超声波辅助提取灵芝三萜工艺研究

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 超声波辅助提取灵芝三萜工艺研究 摘要：采用超声波辅助提取灵芝 三萜，基于单因素试验结果，以灵芝三 萜得率为评价指标，采用正交试验方法 优化灵芝三萜提取工艺条件。结果表明， 在乙醇浓度 85%、超声时间 15 min、超 声温度 80 、料液比 125 的条件下， 灵芝三萜得率最高、为 2.19%。 中国论文网 /1/view-12996286.htm 关键词：灵芝；三萜；超声波； 提取；优化；正交试验 中图分类号：R284.1 文献标识 码：A 文章编号：1674-1161（2017） 06-0041-03 灵芝又称灵芝草、仙草、瑞草， 在药物领域中已有 2000 多 a 的使用历 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 史，是我国最著名的高等药用真菌。灵 芝具有抗肿瘤、调节免疫、镇静镇痛、 抗肝损伤、改善记忆、降脂、抗辐射、 降血糖、抗血栓、抗疲劳等药理作用。 灵芝不仅具有广泛的药用价值，因其无 毒、无害、无副作用，在食品领域也早 有应用，是一种极佳的药食两用物质。 灵芝中的多糖、三萜、生物碱、核苷等 有效成分是灵芝发挥治疗作用的物质基 础。但灵芝三萜的含量相对较低，对照 品也很难获得，且在提取过程中不稳定。 因此，需要寻求一种切实可行的方法来 提高灵芝三萜得率。本研究采用超声波 法对灵芝三萜提取工艺条件进行优化， 以期为灵芝三萜的工业化生产及其产品 的深度开发提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 灵芝：吉林敖东世航产业股份有 限公司；齐墩果酸标准品：沈阳市国药 试剂有限公司；无水乙醇、冰乙酸、香 草醛、高氯酸、乙酸乙酯均为分析纯。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 1.2 仪器设备 WFZUV-2000 型紫外分光光度计： 尤尼柯（上海）仪器有限公司； AXTD5A 型台式低速离心机：盐城市安 信实验仪器有限公司；DHG-9146A 型 电热恒温鼓风干燥箱：上海精宏实验设 备有限公司；TB-114 型电子天平：梅 特勒托利多仪器（上海）有限公司； KQ5200DB 型数控超声波清洗仪：昆山 市超声仪器有限公司；电热恒温水浴锅： 上海精宏实验设备有限公司。 1.3 试验方法 1.3.1 灵芝三萜提取工艺流程 取 适量灵芝烘干粉碎准确称取适量灵 芝粉末加入乙醇超声辅助浸提真 空抽滤滤液浓缩干燥，即得灵芝三 萜。 1.3.2 标准曲线绘制 准确称取 5.0 g齐墩果酸标准品于 25 mL 容量瓶 中，加入无水乙醇，定容，即得母液。 精确吸取母液 0，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 mL 分别置 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 于试管中，以试剂为空白参比，沸水浴 挥发去除溶剂，挥发完全后加入 0.4 mL 5%香草醛 冰乙酸和 1.6 mL 高氯酸， 摇匀后将试管置于 70 C 水浴锅中加热 处理 15 min，取出后用冰水快速冷却至 室温，再加入 8 mL 乙酸乙酯，混匀， 在 560 nm 处测定吸光度值。以齐墩果 酸浓度为横坐标、吸光度值为纵坐标绘 制标准曲线，得到：y=8.323 5 x-0.047 8，R2=0.999 7，线性关系良好。 1.3.3 灵芝三萜测定 精密称取灵 芝三萜粉末 1 g，加入乙醇，采用超声 波提取，抽滤，准确吸取无水乙醇和三 萜滤液各 1 mL 于试管中，按 1.3.2 中方 法测定 560 nm 处的吸光度，根据标准 曲线计算待测液中的三萜含量 Y，利用 下式计算三萜得率。 三萜得率（%）=（Y/1 000） /（m/50） V 100 式中：m 为样品质量，mg；V 为 吸取滤液的体积，mL；Y 为灵芝三萜 含量，g 。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 1.3.4 单因素试验 在其他条件相 同的情况下，分别考察乙醇浓度 （55% ，65%，75%，85%，95%） ，料 液比 （115，120，125，130，14 5） ，超声温度（40，50，60，70，80 C） ，超声时间（5，15，25，35，45 min） ，超声功率 （50，140，160，180，200 W）对灵芝 三萜得率的影响。 1.3.5 正交试验 在单因素试验结 果的基础上，以灵芝三萜得率为指标， 进行 L9（34）正交试验。 2 结果与分析 2.1 单因素试验结果 2.1.1 乙醇浓度对灵芝三萜得率 的影响 不同乙醇浓度下灵芝三萜得率 如图 1 所示。 由图 1 可以看出：灵芝三萜得率 随乙醇浓度升高而提高。当乙醇浓度为 55%时，灵芝三萜得率仅为 0.29%；当 乙醇浓度为 95%时，灵芝三萜得率最高， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 为 1.69%；而乙醇浓度在 85%95%之 间时，灵芝三萜得率非常相近。 2.1.2 料液比对灵芝三萜得率的 影响 不同料液比下灵芝三萜得率如图 2 所示。 由图 2 可以看出：在料液比为 130 时，灵芝三萜得率最高，为 1.71%； 当料液比小于 130 时，溶剂量过少， 样液过于粘稠，不利于超声波空化作用 的产生，也不利于超声波在溶剂中的传 播扩散，所以提取率相对较低；随着料 液比的增大，灵芝三萜得率提高，但是 当料液比超过 130 时，可能因溶剂量 过大反而影响了超声波对灵芝细胞的破 碎，进而影响了机械学和热力学作用， 导致灵芝三萜得率降低。 2.1.3 超声温度对灵芝三萜得率 的影响 不同超声温度下灵芝三萜得率 如图 3 所示。 由图 3 可以看出：当超声温度在 4050 之间时，灵芝三萜得率随温度 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 升高而提高；而温度在 5070 之间 时，灵芝三萜得率增幅较小；当温度为 70 时，灵芝三萜得率最高，为 2.09%。说明随着超声温度的升高，分 子运动愈发剧烈，加快了灵芝三萜的扩 散和溶剂向灵芝内部的渗透，促进了细 胞热萜的浸出。 2.1.4 超声时间对灵芝三萜得率 的影响 不同超声时间下灵芝三萜得率 如图 4 所示。 由图 4 可以看出：当超声时间为 25 min 时，灵芝三萜得率最高，为 1.95%； 当超声时间少于 25 min 时，灵芝三萜 得率随超声时间延长而增大；但当超声 时间超过 25 min 后，灵芝三萜得率反 而降低，其原因可能是长时间的超声处 理破坏了灵芝三萜的结构。 2.1.5 超声功率对灵芝三萜得率的影响 不同超声功率下灵芝三萜得率如图 5 所 示。 由图 5 可以看出：当超声处理功 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 率为 150 W 时，灵芝三萜得率最高，为 1.81%；功率过小，超声波振动幅度过 小，灵芝细胞壁破碎不完全，三萜溶出 不彻底；功率过大，则造成溶液分子运 动加剧，反而使得率略降低。说明过高 或过低的超声波功率均不利于灵芝三萜 的提取。 2.2 正交试验结果 根据单因素试验结果，以乙醇浓 度（A） 、超声时间（B） 、超声温度 （C） 、料液比（D）为自变量，以灵芝 三萜得率为评价指标，进行正交试验， 结果见表 1。 由表 1 可知，各因素对灵芝三萜 提取得率影响的主次顺序为 CABD，即超声温度乙醇浓度超 声时间料液比，其中超声温度的影响 最大，料液比的影响最小。由正交试验 得到最佳工组合为 A3B1C3D1。 2.3 最佳工艺条件验证 根据正交试验结果，对工艺组合 A3B1C3D1 和 A3B1C3D2 进行验证。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 结果为工艺组合 A3B1C3D1 的得率 （2.19% ）高于 A3B1C3D2 的得率 （2.13% ） ，表明正交试验方法优化得到 的灵芝三萜提取工艺条件可靠，最佳工 艺条件为乙醇浓度 85%、超声时间 15min、超声温度 80 、料液比 125。 3 结论 本研究以灵芝为原料，通过单因 素试验和正交试验设计，确定超声波辅 助乙醇浸提灵芝三萜的最佳工艺条件。 试验结果表明，