伤寒副伤寒血清学诊断（一）肥达（widal）试验方法试管法步课件

第八部分 传染病的免疫学检测 一 、伤寒、副伤寒血清学诊断 （一）肥达（Widal）试验 方法：试管法 步骤：试管编号稀释病人血清+菌液混匀, 放 置16-20小时观察结果。 结果判定 : 以出现+凝集的血清最高稀释倍数为该血清的 凝集抗体的效价 正常值： O1:80；H1:160 临床意义： 1. “O”和“H”均高于正常值，可考虑为伤寒；恢 复期较急性期增长4倍以上确定诊断。 2. “O”抗体（IgM）出现较早， “H”抗体（IgG） 出现较晚 3. 病程第2周以后，大多出现阳性反应，一般以 第3、4周阳性率最高，病愈后，可持续数月。 （二）酶联免疫（ELISA）试验 方法：抗原(伤寒杆菌脂多糖或Vi抗原)包被 +待测 血清 +第二抗体（酶标记）底物显色 参考值：1:20 临床意义： 1. 早期诊断(发病1周后即可升高） 2. 检测抗Vi抗体，可以诊断伤寒带菌者 二、抗链球菌溶血素“O”测定 溶血抑制法 原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）存在于感染链球 菌病人的血清中，可以和溶血素“O”特异性结合，使 之失去溶血作用 方法：病人血清 倍比稀释 溶血素 +红细胞 观察溶血现象 结果判定：无溶血现象的血清最高稀释倍数定为ASO 的单位数。 参考值：ASO400U 临床意义： 1. 链球菌感染1周，ASO，46周达高峰。 2.风湿热：ASO。 三、肝炎的免疫学检测三、肝炎的免疫学检测 （一）甲型肝炎（一）甲型肝炎（HAVHAV）的免疫学检查：）的免疫学检查： 1. 1. 粪便中粪便中HAVHAV抗原的检测抗原的检测 ELISAELISA夹心法夹心法 方法：方法：标本处理：待测粪便标本处理：待测粪便+ +牛肉汤盐水牛肉汤盐水冻融冻融 离心取上清离心取上清( (即待测抗原即待测抗原) )；包被抗体；包被抗体； 加待测标本；加待测标本；加酶标抗体加酶标抗体(HRP-(HRP-抗甲肝抗甲肝 IgGIgG) )；加酶底物；加酶底物；测定测定ODOD492 492。 。 结果判断：结果判断： 待测标本待测标本ODOD值值 2.1 2.1阳性阳性 阴性对照阴性对照ODOD值值 2 抗HAV-IgM的检测 抗体捕获ELISA法 方法：抗人链包被 +待检血清(含抗HAV-IgM) +HAAg +HRP-抗HAV-IgG+酶底物测定 OD492 。 结果判断： 待测标本吸光度值 2.1阳性 阴性对照吸光度值 临床意义：发病4周后，几乎全部患者抗HAV-IgM 为阳性，用于甲肝诊断。 检测抗HAV-IgG可用于流行病学调查。 （二）乙型肝炎的免疫学检测 1. HBsAg的检测 反向间接血凝试验 方法：致敏红细胞(抗HBsAgRBC) 患者血清 (含HBsAg)凝集 2.抗HBs检测 ELISA抑制法 方法：抗HBs包被 +HBsAg(已知浓度) +待测标 本 +HRP-抗HBs +酶底物 目测或测 定OD492 结果判定： 目测：阳性孔无色或浅黄 阴性孔桔黄色 OD值测定： 0.5 待测孔待测孔ODOD值值 阴性对照阴性对照ODOD值值 血中HBV标志物检查法及其阳性意义 标志物 常用检测法 阳性意义 HBsAg ELISA夹心法 正在或曾经感染 抗-HBs ELISA抑制法 曾感染或疫苗注射 抗-HBc(IgM类) 抗体捕获ELISA 发病期，慢性恶化期 抗-HBc(IgG类) ELISA抑制法 曾感染，急性恢复期 HBeAg ELISA夹心法, RPHA HBV复制，感染性强 抗-HBe ELISA抑制法， PHA 急性感染，趋向恢复 HBV-DNA PCR法 HBV复制 前S2Ag ELISA夹心法 HBV复制 抗-前S2 ELISA抑制法 提示预后良好 四、梅毒血清学检查 1. 未灭活血清反应素试验 (unheated serum reagin test, USR) 玻片凝集法 方法：病人血清和脂质抗原(心磷脂、卵磷脂和胆固 醇混合物）各一滴 玻片上 混合振动4min 观察结果 结果判断： （阴性） 无凝集 （弱阳性） 小凝集块 (阳性) 中或大凝集块 2. 快速血浆反应素试验(rapid plasma reagin test, RPR) 方法：病人血清RPR抗原(活性炭结合类脂质Ag) 观察凝集颗粒或絮片 结果判断：阴性 无黑色凝集 阳性 明显黑色凝集颗粒或絮片 临床意义： 1.梅毒患者 USR阳性者，7090； RPR阳性者，8095。 2. 某些麻风、SLE、硬皮病、类风湿性关节炎等也可 出现USR假阳性。 3.荧光密螺旋体抗体吸收实验(FAT-ABS) 方法：病人血清(56,30min) 加非致病螺旋 体抗原吸收 滴加于抗原(梅毒螺旋体) 片 +FITC-抗人IgG 荧光显微镜检 查。 结果判定：+ + 阳性 + 可疑 - 阴性 五、获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)的相关检测技 术 1.抗HIV抗体的检测： 酶联免疫吸附试验（ELISA） 明胶颗粒凝集实验(PA) 免疫荧光检测法（IFA） 免疫印记法（western blot） 放射免疫沉淀法（RIP） 应用： 、和用于筛查； 和用于确定诊断。 2.HIV病毒检测： 细胞培养分离病毒 检测HIV抗原。 3.细胞免疫功能： 检测T细胞功能 a.CD4T淋巴细胞计数 b.迟发变态反应皮试 c.有丝分裂原刺激反应 检测B细胞功能 a.循环免疫复合物 b.免疫球蛋白 1. 血清中抗HIV抗体检测 间接免疫荧光法 方法：淋巴细胞(感染HIV)涂片 待检血清(16稀 释 FITC-抗人IgG 观察结果 结果判定：阳性 胞浆出现弥漫性荧光 2.血清中抗HIV抗体检测 免疫印记法 方法：HIV-1蛋白抗原裂解物 SDS-PAGE电泳 转移至硝酸纤维膜 +待测血清 +HRP-