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文档简介
本科毕业生论文论文题目:康肾口服液对水负荷 大鼠模型的影响 姓 名: 专 业: 中药学 年 级: 2008级 班 级: 2008级中药本科班 学 号: 指导教师: 评定成绩: 2012年 05月 08 日i目录摘要1abstract21 前言32 实验材料32.1 实验药品32.2 实验动物42.3 实验仪器43 实验方法43.1 尿量的测定43.2 血清钾的测定(比浊法)53.2 钠的测定53.3 氯化物的测定(手工试剂)64 实验结果64.1 康肾口服液对水负荷大鼠模型5 h尿量的影响结果64.2 康肾口服液对水负荷大鼠模型尿中na+ 、k+ 、c l- 含量的影响结果75 讨论85.1 关于康肾口服液、呋塞米、肾毒清的对比85.2 传统中药、西药利尿作用的药理研究95.3 实验指标选择依据105.4 对实验结果的讨论106 结论117 致谢12参考文献12康肾口服液对水负荷大鼠模型的影响摘要 目的:通过研究康肾口服液对水负荷大鼠模型的影响,来探讨康肾口服液治疗肾炎的作用特点。方法:筛选合格的大鼠wistar72只,随机分为6组,分别灌服大、中、小剂量康肾口服液, 尿毒清颗粒混悬液,呋塞米片混悬液(为阳性对照),同体积的生理盐水(空白对照),连续给药一周,最后给大鼠灌服生理盐水 ,30min后灌服相应药物,用代谢笼法每隔一个小时量计一次尿量,并测尿液中na+ 、k+ 、cl- 的浓度。结果:与空白对照组相比,小剂量康肾口服液组可显著增加大鼠给药后第一个小时的尿液量(p0.01),大剂量康肾口服液组可显著增加大鼠给药后第三个小时的尿液量,中、小剂量康肾口服液组、可显著增加大鼠5h总尿量。大、中、小剂量康肾口服液组可显著增加尿液中尿氯离子含量,大、中剂量康肾口服液组可显著增加尿液中尿钠离子含量。结论:康肾口服液可以增强水负荷大鼠模型的利尿功能,增加钠离子和氯离子的排泄。关键词:康肾口服液;水负荷;大鼠模型;利尿 the influence of kang renal oral liquid in rat model of water loadabstractobjective: through the study of the influence of kang renal oral liquid water in the rat model of water load, to explore the role of renal oral liquid treating nephritis and characteristics. methods: screen qualified rats wistar72 and randomly divid into six groups, namely irrigation under large, medium and small doses of kang renal oral liquid, urine poisonous clear particles suspension liquid, furosemide suspension liquid (as the positive control), with the volume of the physiological saline (blank control), continue to medicine them a week, finally rats irrigation under physiological saline, 30 min later take corresponding filling after drug, with the metabolism of cage every hour volume terms a urine output, and in the urine na,k,clconcentration.results: compared with blank, small doses of kang renal oral liquid group can significantly increase the urine volume after the treatment in the first hour (p 0.01), large doses of kang renal oral liquid group can significantly increase the urine volumerats after the treatment of the third hour , medium and small dose kang kidney significantly boost of oral liquid, rats total 5 h urine output. large, medium and small doses of kang renal oral liquid can be increased significantly in the urine of chlorine ion in urine, large, medium dose kang renal oral liquid can significantly increase in the urine of urinary sodium ion content. conclusion: kang renal oral liquid can strengthen water load in the rat model of diuresis function, increase sodium and chloride ions drainage.keywords: kang renal oral liquid ;water load;rat model;diuresis1 前言肾炎是临床常见病,也是部队青年的多发病,如得不到较好治疗,迁延不愈,导致发生尿毒症。肾炎发病机理是两侧肾脏非化脓性的炎性病变。肾因肾小体受到损害出现浮肿、高血压、蛋白尿等现象,是肾脏疾病中最常见的一种。目前西医无特殊治疗,国内多采用中西医结合治疗,其方法诸多,但效果均不理想。人体肾脏具有强大的代偿能力,发生肾炎以后,可能肾脏已经遭受损伤但人们却毫无察觉。一定要对肾炎的早期症状有一定的了解,及早发现并有效治疗,这已经成为肾炎患者治疗的关键。肿是肾炎的首发症状之一,一般是从面部开始,然后蔓延到下肢。有时眼睑、手脚都会有肿胀感。通过药物的利尿作用,排出因肾脏病变而无法正常排出的水分,是肾炎病症治疗的重要衡量指标。康肾口服液由人参、生黄芪、白术、茯苓、淫羊藿、怀山药、地龙、红花、金樱子、芡实、甘草等组成,方中人参,生黄芪补脾益气,纠正人体气虚状态,白术茯苓健脾祛湿,淫羊藿助肾阳,怀山药滋补肾阴,地龙、红花活血祛瘀,佐助其祛湿功效,金樱子、芡实收敛固精,上述诸药合用,共同调理肾脏阴阳平衡,祛除水湿,扶持人体正气。:“康肾口服液”为解放军163医院非标制剂,该制剂是从临床治疗急性肾炎的中药方剂中筛选出来的,应用于肾炎的治疗,有较好的疗效。2 实验材料2.1 实验药品 康肾口服液,由人参、生黄芪、白术、茯苓、淫羊藿、怀山药、地龙、红花、金樱子、芡实、甘草等组成,具有益气温阳,固本涩精,活血通络之功,用于慢性肾炎、肾病综合征、阳痿早泄等作用,由解放军第371医院制剂室提供,批号20110425;尿毒清颗粒,康辰药业(内蒙古)有限责任公司生产,批号20110114;呋塞米,天津力生制药股份有限公司生产,批号1101008;氯化钠注射液,河南太龙药业股份有限公司生产,批号11082465;血清钾测试盒,南京建成生物工程研究所生产,批号20120104;氯化物测定试剂盒,南京建成生物工程研究所生产,批号20120104;钠测定试剂盒,南京建成生物工程研究所生产,批号20120104。2.2 实验动物 大鼠,清洁级,wistar,河北省动物实验中心提供,合格证号1112130。2.3 实验仪器uv2000紫外可见分光光度计,尤尼柯(上海)仪器有限公司;tgl-16g台式离心机,上海安亭科学仪器厂;可调式移液器,上海雷勃分析仪器有限公司。3 实验方法3.1 尿量的测定 取清洁级体重180200g大鼠, wistar, 雄性;实验前先筛选大鼠泌尿作用,大鼠禁食不禁水12h,灌服25m l/kg的生理盐水, 2 h内收集的尿量达到所灌入量的40% 以上的大鼠可用于利尿实验。取筛选合格的大鼠72只,随机分为6组, 每组12只,分别灌服灌服大、中、小剂量康肾口服液(20ml原药液/kg、10ml原药液/kg、5ml原药液/kg,原药液、生理盐水稀释1倍、生理盐水稀释2倍,2ml/100g)、尿毒清颗粒混悬液(4.2g/kg,用生理盐水配成0.21g/ml,2ml/100g)、呋塞米片混悬液(6.6mg/kg,用生理盐水配成0.33mg/ml,2ml/100g)和同体积的生理盐水(2ml/100g);每天给药1次,连续给药7 天。于第6天晚上大鼠禁食不禁水,第7天禁食不禁水16 h,给各组大鼠灌服生理盐水25ml/kg, 并轻压下腹部使膀胱排空;30 m in后各组灌服相应药物, 立即将大鼠放入代谢笼内(每笼1 只),每隔1h量计一次尿量, 共计5h, 收集给药后5h总尿量, 测尿液中na+、k+、cl- 的浓度。结果见表4。3.2 血清钾的测定(比浊法)样本前处理:取血清0.1ml加蛋白沉淀剂0.9ml,3500转/分离心5分钟,取上清0.5ml,按下表进行钾的测定。定值血清必须同样进行蛋白沉淀。表1 操作步骤:空白管标准管样本管蒸馏水(ml)0.50.4mmol/l的钾标准液(ml)0.5测定血清的上清液(ml)0.5试剂二(na-tpb工作液)(ml)222计算:血清钾含量mmol/l=*标准浓度*样本测试前稀释倍数(10) 3.2 钠的测定表2 操作步骤标准管样品管备注试剂(ml)0.30.3-标准液(ul)20-15秒内迅速加入促进剂200(ul),形成浊度后各管加1ml乙醇稀释液,混匀后测定。样品(ul)-20分光光度计测定方法:波长620或630nm,用蒸馏水调零,测定标准管吸光度值(a标)和样品管吸光度值(a样),按公式计算测定结果。计算公式:c样= a样/ a标* c标3.3 氯化物的测定(手工试剂)表3 操作步骤:空白管标准管样品管蒸馏水(ml)0.03100 mmol/l氯标准液(ml)0.03血清(ml)0.03试剂二(硫氰酸汞工作液)(ml)333混匀后,放置5-10分钟,480nm,空白管调零,1cm光径,测各管吸光度。计算公式:氯离子含量(mmol/l)=*100 mmol/l4 实验结果4.1 康肾口服液对水负荷大鼠模型5 h尿量的影响结果表4 康肾口服液对水负荷大鼠模型5 h尿量的影响(s,n=12)组别剂量(ml原药液/kg)1h2h3h4h5h5h总尿量空白对照组2.31.30.90.40.60.30.30.30.30.34.31.2呋塞米片组6.6mg5.31.7*1.20.50.40.20.20.20.20.37.31.5*尿毒清颗粒组4.2g1.81.51.60.81.00.4*0.30.40.40.25.21.1*大剂量康肾口服液组201.31.41.30.61.20.6*0.40.40.40.44.61.6中剂量康肾口服液组102.00.71.60.80.90.4*0.50.40.30.35.20.9*小剂量康肾口服液组52.90.7*1.10.80.70.50.40.30.30.35.31.2*:表示与空白对照组比p0.05,*:表示与空白对照组比p0.01从上表可看出,与空白对照组比,在第1h,小剂量康肾口服液组和呋塞米片组可显著增加大鼠尿液量(p0.01);在第2h,各给药组均有增加大鼠尿液量的趋势;在第3h,大剂量康肾口服液组可显著增加大鼠尿液量(p0.01),中剂量康肾口服液组和尿毒清颗粒组可明显增加大鼠尿液量(p0.05);在第3h、4h,各给药组增加大鼠尿液量不明显;中、小剂量康肾口服液组、尿毒清颗粒组和呋塞米片组均可显著增加大鼠5h总尿量(p0.01),大剂量康肾口服液组仅有著增加大鼠5h总尿量的趋势(p0.05);以中、小剂量康肾口服液组对水负荷大鼠模型5 h尿量增加作用为好。4.2 康肾口服液对水负荷大鼠模型尿中na+ 、k+ 、c l- 含量的影响结果 表5 康肾口服液对水负荷大鼠模型尿中na+ 、k+ 、c l- 含量的影响(s,n=12)组别剂量(ml原药液/kg)尿氯离子尿钠离子尿钾离子空白对照组37.4014.0760.005.7832.766.65呋塞米片组6.6mg62.3313.90*73.209.20*33.245.59尿毒清颗粒组4.2g68.9316.52*69.535.03*40.698.55*大剂量康肾口服液组20 73.6216.99*81.7313.34*36.517.27中剂量康肾口服液组10 67.9718.76*70.8611.37*38.436.60小剂量康肾口服液组5 57.2419.13*67.5711.8435.016.05*:表示与空白对照组比p0.05,*:表示与空白对照组比p0.01从上表可看出,与空白对照组比,大、中、小剂量康肾口服液组、尿毒清颗粒组和呋塞米片组均可显著增加尿液中尿氯离子含量(p0.01);大、中剂量康肾口服液组、尿毒清颗粒组和呋塞米片组均可显著增加尿液中尿钠离子含量(p0.01),小剂量康肾口服液组仅有增加尿液中尿钠离子含量的趋势(p0.05);尿毒清颗粒组可显著增加尿液中尿钾离子含量(p0.01),大、中、小剂量康肾口服液组和呋塞米片组仅有增加尿液中尿钾离子含量的趋势(p0.05)。5 讨论5.1 关于康肾口服液、呋塞米、肾毒清的对比 “康肾口服液”为解放军163医院非标制剂,该制剂是从临床治疗急性肾炎的中药方剂中筛选出来的,用于临床治疗急性肾炎疗效确切,使用方便,无毒副作用。其制备工艺采取经典的水煮醇沉提取方法,充分保留了盐酸小檗碱等有效成分,生产工艺科学,操作简便,质量控制技术先进,量化指标准确可靠,质量稳定。临床用于治疗急性肾炎疗效显著,总结病例162例与对照组比较,其治愈率、有效率分别达到90%、96.88%,明显高于对照组(66.6%、86.07%),且无不良反应。呋塞米也称速尿,临床上用于治疗心脏性水肿、肾性水肿、肝硬化腹水、机能障碍或血管障碍所引起的周围性水肿,并可促使上部尿道结石的排出。其利尿作用迅速、强大,多用于其它利尿药无效的严重病例。由于水、电解质丢失明显等原因,故不宜常规使用。静脉给药(2080mg)可治疗肺水肿和脑水肿。药物中毒时可用以加速毒物的排泻。 尿毒清方中用黄芪、党参健脾益气,制何首乌补肾益精,共奏健脾益肾之功;用生大黄通腑泄浊,使湿浊之邪从大便而出,白术健脾除湿,茯苓、车前草利尿除湿,姜半夏燥湿和中、降逆止呕,共 奏通腑降浊之功;更用川芎、丹参等活血化瘀。综观全方,具有健脾利湿、通腑降浊、活血化瘀等功能。其组方合理,配伍精当,切中慢性肾功能衰竭肾气虚为本,湿浊瘀血壅塞为标的病机,因此临床疗效显著。三方中,呋塞米属西药利尿剂,利尿作用迅速强大,但易引起电解质的紊乱。康肾口服液属中药浸提制剂,主要用于急性肾炎,副作用小。尿毒清亦属中成药制剂,除祛湿健脾外,补益作用明显,对慢性肾功能衰竭引起的肾气虚症状有良好的改善作用。5.2 传统中药、西药利尿作用的药理研究中医学对肾性水肿的认识,概括而言,病因大致可分为外感、内伤两端,或由风寒湿热邪气及疮毒内淫,或因饥饱劳伤、七情郁损及久病体虚等原因导致肺脾肾三脏气化失司,水道不能通调,三焦决渎失权,或气血瘀阻,血化为水,水湿泛滥而成。对此病治疗的认识,汉唐以前主要是攻逐、发汗、利小便,后世医家充实了健脾、补肾、温阳、活血等扶正固本及攻补兼施之法。传统中药理论中,利尿药性味多苦寒,或甘淡而寒。寒能清热,走下焦,尤能清利下焦湿热,以利尿通淋为主要作用,主要用于小便短赤,热淋,石淋及膏淋等症。例如尿毒清中的车前。此外,尿毒清中的黄芪、党参健脾益气,白术健脾除湿,通过增强脾脏的祛湿能力来达到利尿作用,在康肾口服液中,由人参、生黄芪、甘草等中药组成制剂,通过益气温阳、固本涩精的药理作用,增强肾脏的利水之功,应用于临床急性肾炎有较好的疗效。现代医学认为,利尿药是一类作用于肾脏,通过增加电解质和水的排出,使尿量增多的药物。利尿药的作用机制有增加肾小球的滤过抑制肾小管和集合管的重吸收影响肾小管和集合管的分泌。临床应用有治疗各型水肿:对心性及肾性水肿疗效较好。在治疗心性水肿与强心苷合用时,强心苷对低血钾的患者易引起中毒,故应及时补充钾盐。治疗高血压:多与其他降压药配合使用。治疗尿崩症主要用于肾性尿崩症及加压素无效的垂体性尿崩症。其常见的不良反应有电解质紊乱:可引起低血钠、低血镁,以低血钾最为常见。潴留现象:如高尿酸血症、高钙血症,痛风者慎用。代谢变化:如高血糖、高脂血症等,糖尿病患者慎用。5.3 实验指标选择依据 在肾病综合征患者中水肿是非常普遍的,表现多样。水肿可发生在四肢、颜面,严重者可伴浆膜腔积液, 表现为腹水、胸水/心包以及纵隔积液,甚至出现呼吸困难和心力衰竭,消化道私膜水肿也常发生,表现为呕吐、腹泻、消化不 良等症状; 另外严重的水肿还可以造成皮肤剥落,形成难治性皮肤溃疡。多数病例水肿为轻、中度,经限制钠盐摄人及应用噻嗪类利尿剂可使缓解。然而部分病人,严重水钠储留引起全身性水肿,通过饮食控制和利尿剂并不能得到有效控制。在水肿治疗前评估体内液体容量状态是至关重要的。通过临床及生化指标、影像学检查可以评估血管内血容量。评估体内液体容量包括测量尿钠浓度、钠排泄分数【fena( %) 】等。fena( %)与肾小管滤过的钠比值在钠储留的情况下小于1 %,fena越低,利尿剂反应越差,利尿剂抵抗的病人其fena显著低于正常(60%提示肾素-血管紧张素-醛固酮轴激活及肾脏排钾。肾病综合征伴低血容量的患者,fena偏低( 常小于0 . 2 %),尿k/ (k+na)偏高( 大于6 0%)。5.4 对实验结果的讨论本次实验选取两组阳性对照,分别为临床上已经验证有效的西药强效利尿剂呋塞米和中药利尿剂尿毒清,空白对照为生理盐水组,对筛选过的老鼠wistar进行造模,收集尿液,并测定尿液中钠离子、氯离子、钾离子浓度,通过一系列量化指标对康肾口服液的利水功效达到一个准确的认识。在康肾口服液对水负荷大鼠模型5 h尿量的影响实验中,可以发现在给药第第1h,小剂量康肾口服液组和呋塞米片组可显著增加大鼠尿液量(p0.01);在第2h,各个给药组增加大鼠尿液量的趋势均不明显(p0.05);在第3h,大剂量康肾口服液组可显著增加大鼠尿液量(p0.01),中剂量康肾口服液组和尿毒清颗粒组可明显增加大鼠尿液量(p0.05);在第4h、5h,各个给药组增加大鼠尿液量的趋势均不明显(p0.05);在收集的总尿量中,中、小剂量康肾口服液组、尿毒清颗粒组和呋塞米片组均可显著增加大鼠5h总尿量(p0.01),大剂量康肾口服液组仅有著增加大鼠5h总尿量的趋势(p0.05);以中、小剂量康肾口服液组对水负荷大鼠模型5 h尿量增加作用为好。综合以上结果,较之空白对照组,阳性药组与康肾口服液组均能不同程度地增加大鼠尿量,以西药呋塞米利尿功能最为强大,康肾口服液与中药利尿剂尿毒清功效相当(在上述实验标准下)。在康肾口服液对水负荷大鼠模型尿中na+ 、k+ 、c l- 含量的影响中,各个给药组均可显著增加尿液中尿氯离子含量(p0.01);大、中剂量康肾口服液组、尿毒清颗粒组和呋塞米片组均可显著增加尿液中尿钠离子含量(p0.01),尿毒清颗粒组可显著增加尿液中尿钾离子含量(p0
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