艾滋病实验室检测技术进展ppt课件

艾滋病实验室检测进展 1 一、检测进展 1、样本：全血、血清、血浆、唾液、尿液、 滤纸干血斑 2、筛查方法：酶标、快速、化学发光 3、试剂：三代 四代 4、确证方法： WB/RIBA 5、病毒载量：定性、定量 6、 CD4：微球法、体积定量法 7、新发感染： BED 亲和力 2 n HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等 ： n 以 诊断为目的 的检测是为了确定个体 HIV感染状况 ，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要 进行的体检等。 n 以 血液筛查为目的 的检测是为了防止输血传播 HIV ，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 n 以 监测为目的 的检测是为了解不同人群 HIV感染率 及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和 一般人群。 检测目的 3 感染机制 吸附 进入 转录 整合 基因表达 芽生集合 芽生 成熟 “ 柏林病人 ” ，世界上第一个被公 认治愈的艾滋病病人（ 2009）gp120 gp41 4 Fiebig 分 级 实验 室 检测 指 标 感染 时间 级 VL 阳性，其他 检测 阴性 5天以内 级 VL 阳性， P24抗原阳性，其他 检测 阴性 6 10天 级 抗体阳性， WB 阴性 11 13天 级 抗体阳性， WB 不能确定 14 19天 级 抗体阳性， WB 阳性， WB 检测 没有 P31条 带 20 89天 级 抗体阳性， WB 阳性， P31条 带 阳性 90天 5 作为高危人群检测点， pool PCR阳性， p24抗原阳性，但四代 ELISA、 三代 ELISA均阴性，召回时感染 21天，三代 ELISA阳性，确证试验结果不 确定，感染 41天检测确证试验阳性。 3.50.34 有一对 MSM与网络上找到的一位 MSM性伴接触之后约 1周，相继出现急性 期感冒症状，发烧， 肌肉疼痛，乏力。高危行为后 2周，到门诊检测。 急性期病例 6 第一检测点，仅 pool PCR阳性， p24抗原、四代 ELISA、三 代 ELISA均阴性，召回时感染 22天，三、四代 ELISA阳性，确 证试验结果不确定，感染 30天时确证试验阳性。 Pool阳性， p24、四代筛查试验结果 阴性 0.85 1.61 0.75 1.42 7 （一）样本 （ 1）全血、血清、血浆、唾液、尿液以及 DBS样品 可用于 HIV抗体检测。 （ 2）抗凝全血可用于 CD4+和 CD8+T淋巴细胞测定 。 （ 3）血浆可用于 HIV-1病毒载量、基因型及耐药检 测。 DBS样品可用于 HIV-1基因型及耐药检测。 （ 4）全血、血浆、淋巴细胞富集液、外周血淋巴细 胞（ PBMC）及 DBS样品可用于 HIV核酸的定性检 测。 （ 5） PBMC、全血、淋巴细胞富集液等可用于 HIV- 1分离培养。 8 1、全血样本 采血管选择 K2EDTA 、 K3EDTA抗凝管。 不建议使用肝素抗凝 。临床中不使用肝素 抗凝进行免疫学检测 项目，可能对白细胞 计数有影响。 全血用于 CD4检测 9 最好使血液达到试管的填充线处 确保保持正确的血液 :抗凝剂比例 +/- 10% 填充量的差异是可接受的 当血液与 EDTA-Na2抗凝剂的比例为 14以上时不影响 . 防凝血采集注意事项 样本 10 11 样本混匀 n 采集的静脉血注入抗凝管后，立即轻轻颠 倒抗凝管 6-8次，使血液与抗凝剂充分混合 ，防止血液凝固。 12 样本标记 n 血样上应标记上 姓名 和 编号 ，送检表上送检编号 位置注明血样编号，并 按顺序 排列血样和送检表 。 13 样本标记 n 不建议姓名标记在外包装 袋上，标记管上。 正确包装 送检单放置 14 CD4送检问题 -放冰块？ n 在室温（ 18-25 ）保存和运输样品， 避免极端温度（结冰 或大于 37 ）。 n 高温季节，样本需用 隔热容器盛装样品， 并将其置于有冰袋和 吸热物质的容器中。 15 送检单 n 送检表格填写 应完整，不能空项。 电子版表格年龄 几年不更换 16 样本送检流程 n 样本接收我中心卫检部，由 1号楼西门进， 登记后送至 4楼。门铃。 n CD4送检时间每周三 8:30-11:30，下午 1： 30-2:30（ CD4） n 其他检测项目每天 8:30-11:30，下午 1： 30- 16:30（留半小时登记时间） 请送样人员计划好自己的行程。 17 2、血浆 n 采血管选择 K2EDTA、 K3EDTA抗凝管。 n 不建议使用肝素抗凝，因为肝素中阴离子 能结合蛋白质，使蛋白质变性，是 taq酶的 强抑制剂。也就是说在 PCR后续的实验中会 抑制酶的作用。 n 分离血浆用于抗体和 VL检测。 要求： 离心吸取白细胞层 -80度冷冻，避免反复冻融。 18 2014年 10月收到 丙肝检测样本 19 3、血清 n 如将血液自血管内抽出，放 入试管中，不加抗凝剂，则 凝血反应被激活，血液迅速 凝固，形成胶冻。凝血块收 缩，其周围所析出之淡黄色 透明液体即为血清。 n 血清用于抗体检测。 n 4 保存一周。 20 4、唾液 注意：饭后 -食物残渣 刷牙、漱口后 -被检测物含量低 21 5、尿液 n 原则上留取早晨起床后第一次尿液的中段 尿（晨尿），也可留取随机尿的中段尿。 n 注意： 女性患者月经期； 血尿标本； 乳糜尿等。 22 6、干血斑 n 干血纸片法（ DBS），即将全血 样品收集在卡纸上。 n 它需求较少的血量，创伤小，方 便血样采集、存储运输方便。 n 用于 HIV核酸的定性检测及耐药 检测。 23 干血斑样本采集在 HIV检测中的应用评估 2015：凉山州确证实验室培训 24 （二）检测技术 -ELISA法 25 初 筛 ：高敏感性 =真阳性率 =a/a+c； 复核：高特异性 =真阴性率 =d/b+d 26 三代试剂 阳性 -Ab 三、四代试剂 阴性 阳性 发报告 WB 四代试剂 阳性 (Ab或 Ag) 三代试剂 阴性 阳性 发报告 WB 检测 模式 四代试剂 阳性 (Ab或 Ag) 四代试剂 阴性 阳性 发报告 WB 27 2、快速法 n 免疫层析实验 n 渗滤实验（双抗原夹心法） n 三代 四代 n 批批检？ 阳性 阴性 28 2014年 10月 15日某市发现 1例 反应 15分钟，结果 阳性，颜色有点浅 反应 40分钟，结果 阴性 反应 2小时，结果阳 性，条带已干，只 留下印迹 29 示例 30 快速检测注意问题 1、血清质量影响结果陈旧 2、操作误差 SOP 3、结果判定 2人判定、光线充足 4、反应时间定时 5、试剂保存常温、冷藏 6、建议采集血清、浆检测 7、 记录与保存 31 3、化学发光法同时检测抗体和抗原 32 正常值参考的意义及灰色区域的存在正常值参考的意义及灰色区域的存在 如果测定结果处于灰色区域（约在正常值上下限以内如果测定结果处于灰色区域（约在正常值上下限以内 20%）内，）内， 则需要进一步追踪检查。则需要进一步追踪检查。 95%或或 99% -20% +20% 33 在二位点夹心 ELISA中，在剂量反应曲线的高剂量区段，线性走向不是呈平台 状无限后延，而是向下弯曲状，似一只钩子或一把镰刀（ HOOK）， 这种 现象 称之为 “HOOK“效应。 l 传统方法受技术 的局限可测范围 较窄 ; l 化学发光对强阳 性标本可避免出 现阴性结果。 可以降低可以降低 钩镰效应钩镰效应 (HOOK)引起的引起的 风险风险 34 n 化学发光检测使窗口期由 43.6天缩短为 38.3天，虽然只 缩短了 12.2%，但却将残余风险降低了 46.4%。 方法学 窗口期（天） 残余 风险 ELISA 43.6 1/17501 CLIA 38.3 1/32637 可以降低残余风险 35 化学发光全自动检测 n 样本周转时间更快， 29min n 即来即做，不必等待批量标本 n 试剂机上保存，不需平衡试剂温度 n 避免手工操作中的多种干扰因素 n 减少低价值的重复性人工操作 36 试剂评估 （ 2007年） n 本次评估使用随机抽样方式抽取已知血清标本 1556份，其中 阳性标本 501份，阴性标本为 1055 份。 n 科美东雅：灵敏度 100%；特异度 99.43%；准确度 99.61%。 n 阿克苏： 灵敏度 100%；特异度 99.15%；准确度 99.42% n 结论：科美东雅 CLIA试剂 HIV抗体初筛结果与生物梅里埃（ Ag+Ab） ELISA试剂比较有较高的灵敏度、特异性。统计分 析表明：二者准确度显著性检验无差异 (u=0.7765， u 1.96， P 0.05)。 n 将第一次两种试剂检出的 15份假阳性标本（科美东雅 6份，生 物梅里埃 9份），分别进行重复检测，结果均阴性。二次结果 汇总统计：两种试剂检测结果一致，符合率为 100%。 37 4、确证实验 38 示例 检测时间 带 型 结论 2013.09.12 gp160 gp120 p66 p51 p31 p24 p17 阳性 2014.03.21 gp160 不确定 2014.07.04 gp160 p24 不确定 2014.09.12 gp160 不确定 2014.12.11 gp160 p66 p51 p31 p24 阳性 39 HIV抗体确证检测数据 40 HIV快速确证试剂 2013年 4月，美国 Bio-Rad公司宣布向美国以外的市场销售一种能在 30分钟 内完成确证检测的快速试剂（ Geenius HIV 1/2 Confirmatory System，左 图），美国已投入使用，尚未在中国注册。此类试剂如能在中国市场使用 ，可大大缩短确证检测时间，又可降低目前快速筛查试剂的假阳性率。 该图为目前美国使用的快速确证试剂。 该图为美国研发的更加类似 于 WB的多条带快速试剂，尚 未获批。目前在巴西进行验证。 国内尚无快速确证试剂研发的立项课题，有正在进行该项目探索研究的企业。 41 5、尿液检测 网络平台 查 询 MSM 人群 艾滋病 实验室 现场发放 /药店购买 邮寄 /自送 结 果 尿液 HIV-EIA试剂： 96%-98% ，特异性 98%-100% 。 采尿管：采集尿液后，室温可保存 4周。 42 MSM NGO小组 检测人员 很兴奋 很高兴 影响考核指标怎麽办？ 安全方便 多了个办法 不知道是谁干嘛做？ 愿意接受 安全可行 错了谁承担责任？ 准吗？ 可靠吗？ 增加工作有何好处？ 多少钱？ 多少钱？ 可靠吗？ 哪里可以做？ 可带去干预场所吗？价格是多少？ 看结果方便吗？ 担心采别人尿 不可能每天检测 什麽时候能用？ 何时可以用？ 质控如何做？ 示范区 UCT项目面对面调查 43 6、可区分抗原抗体检测 （ 快速检测试剂 -四代） n 该试剂可同时检测人血清、血浆、静脉或手指针刺全血中 HIV-1 p24抗原及 HIV-1和 HIV-2抗体，可区分急性 HIV-1感 染和已确诊 HIV-1感染，但不能区分 HIV-1抗体与 HIV-2抗体 ，也不可用于献血者的筛选。 44 四代 HIV快检试剂 45 酶联荧光分析法 (ELFA) n 人类免疫缺陷病毒抗原及抗体检测试剂 (VLDAS HIV DUO Ultra)是在 HIV-1 p24抗原 和抗 HIV-1和抗 HIV-2 总免疫球蛋白的联合 检测基础上，进行的一个自动检验，可以 缩短血清转化时的窗口期。 n VIDAS系统对每个抗体和抗原结果都进行计 算得出检验值 46 7、 HIV-1新近感染检测 n 方法： BED-EIA HIV-1捕获 EIA方法（ BED-CEIA）； n 原理：根据 HIV特异性 IgG占总 IgG抗体的比例随着感染时间的延长 而逐渐增高； n 目的：用于识别近期感染与既往感染； n 应用：美国 FDA将 BED-CEIA归为 “只应用于监测目的，不能用于个 体诊断和临床 ”的实验方法； n 不足：由于个体间抗体生成的变异性，对个体而言， BED结果的预测 值偏低，而且在个体水平上， BED检测可能产生一定的假阳性和假阴 性，但在人群水平上，假阳性的数目与假阴性的数目相近，因此可以 相互抵消彼此的作用。 n 性病艾滋病预防控制中心于 2004年将该方法引进国内，建立了适合 于我国的 BED方法的窗口期（ 168天）和 4个关键校正系数（ =0.8098， =0.7571， =0.9315， =0.0685） 47 A gp160 gp120 p66 p55/p51 gp41 p31 p24 p17 B 48 49 50 新发感染的快速检测 质控带 新发感染检测带 包被低浓度的 rIDR-M蛋白 检测带 长期感染 新近感染 51 8、 CD4+T淋巴细胞检测 n CD4+T淋巴细胞数量可评价 HIV感染者免疫 状况，辅助临床进行疾病分期。 n CD4+T淋巴细胞百分数可以作为儿童免疫 抑制分级指标， 可以作为儿童临床治疗分 期和辅助条件。 n 评估疾病进展，判断预后状况。 n 是否开始抗病毒治疗的重要实验室指标 n 判断免疫系统恢复情况 52 n 当其数量减少至 200/l时，即进入艾滋病期 。 n 当其数量少于 350/l时，应结合病毒载量的 测定情况确定开始治疗的时机。 n 抗病毒治疗 8周后， CD4 T淋巴细胞数量升 高 50/l以上提示治疗有效，反之则视为无 效。 n 当其数量减少至 500/l左右时，即可开始出 现机会感染或其它与免疫缺陷相关的症状 ； 53 艾滋病 CD4细胞绝对计数 微球法及体积法 Positive Cell Absolute Count Beads Negative Cell CD4 PE 通过微球数目 获取进样体积 信息 微球 法 体积 法 高精度注射器 精准控制样本 体积量 54 流式细胞仪流式细胞仪 FACSCalibur 1995 FC500 FACSCanto FACSCount ACEA NovoCyteTM 55 POCT技术应用： CD4细胞检测 56 质 控品 现 状和希望 57 BD公司： 中值和底值 （ 到货效期 1月左右， 2MLX1） BC公司 ： 中值和底值 （ 到货效期 3月左右， 3MLX2 ） 南非 synexa公司 ： 中值和底值 （ 到货效期 1.5月左右， 1.1ML， 1.5ML 2.5ML X1 ） Partec公司： 片剂质控品 研制质控品： 使用 BECKMAN质控 品，其保存周期相对 较长，可达 3个月。 57 流式细胞仪检测质控图 58 正常值 n 正常人的 CD4+T淋巴细胞计数约占总 T淋巴 细胞的 65%， CD8+T淋巴细胞计数约占 35%。人体 CD4+ T淋巴细胞计数值因种族 、生活条件、生存环境不同而有所差别。 n 湖北成人 CD4+T为 681/u1； n 上海成人 CD4为 726/u1； n 山东成人 CD4为 709/u1； n 亚洲人 600-800/u1； n 欧美人 800-1000/u1。 59 项 目 百分数 绝对 数 CD3 50-84 770-2041 CD4+CD3+ 34-70 414-1123 CD8+CD3+ 25-54 238-874 CD3+CD4+CD8+ 0.5 4.0 6-56 Th/Ts 0.68 2.47 CALIBUR 项 目 百分数 绝对 数 CD3 355-1298 CD4+CD3+ 355-1298 CD8+CD3+ 144-796 CD3+CD4+CD8+ Th/Ts 0.83 6.10 FACSCOUNT 项 目 百分数 绝对 数 CD3 69.77.06 1543358 CD4+CD3+ 388.0 849288 （ 561-1137） CD8+CD3+ 26.47.23 579175 CD3+CD4+CD8+ Th/Ts 1.5360.589 Epics-XL PIMA Capillary (n=168): 298-1615 Venous (n=217): 263-1587 FC-500 CD4 绝对计 数 （ 单 平台 ） 614-1222 CD4 绝对计 数 （ 双平台 ） 650-1248 CD4% 38%-57.2% 参考值范围 60 不同仪器、试剂与靶值间的偏差 组别 标 本 样 本 cd3+ 百分比 cd3+ 绝对计 数 cd3+cd4+ 百分比 cd3+cd4+ 绝对计 数 BD试剂 + NovoCyte 正常 质 控 血 5次均 值 72.06% 1206.2 47.54% 795.2 偏差 1% 5% 2% 3% ACEA试剂 + NovoCyte 正常 质 控 血 5次均 值 71.49% 1252 46.67% 817 偏差 1% 2% 0% 1% BD试剂 +Cali bur 正常 质 控 血 5次均 值 71.96% 1123.4 46.68% 729.4 偏差 1% 12% 0% 11% ACEA试剂 +Calibur 正常 质 控 血 5次均 值 73.14% 1249.4 47.88% 817.6 偏差 2% 2% 3% 1% 质 控品靶 值 72.2% 1267.8 46.7% 820.1 61 全国 CD4+T淋巴细胞 PT结果 机型 (仪 器数量 ) 合格 实验 室数 （占各 仪 器数量百分比） BD FACSCOUNT(183个 ) 182个 (99.5%) BD FACSCALIBUR(186个 ) 182个 (97.9%) BECKMAN COULTER EPICS（ 36个） 33个（ 91.7%） BECKMAN COULTER FC500（ 7） 7个（ 100.0%） PARTEC（ 16个） 15个（ 93.8%） FACSCanto （ 7个） 7个（ 100.0%） 其他机型 *（ 3个） 3个（ 100.0%） *BD Accuri C6、 FACSort 62 2014年国家疾控 CD4+T淋巴细胞计数 检测能力验证成绩 单 位 仪 器型号 能力 验证 成 绩 1 山 东 省疾病 预 防控制中心 BD FACS CANTO 优 秀 2 济 南市疾病 预 防控制中心 BD FACS Calibur 优 秀 3 青 岛 市疾病 预 防控制中心 BD FACS Calibur 优 秀 4 烟台市疾病 预 防控制中心 BD FACS Calibur 优 秀 5 济 宁市疾病 预 防控制中心 BD FACS Calibur 优 秀 6 菏 泽 市疾病 预 防控制中心 BD FACS Calibur 优 秀 7 泰安市疾病 预 防控制中心 BD FACS Calibur 优 秀 8 临 沂市疾病 预 防控制中心 BD FACS Count 优 秀 63 9、 病毒载量测定方法 病毒载量实验是对感染者体内游离病毒的核 酸 RNA含量的定量测定。通常使用血浆作为检测 样品，根据不同要求改进的 RNA提取技术使该实 验也可使用多种体液及组织。目前使用的病毒载 量技术主要有三种： 1、逆转录多聚酶链反应系统（ RT-PCR） 2、分枝 DNA信号扩大系统（ bDNA） 3、核酸序列扩增系统（ NASBA）。 三种技术都由核酸提取、扩增或信号放大、定量检 测三部分组成。 64 NASBA Easy Q Cobas Amplicor bDNA 340 病毒载量测定仪器 65 Alere q 分子诊断平台 POCT技术应用： NAT Roche Cobas Liat system NWGHF Savanna viral load platform 66 我国内 VQA设备分布情况 n 共 126台仪器 EasyQ 65 Taqman 30 bDNA 24 M2000 4 国产 3 67 EasyQ EASYMAG 68 送检单 n 送检表格填写应完整，不能空项 69 HIV-1病毒载量主要检测技术 生物梅里埃 : Easy Q(mini-Mag,Easy-Mag) 罗氏 : CAP CTM（ Taqman48,Taqman96） High-pure 西门子 : bDNA340,bDNA440(今年停产 ) 雅培 : M2000 国产试剂 : 达安 东北制药 万泰 艾森 凯杰 (原匹基 )第二代 正在研制的国产试剂 : 科华 丽珠 POCT： Alere 70 70 在 HIV/AIDS中进行病毒载量检测的意义 1、早期诊断和辅助诊断 2、病程监控、预测疾病进程 3、开始进行抗病毒治疗的指针 4、评价药物的疗效（无效、耐药） 71 规范拟修改模式 补充试验 WB/RIBA NAT RT1+RT2+RT3 筛查阳性样本 72 海力特科技，服务精准医疗 HIV-1 DNA 定量检测试剂盒 HIV 超敏 PCR试剂盒 【 最低检出限 】 1 copy/PCR 73 10、检测外包服务的探索 1.市级探索实践，省级加强技术指导。 2.当地卫生行政部门同意，申请专项经费支持。 3.通过公开招标 方式 确定检测机构。 4.艾迪康，迪安，金域和美康。 1.样本传递 2.减负 3.报告及时， LIMS系统 优点 存在问题 1.独立卫生检验机构良莠不分，差别很大 .个别机构合同履行存在偷工减料。 3.检测过程没有开展室内质控，没有参加 上级单位的能力验证活动。 3.个别机构在样本运输过程存在生物安全 隐患。 4.疾控中心监督不到位，存在盲区。 5.保密 74 实验室在艾滋病防治中的作用 我感染艾滋了吗？ 问实验室（抗体检测等） 我需要开始治疗吗？ 问实验室（ CD4细胞检测） 我的治疗有效吗？ 问实验室（ CD4细胞和病毒载量检测） 我需要更换治疗药物吗？ 问实验室（耐药检测等） 新发感染减少了吗？ 问实验室（新发感染检测，测量新发感染） 75 76 目标 1：确证实验室 n 目前全部建在疾控系统 n 目标： 2015年底， 17市疾控全部建立，鼓 励医疗卫生系统建立艾滋病确证实验室。 n 山东省卫生厅关于进一步加强全省艾滋 病检测工作的通知 鲁卫疾控字 201328号（ 2013年 5月 9日下发） 76 77 目标 2：艾滋病筛查实验室建设 n 2013年底，皮肤病性病防治机构、妇幼保 健机构、采供血机构（单采浆站）及各类 二级以上（含二级）医疗机构要建立艾滋 病筛查实验室。 山东省卫生厅关于进一步加强全省艾滋病检测工作的通 知 鲁卫疾控字 201328号（ 2013年 5月 9日下发） 77 78 目标 3：艾滋病检测点建设 1、目前全省尚未建立 2、目标： 2015年底，所有的乡镇卫生院、社 区卫生服务中心和一级医疗机构都建立艾滋 病检测点，鼓励具备条件的乡镇卫生院、社 区卫生服务中心和一级医疗机构建立艾滋病 筛查实验室。 山东省卫生厅关于进一步加强全省艾滋病检测工作的通知 鲁卫疾控字 201328号（ 2013年 5月 9日下发） 78 三、质量控制 n 质量控制（简称 QC）也称品质控制，是质 量管理的一部分，致力于满足质量要求。 n 定义为：为使人们确信某一物项或服务的 质量满足规定要求而必须进行的有计划的 系统化的活动。 -中国全国科学技术名词审定委员会 79 一个有效运行的质量管理体系，通常可以用 两个标志 来加以衡量： （ 1）凡影响检测报告质量的各种因素都能使 其处于受控状态，以减少和消除质量问题的 产生； （ 2）一旦出现质量问题，应能迅速反馈、及 时研究，得出纠正和预防措施，防止问题的 再度发生。 质 量管理体系有效运行的 标 志 80 能力验证 一、能力验证 :利用实验室间的比对确定实验室的检测能 力。 二、能力验证活动 :所有与能力验证有关的活动称为能力 验证活动，它包含了能力验证计划、实验室间比对计 划和测量审核 . 三、目的： 1.认可机构为确保实验室维持较高的校准 /检测水平而对 其能力进行考核、监督和确认的一种验证活动。 2.为确定实验室进行特定测量能力而进行的室间比对， 实现对实验室持续监控的能力。 3.主要用于认可活动。 81 实验室间比对 一、实验室间比对：按照预先规定的条件，由两个 或多个实验室对相同或类似检测物品进行检测的 组织、实施和评价。 二、目的： 1.确定实验室进行特定的测量能力，以及对实验室 进行持续监控的能力。 2.识别存在问题，制定不就措施。 3.确定新测量方法的有效性、可比性，并持续监控 。 4.识别实验室间的差异。 82 能力验证与实验室比对的区别 n 运作主体不同 -任何实验室和某个领域的群体可以 根据各自的需要组织实验室间比对活动，而能力 验证活动需由认可机构或其授权 /认可的机构组织 运作。 n 评价内容不同 -能力验证活动必须对参加对象进行 能力评价，而室间比对往往只需要得到某个特定 结论。 n 保密 -能力验证活动对参加者的身份保密，室间比 对不考虑。 n 能力验证属于实验室间间比对的范畴，但实验室 比对不一定就是能力验证。 83 实验室质量控制的目的 n 质量控制方法是用来监测检验方法的分析 性能，警告检验人员存在的问题。 n 质量控制一般通过检测质控品来实行。根 据统计量来判断检验结果的质量，是否需 要做系统的纠正，患者检验结果是否可接 受。 84 实验室质量控制步骤 （ 1）在试验质量要求的基础上进行质 量控制的计划； （ 2）选择适当的质控规则； （ 3）选择适当的质控物； （ 4）应用统计质量控制； （ 5）失控情况的处理。 85 质控品浓度的选择 现主张选用高、中、低值三个浓 度，至少用两个浓度。 如用一个质控品，浓度应在临界 值附近，这样可监控其敏感度的改变 ，如仅用高浓度的质控品，则很难达 到这个目的。 86 问题 n 为什么选择浓度应在临界值附近的质控品？ 87 ELISA和 PA对强阳性样品的滴度测定 稀释度 25 26 27 28 29 29 210 211 212 ELISA (O.D.) Over Over Over Over 2.896 2.561 2.497 2.385 2.372 PA + + + + + + + + + 稀释度 213 214 215 216 217 218 219 220 221 ELISA (O.D.) 1.994 1.548 1.278 1.165 0.932 0.943 0.790 0.688 0.474 PA + + + + + + + + + 稀释度 222 223 224 225 226 227 228 229 230 ELISA (O.D.) 0.368 0.345 0.268 0.242 0.247 0.235 0.152 0.117 0.105 PA + 所用 ELISA试剂为生物梅里埃 HIV 试剂盒 , 其 Cut off值为 0.150 88 统计质量控制方法 n Levey-Jennings控制图 方法 n Westgard多规则控制方 法 n 累计和方法 n 平均数和极差方法 n 趋势分析方法 n 利用病人数据分析方法 n “即刻法 ”质控方法（ Grubbs） 通常有六个质控规则，即 12s， 13s， 22s， R4s， 41s ， 10X质控规则。 启动信号： 12s规则作为警 告规则，启动其他质控规则 以助于数据的快速判断。 在控：只有当所有质控规则 均判断分析批在控时。 失控：只要其中之一的质控 规则判断为失控就被认定为 失控。 Westgard多规 则质控 89 质控图 n 最常用的质控图是 Levey-Jennings质控图 ，该图使用累计和技术或趋势分析技术的 图形提供系统偏移和漂移的状况。 n 一般采用在不同批次检测取得至少 20个数 据；如果仅做少量批次的检测，也至少做 5 个批次的检测，每个批次中不少于 4个质控 血清测定结果，以建立一个临时性的均值 和标准差，当达到 20批次数据后，替代临 时性的均值和标准差。 90 91 即刻法质控 n 质控图都必须检测 20次，方可绘制质 控图，其周期较长，一些不是每天都 检测的项目或试剂效期较短的检测项 目都会遇到困难。 n 1984年将异常值取舍法原理用于质控 ，测定三次后即可判断，故称之为 “即 刻法质控 ”，凡是定量检测的项目都可 用这一方法。 92 即 刻 法 93 94 位移：连续几次（ 35次）外部对照 S/CO值都落 在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了 较大的变化。 位移的原因：使用新批号的试剂、实验员的更换 、孵育温度的改变、仪器 ( 移液器 ) 故障等。 95 96 趋势 当几个连续质控对照值 (5-7个 )几乎按一个方向分 布时称之为趋势 (失控 )，通常由参数的缓慢改变引 起。 如移液器不准；试剂、酶标记物和对照的失效。 96 97 信息量少 不足 20次 98 99 连续 10个测量点出现在中心线两侧的 C区中 n 10 11 12 13 14 15 16 17 概率 p 0.0220 0.0150 0.0103 0.0070 0.0048 0.0033 0.0022 0.0015 100 失控原因的分析 实验室有无新的变化如仪器和试剂 有 无 针对性检查这些变化 对检测的影响 重测同一质控样品 开一瓶新的质控重测 重测 原因找到了 没找到 检查仪器状态和试剂是否过期 101 四、存在问题及建议 102 存在的问题及建议 （规章制度） 实验室规章制度不全面。有的实验室虽然建 立了各项规章制度，但实际运行中未完全按照制 度去执行，规章制度形同虚设。 建议： 各级各类艾滋病检测实验室在加强各项规 章制度建设的同时，还应加强对从业人员的宣传 教育和培训；各级领导也要给予高度重视，并且 不断地督促工作人员，认真落实各项规章制度和 相关要求并严格执行。 103 存在的问题及建议 （实验室建筑） 1、私自变更艾滋病检测实验室操作区域； 2、试验操作地点变更且未经重新验收； 3、实验室布局问题，人员流向不符合生物安 全规定，如由半污染区到清洁区再到污染 区的现象。 建议： 各筛查中心实验室应加强辖区内实 验室的督导检查，规范管理，合理布局， 实验室改造或地点变更的应及时上报，重 新进行验收。 104 存在的问题及建议 （人员配备及培训） 多数实验室人员配备不足；特别是医疗机 构其人员流动性较大，缺乏相应的培训。 建议： 各单位应严格按照省卫计委颁布的 山东省艾滋病检测实验室建设管理规范 要求加强人员的配备。各市艾滋病筛查 中心实验室要加强实验室工作人员的技术 培训。 105 资质证书 106 存在的问题及建议 （仪器设备）1、 全自动酶免仪和化学发光仪进行未进行 鉴定 与 校准； 2、多数实验室无 条码机 ，对样本的标示和管理造成 了一定难度。 3、 洗眼器 存在水压不足，无法使用或者没有安装在 污染区等问题。 4、实验室特别是使用全自动酶免仪的未配备生物安 全柜。 建议： 由仪器制造（供应）商对全自动酶免法仪 和化学发光仪等进行保养和校准，确保检测数据 的准确性。加强对生物安全柜、洗眼器、条码机 等仪器设备的配备。 107 物品凌乱、 试剂 未收回 玻璃物品影响排气 108 存在的问题及建议 （检测方法） 1、以快速检测法代替酶标或化学发光法，抗体 筛查工作全部由快速法完成，且没有任何原始记 录； 2、酶标法检测只是为了 应付考核 ，工作人员甚至 不会使用酶标仪和洗板机。 建议： 加强培训、督导、检测工作，督促各实验 室人员积极开展酶标法检测，做好试验记录及质 量控制；对于常年不开展工作的实验室，上报省 卫计委注销其艾滋病筛查实验室资格。 109 存在的问题及建议 （ 原始记录 ） 1、使用化学发光仪没有打印原始值，原始 记录不做或极不规范。 2、实验室使用酶标法或化学发光法进行艾 滋病抗体筛查