人乳头瘤病毒hpv核酸检测对比分析课件

人乳头瘤病毒(HPV)核酸检测 内 容 HPV与宫颈癌 宫颈癌检测方法比较 HPV核酸检测方法学比较 临床使用 宫宫 颈颈 癌癌 妇科第二大癌症妇科第二大癌症 每年约有每年约有2020余万妇女死于宫颈癌余万妇女死于宫颈癌 新发病新发病: : 全球全球-50-50万万/ /年年 我国我国-13.2-13.2万万/ /年年 姓名：哈拉尔德楚尔豪森 国籍：德国 民族：日耳曼 课题：发现人乳头瘤病毒（HPV）引发宫颈癌 成绩：获得2008年度诺贝尔生理学或医学奖 Harald zur Hausen 宫宫 颈颈 癌癌 什么是什么是HPVHPV？ Human Papilloma virus 人乳头瘤病毒 双链DNA无包膜病毒 广泛分布于高等脊椎动物 定向感染皮肤及粘膜的复 层鳞状上皮 HPV病毒电镜照片 HPVHPV感染感染 HPVHPV感染的途径和危险因素感染的途径和危险因素 性传播 直接皮肤接触 母婴传播 n n 性行为混乱性行为混乱 n n 免疫抑制免疫抑制 n n 吸烟吸烟 n n 其他其他STDSTD协同感染协同感染 n n 口服避孕药口服避孕药 HPV感染率与发病率 HPV感染与宫颈癌发病率变化图，Int J Cancer 1993,53:919 HPV感染的不同阶段 宫颈癌的癌前病变(CIN) CIN = Cervical Intraepithelial Neoplasia 宫颈上皮内瘤样病变 CIN 宫颈不典 型增生 宫颈原位癌：宫颈上皮细胞发生癌变，但癌变未突破基底膜 、间质无浸润。 轻度（CIN级）：病变局限在上皮层的13内 中度（CIN级）：病变局限在上皮层的下23 重度（CIN级）：病变几乎累及全部上皮层，仅 剩12 层表面的正常 鳞状上 皮 宫颈上皮细胞部分或大部分被不同程度异型细胞所替代 定 义 宫颈癌的癌前病变(CIN) 专家共识 宫颈癌的“元凶”就是高危型HPV感染 高危型HPV感染是宫颈癌的必要条件 没有HPV感染，就没有宫颈癌 防治HPV感染，就是防治宫颈癌 19951995年，国际癌症研究协会认为年，国际癌症研究协会认为 高危固定价HPV的持续性感染是宫 颈癌的主要病因 宫颈癌 感染HPV病毒 CIN早期浸润癌 唯一唯一 知道病因的癌症知道病因的癌症 唯一唯一 可以通过早期干预阻可以通过早期干预阻 断的癌症断的癌症 5-155-15年年 内 容 HPV与宫颈癌 宫颈癌检测方法比较 HPV核酸检测方法学比较 临床使用 分子水平细胞水平组织水平 宫颈癌检测方法学发展过程 1982年 醋酸、碘液 肉眼检测 灵敏度为70.9% 特异度为74.3% 1996年 新柏氏TCT 灵敏度为80.8% 特异度为 51-60%2000年 HPV核酸检测 灵敏度为98.6% 特异度为99% 巴氏涂片 灵敏度为50%以下 特异度为？% 1941年 宫颈癌筛查发展史 组织学检测组织学检测 肉眼观察 阴道镜观察 组织检查 优点： 操作简单，价格低廉， 适宜作初步筛查； 缺点： 准确率低，人员素质 要求高，病人痛苦程度大。 细胞学检测细胞学检测 传统巴氏涂片传统巴氏涂片 液基细胞学液基细胞学 传统巴氏涂片（CV） 液基薄层细胞学技术(TCT) 自动细胞学检测系统（LCT） 计算机辅助细胞检测系统（CCT） 细胞学检测的假阴性 液基细胞学检测假阴性结果高达液基细胞学检测假阴性结果高达20%20% 水平差的地方更高水平差的地方更高 原因分析：原因分析：1 1、视野局限、视野局限 2 2、人为因素、人为因素 1 1）取标本、片子制备）取标本、片子制备 2 2）技术差异）技术差异 3 3）耐心、责任心）耐心、责任心 细胞学检测的假阳性 1、 凹空细胞是HPV 感染的主要形 态学改变，但不是特异性改变 2、 HPV正在清除阶段 细胞学检测的性价比低 TCT阴性 要求每年做同样的检查 HPV阴性 可以把筛查时间延长到3-5年 HPV检测 TCT检查 卫生部宫颈癌筛查及早诊早治指南 核酸检测 直接检查导致宫颈癌的元凶-HPV病毒 灵敏度高，特异性好 操作简便，可作为疗效评估 和监测指标 宫颈癌筛查三方案 最佳方案：HPV核酸检测+液基细胞 基本方案：醋酸白实验 一般方案：HPV核酸检测+传统巴氏涂片 中国癌症研究协会推荐方法 内 容 HPV与宫颈癌 宫颈癌检测方法比较 HPV核酸检测方法学比较 临床使用 HPV第一代核酸检测产品 产品：HC2、港龙13型 原理：杂交捕获技术 特点：检测核酸、不分型、不能科学定量、检测 时间长 计算机 判读 15 min DNA-RNA 杂交 60 min 抗体 捕获 60 min 化学发 光检测 30 min DNA 分解 45 min HPV核酸第二代检测产品 产品：凯普21型、亚能23型、透景26型 、达安19型、港龙29型 原理：膜条杂交、液相杂交 特点： 可以分型，而且高低危都能做 需要杂交、时间长。5-10个小时不等。 开放式杂交、极易导致实验室生物污染。 结果需肉眼判读，增加人为误差。 不能定量 HPV核酸第三代检测方法 产品：上海之江13型分型检测试剂 原理：分别采用HPV13种型别的特异性引物及 荧光探针，应用PCR+Taqman技术，对 HPV13种型的特异性核酸片段进行分型 定量检测。 特点： 分型、定量、快捷、安全 优势一：分型 HPV59 IC 高危13型：1616、1818、3131、3333、3535、39 39 、4545、5151、5252、5656、5858、5959、6868 优势二：快捷 上机检测 抽提DNA 30min 60min 标本采集 30min2小时！ 加样加试剂 优势三：安全 之江： 封闭式实时荧光PCR 无需洗涤 减少污染 传统膜条杂交： 反复洗涤 操作繁琐 污染几率增加 优势四：定量（唯一） 3、便于文章的发表。 1、宫颈病毒载量和CIN分期呈正相关。 2、用于对病程的观察和疗效的评估。 正常 hpv 正常 HPV 正常 正常 hpv 正常HPV 5万IU 1万 IU 传统方法为什么不能定量？ 正常 hpv 一、标本量采集不准确。 二、上皮细胞过少，也会出现假阴性的结果 5万IU/10个1万 IU/2个 正常 hpv 之江的定量方法科学 1、MNBH是人单拷贝基因-测MNBH基因的数量相当于检测取 了多少个上皮细胞 2、如果没有检测出MNBH基因，或MNBH量太 少。可以避免假阴性结果 正常 hpv 正常 HPV 正常 正常 hpv 正常HPV HPV 内 容 HPV与宫颈癌 宫颈癌检测方法比较 HPV核酸检测方法学比较 临床使用 HPV检测结果的用途 筛查：与细胞学检测配合确定筛查频率和周期，确 保早期发现，及时干预。 分流：根据筛查结果，将高危人群和患者群进行分 流，制定不同的干预、治疗方案。 随诊：根据HPV结果的变化情况，判断治疗效果和 病情转归。 HPV检测送检流程 宫颈刷、保存液及取样示意图 HPV检测后处理 HPV基因分型 检测 常规筛查 液基细胞学检查 根据最后结果按 ASCCP指南处理 阳性 正常 CIN CIN、 阴性 1年后重复HPV 检测和细胞学检 查 半年后重复HPV 检测和细胞学检 查或阴道镜检查 阴道镜检查、多 点活检 HPV感染的治疗 通过治疗HPV 感染达到防治宫颈病变的目的是近年来研究的 热点，但目前仍缺乏公认有效的治疗手段。 30岁之前的感染者，如果没有宫颈细胞学改变，主要通过消 除易感因素、提高机体免疫能力、辅助局部药物治疗，帮助 感染者自我清除。 30岁以后的感染者，以及无论年龄有细胞学改变者，治疗包 括： 抗HPV治疗+宫颈病变治疗 其中抗HPV治疗包括： 全身抗病毒药物、免疫增强剂、生物学治疗、中药治疗、局 部药物（抗病毒、改善内环境、促进上皮修复）治疗；现有 宫颈病变治疗手段也能清除部分HPV病毒。 HPVHPV疫苗是最大希望疫苗是最大希望 项目一：项目一：HPV16HPV16、1818分型检测分型检测 特点：特点：1 1、可以分型检测、可以分型检测 2 2、可以覆盖、可以覆盖70%-80%70%-80%的病毒的病毒 3 3、收费低，容易推广、收费低，容易推广 目标：目标：1 1、常规妇科体检、常规妇科体检 HPV HPV两个项目推荐两个项目推荐 HPVHPV两个项目推荐两个项目推荐 项目二：项目二：HPV16HPV16、1818、3131、3333、3535、3939、4545 、 5151、5252、5