波罗蜜枝条的化学成分研究 毕业论文.doc

江西中医学院毕业论文波罗蜜枝条的化学成分研究中文摘要目的：研究波罗蜜(artocarpus nanchuanensis s.s.chang,s.h.tan et z.y.liu)枝条的化学成分，摸索最佳的提取分离及纯化方法，了解并熟练使用实验室一些仪器的基本操作。方法：利用薄层层析寻找最佳分离条件，继而利用硅胶、mci chp20p、 sephadex lh-20等方法对波罗蜜枝条的化学成分进行分离和纯化。结果：经不断摸索后，分离得到单体化合物an11。结论：此方法操作简单，思路明了，分离效果好，且成本低，可以得到较多量纯化的an11。关键词:波罗蜜，提取，分离，纯化 studies on chemical constituents of the artocarpus nanchuanensis s.s.chang,s.h.tan et z.y.liu branchesenglish abstract objective: to study the chemical constituents of the artocarpus nanchuanensis s.s.chang,s.h.tan et z.y.liu branches, to find out the best method of extraction separation and purification, to understand and skilled in the basic operation of the laboratory apparatus. methods: using tlc to find the the optimal condition for separating, then using silica, mci-gel chp20p, sephadex lh-20 to separate and purify the chemical constituents of the artocarpus nanchuanensis s.s.chang,s.h.tan et z.y.liu branches .result: after the trial and error, respectively, finally receive a single, called an11. conclusion: this method is simple to operate, and the separation effect is very good, can get more of a quantity purification. keywords: artocarpus nanchuanensis s.s.chang,s.h.tan et z.y.liu, extraction, separation, purification前 言波罗蜜(artocarpus nanchuanensis s.s.chang,s.h.tan et z.y.u)，又名南川面包树，是桑科波罗蜜属的一种常绿乔木树种，据现存最古老的一株老树测定，树高达30余米，树干胸径达80厘米，冠径约7米，皮深褐色、纵裂，木质红棕色，纹理细密，质地坚硬，果实成熟时呈橙黄色。波罗蜜是波罗蜜属植物自然分布在我国最北端的物种，是我国最为珍稀的特有植物之一，2004年被中国物种红色名录定为“极危”树种1，该物种于1982年由重庆市药物种植研究所植物专家谭士贤、刘正宇等人发现，后由贵州生物研究所张秀实教授和谭士贤、刘正宇鉴定为新种并命名2，1988年由中国科学院昆明植物研究所吴征镒院士和张秀实教授在云南植物研究发表3。由于该植物具有珍稀极危，抗污染、抗病虫害能力强，营养价值较高，医用保健作用多，木材材质优良，观赏品位高等特性和作用，因此极具科研、保护和开发价值。重庆市为此成立了波罗蜜研究所，经过多年努力该所已成功实现了该物种的训化栽培，目前已扩繁苗木25余株。但目前国内外未见该植物的化学成分和药理研究的报道，为合理开发此植物资源，我们选择本课题进行研究，先将阶段性进展报告如下。正 文第一部分 实验材料、试剂与仪器1、实验材料波罗蜜枝条，2011年3月采于重庆，经任刚副教授鉴定为桑科波罗蜜属波罗蜜，标本现保存于江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室b507室。薄层层析硅胶（hsgf254）（台江友硅胶开发有限公司）、sephadex lh-20(瑞士pharmacia biotech产品)、柱层层析硅胶（100-200目）（烟台江友硅胶开发有限公司）、rp-18反相柱层层析硅胶(ymc*gel ods-a 12nm s-75m）（ymc公司产品）、mci-gel chp20p（日本进口）等。2、实验试剂石油醚（国药集团化学试剂有限公司）、甲醇（西陇化工股份有限公司、上海振兴化工一厂）、乙酸乙酯（国药集团化学试剂有限公司）、三氯甲烷（国药集团化学试剂有限公司）、正丁醇（国药集团化学试剂有限公司）、丙酮（国药集团化学试剂有限公司）等（以上均为分析纯），另有甲醇（西陇化工股份有限公司）、乙腈（西陇化工股份有限公司），二者均为色谱纯。3、实验仪器旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）、dlsb-5/20低温冷却循环泵（郑州长城科工贸有限公司）、双重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂，sz-93a）、kq-300db型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、gzx-9070 mbe数显鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）、sartorius bt124s型电子天平（万分之一）（赛多利斯科学仪器有限公司）、zf-i型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）、自动组分收集器（利穗科技）、ye-103（2009）高速中药粉碎机（瑞安市永历制药机械有限公司）、lc3000型高效液相色谱仪（北京创新通恒科技有限公司）等。第二部分 实验方法、步骤、结果1、实验方法对波罗蜜甲醇部位采用大孔树脂、mci-gel色谱柱、薄层板等进行粗分砍段。将甲醇部位溶于一定量水中，将充分溶解好的样品上于大孔树脂柱，用水-乙醇梯度洗脱，各洗脱部位再分别酌情采用mci-gel柱层析、凝胶柱层析、制备性薄层层析等逐步分离纯化，并不断富集足量单体以备用于单体的结构鉴定。2、实验步骤与结果2.1、提取取波罗蜜枝条阴干并粉碎，得6.732药材粉末，依次分别用石油醚、二氯甲烷、甲醇冷浸提取，分别将提取液减压回收溶剂得石油醚部位浸膏32g，二氯甲烷部位浸膏56.7g，甲醇部位(an)浸膏430g。2.2、分离取甲醇部位（an）浸膏430g用水溶解后通过大孔吸附树脂粗分砍段（采用水-乙醇梯度洗脱：纯水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇），得到5个亚部位，选出30%乙醇洗脱的亚部位通过mci-中压制备色谱粗分砍段（采用水-甲醇梯度洗脱：纯水、30%甲醇、40%甲醇、50%甲醇、60%甲醇、70%甲醇、90%甲醇、100%甲醇），得到m0、m3、m4、m5、m6、m7、m9、m10共8个亚部位，m3结合tlc检测分析，合并主斑点相同部分，通过sephadex lh-20 凝胶柱层析得流分m3a1-m3a4，m3a4再经tlc检测分析，合并主斑点相同部分得m3a4a、m3a4b和m3a4c，m3a4a经lc3000型高效液相制备色谱得到一个单体化合物：an11（3.3mg）。结合理化分析及对其各自波谱数据的解析，鉴定an11这个单体化合物为儿茶素，详细分离流程如图1。南川木波罗枝条 适当粉碎6.732kg药粉 冷浸提取、浓缩 20l二氯甲烷 20l甲醇 20l石油醚二氯甲烷部位56.7g甲醇部位430g石油醚部位32g 大孔吸附树脂 水-乙醇不同浓度梯度洗脱 ar 水 30%乙醇 50%乙醇 70%乙醇 90%乙醇 mci-中压制备色谱水-甲醇不同浓度梯度洗脱 30%甲醇 40%甲醇 50%甲醇 60%甲醇 70%甲醇 90%甲醇m4m3 薄层展开后用lh-20 m3a3m3a4m3a2m3a1 an11(3.3mg)m3a4cm3a4b 图1 波罗蜜枝条提取及分离纯化过程fig 1 the process of extraction isolation and purification from the artocarpus nanchuanensis s.s.chang,s.h.tan et z.y.liu branches3、结构鉴定化合物an11，黄色固体。1h-nmr (cd3od,400mhz) 谱中可见：c5质子信号及c6质子信号6.76(1h,d,j=8.1hz) 6.72(1h,dd,j=8.1，1.5hz)为三取代苯环的两个氢，c6质子信号及c8质子信号5.86(1h,d,j=2.2hz) 5.93(1h,d,j=2.2hz)为四取代苯环的两个氢，c6与c5的偶合常数均为j=8.1hz，为邻偶，c6与c2偶合常数均为j=1.5hz，为间偶，c2上有一个h, 双峰d,j=7.48hz，可能为次甲基，与一个h邻偶。c3的偶合常数很大为j=13.2hz，可能与o相连。c4上有两个h，双二重峰dd，可能为亚甲基。13c-nmr(cd3od,600mhz)谱上可见：15个碳原子信号d82.7(c-2)，d67.4(c-3)，d27.1(c-4)，d156.2(c-5)，d94.9(c-6)，d156.4(c-7)，d94.1(c-8)，d99.4(c-4a)，d156.5(c-8a)，d130.8(c-1)，d114.0(c-2)，d144.8(c-3)，d144.9(c-4) ，d114.7(c-5) ，d119.7(c-6)。经文献检索，其氢谱和碳谱数据与文献数据基本一致，因此鉴定an11的结构为 图2 c15h14o6的结构式fig 2 the chemical structure of an11表1 儿茶素的h-nmr和13c-nmr的数据 tad.1 data of h-nmr and 13c-nmr in catechinch-nmr13c-nmr13c-nmr(文献数据6)(cd3od,400mhz)(cd3od,150mhz)(cd3od)23456784a8a1234564.57(1h,d,j=7.48hz)3.98(1h,m,j=13.2hz) 2.71(2h,dd,j=16.1hz)5.87(1h,d,j=2.2hz)5.94(1h,d,j=2.0hz)6.85(1h,d,j=1.5hz)6.77(1h,d,j=8.1hz)6.72(1h,dd,j=8.1，1.5hz)81.567.427.1156.294.9156.494.199.4156.5130.8114.0144.8144.9114.7119.782.067.928.1156.396.7156.795.7100.9156.9131.5115.6145.4145.5116.6120.3、图3 an11 的1h谱fig 3 the 1h-nmr spectroscopy of an11图4 an11 的13c谱fig4 the 13c-nmr spectroscopy of an11五、讨论和小结本次课题分的单体儿茶素具有抗肿瘤、抗基因突变、抗菌消炎、抗动脉粥样硬化等多种生物学功能4。1、结构和性质：儿茶素结构中有多个酚羟基，易溶于水，容易被氧化成醌类而提供 h，有显著的抗氧化作用。2、主要作用：2.1抗肿瘤、抗突变作用：大量的体内、外研究显示茶儿茶素，尤其是含有没食子酰基的 egcg能抑制肿瘤发生的启动、促进等不同阶段，对肿瘤具有明显的预防作用 ，但对肿瘤发生部位、肿瘤类型及发生阶段有特异性 ，还值得更深入研究 。2.2降压、降糖、降血脂和抗动脉粥样硬化作用：儿茶素对机体的脂肪代谢起重要作用，能防止血液中胆固醇及其它烯醇类和中性脂肪积累。2.3 抗菌消炎、抗病毒作用：儿茶素能抑制葡萄糖基转移酶 ，减少葡聚糖的生成量 ，干扰菌体需糖粘连，实验表明其明显影响变形链球菌的生长、产酸和对玻棒的粘附，对变形性链球菌的生