两种物理常数可用以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。 性 状 -物理常数（ Physical Constants）依 据 ：某一类药物组成中的阴离子和阳离子的特殊反应或典型的有机官能团反应。中国药典附录收载一般鉴别试验 ：丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类有机氟化物类、无机金属盐类、有机酸盐无机酸盐General identification test一般鉴别试验水杨酸盐n鉴别方法一： 取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液 1滴，即显紫色。n反应原理： 本品在中性或弱酸性条件下，与三氯化铁试液生成配位化合物，在中性时呈红色，弱酸性时呈紫色。n鉴别方法二： 取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。有机氟化物鉴别方法： 取供试品约 7mg，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用水20ml与 0.01mol/L氢氧化钠溶液 6.5ml为吸收液，俟燃烧完全后，充分振摇，取吸收液 2ml，加茜素氟蓝试液 0.5ml，再加 12%醋酸钠的稀醋酸溶液 0.2ml，用水稀释至 4ml，加硝酸亚铈试液0.5ml，即显蓝紫色，同时做空白对照试验。 依 据 ：药物分子中的特殊基团或官能团特殊反应或典型的有机官能团反应。如四氮唑法 : C17位上有 - 醇酮基的药物 ,如皮质激素分析。Specific identification test专属鉴别试验醋酸泼尼松： 取本品约 1mg ，加乙醇 2ml 使溶解，加 10氢氧化钠溶液 2 滴与 氯化三苯四氮唑 试液 1ml ，即显红色。四、鉴四、鉴别别方方法（按方法分类）法（按方法分类）化学鉴别法化学鉴别法光谱鉴别法光谱鉴别法生物学法 HPLC、 GC鉴别法 薄层色谱鉴别法 纸色谱鉴别法 呈色反应鉴别法 紫外光谱鉴别法 红外光谱鉴别法 沉淀生成反应鉴别法 色谱鉴别法 气体生成反应鉴别法 测定生成物的熔点荧光反应鉴别法 指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。（ 1）三氯化铁呈色反应：用于酚羟基或水解后产生酚羟基（ 2）异羟肟酸铁反应：多用于芳酸及其酯类、酰胺类（ 3）茚三酮呈色反应：用于结构中含有脂肪氨基药物（ 4）重氮化 -偶合显色反应：用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基（ 5）氧化还原显色反应及其它颜色反应1.呈色反应鉴别法 2.沉淀生成反应鉴别法 （ 1）与重金属离子的沉淀反应（ 2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应（ 3）其它沉淀反应。 多用于生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐。常用的荧光发射形式：（ 1）药物本身可在可见光下发射荧光；（ 2）药物溶液加硫酸后，在可见光下发射荧光；（ 3）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；3.荧光反应鉴别法（ 4）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。（ 1）大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气。（ 2）化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体。（ 3）含碘有机药物，经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。4.气体生成反应鉴别法紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法 （ 1）测定最大吸收波长，或同时测定最小）测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长；吸收波长；（ 2）规定一定浓度的供试液在最大吸收波）规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度；长处的吸收度；（ 3）规定吸收波长和吸收系数法；）规定吸收波长和吸收系数法； （ 4）规定吸收波长和吸收度比值法；）规定吸收波长和吸收度比值法；（ 5）经化学处理后，测定其反应产物的吸）经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。收光谱特性。5-氟胞嘧啶紫外光谱鉴别取本品的 0.1mol/L盐酸溶液（ 1125000 ），照分光光度法测定，在波长 283 287nm处有最大吸收， 242 246nm处有最小吸收 ”。 红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法 对比对比 供试品红外吸收光谱供试品红外吸收光谱 与与 药品药品标准红外光谱标准红外光谱 的一致性，尤其是的一致性，尤其是指纹指纹 一致性。一致性。氯羟去甲安定 红外光谱鉴别氯羟去甲安定的测定： “取本品，经干燥后用溴化钾压片法测定其红外光吸收图谱中 3440cm-1， 3220 cm-1， 1695 cm-1， 1614 cm-1，1324 cm-1， 1132 cm-1以及 828 cm-1波数附近处有吸收 ”。 近红外光谱A B C板 蓝 根注射液和川 芎注射液的近红外光谱A原始图， B一阶导数， C二阶导数。从上至下图谱分别为不同厂家的 板 蓝 根注射液 （ 1 5)和 川 芎注射液 （ 6）非结晶型（无水） 无水型 1三水合物 无水型 2氨 苄 西林四种固体的典型粉末 x-射 线 衍射 图 谱衍射角（ 2）、相对强度和面间距 dhkl 薄层色谱鉴别sr 混sRsR采用相同 浓 度的 对 照品溶液采用供 试 品溶液与 对 照品溶液等体 积 混合选 用与供 试 品化学 结 构相似的 药 物 对 照品与供 试 品溶液的主斑点比 较将 项下 两种溶液等体 积 混合， 应显 示两个清晰分离的斑点 HPLC法鉴别（一）溶液的浓度（一）溶液的浓度 （二）溶液的温度（二）溶液的温度 （三）溶液的酸碱度（三）溶液的酸碱度 （四）试验时间 （四）试验时间 （五）干扰成分的存在（五）干扰成分的存在鉴别试验条件鉴别试验条件1、 反应灵敏度和空白试验反应灵敏度和空白试验鉴别试验的灵敏度鉴别试验的灵敏度 （ sensitivity）最低检出量最低检出量 （ minimum detectable quantity）最低检出浓度最低检出浓度 （ minimum detectable concentration）空白试验空白试验 （ blank test）：）：在与供试品鉴别在与供试品鉴别 试验完全相同的条件下，试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。行的试验。 （二）提高反应灵敏度的方法（二）提高反应灵敏度的方法1. 加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集 在鉴别试验中，如生成物具有颜色并颜色很在鉴别试验中，如生成物具有颜色