碳粒廓清实验课件

小白鼠碳粒廓清实验小白鼠碳粒廓清实验 一、目的要求一、目的要求 学习碳廓清实验的原理与方法学习碳廓清实验的原理与方法 ； 进一步练习小鼠的眼眶后静脉丛注射和采进一步练习小鼠的眼眶后静脉丛注射和采 血方法。血方法。 化学物对免疫系统的影响：化学物对免疫系统的影响： 免疫抑制免疫抑制 超敏反应超敏反应 自身免疫反应自身免疫反应 机体的免疫系统机体的免疫系统: : 免疫器官或组织免疫器官或组织 中枢免疫器官（骨髓和胸腺）中枢免疫器官（骨髓和胸腺） 外周（脾脏和淋巴结）外周（脾脏和淋巴结） 免疫细胞免疫细胞 免疫分子免疫分子 免疫器官或组织要反应机体的免疫功能，包括很多方面，免疫器官或组织要反应机体的免疫功能，包括很多方面， 比如体液免疫功能，细胞免疫功能，比如体液免疫功能，细胞免疫功能，NKNK和巨噬细胞的吞和巨噬细胞的吞 噬功能等等，通常用一组实验来说明机体的免疫功能噬功能等等，通常用一组实验来说明机体的免疫功能( (不不 能单凭一个实验能单凭一个实验) )。 检测的方法也有很多，比如免疫器官的重检测的方法也有很多，比如免疫器官的重 量和脏器系数；量和脏器系数；T T 、B B淋巴细胞的分型（流淋巴细胞的分型（流 式细胞仪）；放射免疫方法、碳廓清实验式细胞仪）；放射免疫方法、碳廓清实验 等。等。 二、二、 基本原理基本原理 一定浓度的碳粒经小鼠眼眶后静脉丛注射进入血液，经血一定浓度的碳粒经小鼠眼眶后静脉丛注射进入血液，经血 流带到肝，脾等处，而被这些部位的巨噬细胞吞噬清除。流带到肝，脾等处，而被这些部位的巨噬细胞吞噬清除。 在一定浓度范围内，碳粒的清除速率与其剂量成呈指函数在一定浓度范围内，碳粒的清除速率与其剂量成呈指函数 关系，即关系，即吞噬速度与血液中碳粒浓度成正比吞噬速度与血液中碳粒浓度成正比，而与已吞噬，而与已吞噬 的碳粒量成反比。的碳粒量成反比。 若以血中碳粒浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标，两若以血中碳粒浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标，两 者则呈直线关系，其斜率（者则呈直线关系，其斜率（k k）值表示吞噬速度，即未经）值表示吞噬速度，即未经 校正的吞噬指数。这是因为小鼠肝，脾重量不等，故校正的吞噬指数。这是因为小鼠肝，脾重量不等，故k k值值 不同，所以，一般以校正的吞噬指数不同，所以，一般以校正的吞噬指数 表示，反映了每单表示，反映了每单 位组织重量的吞噬活性。计算公式如下：位组织重量的吞噬活性。计算公式如下： 体重体重/( /(肝重肝重+ +脾重）脾重）KK1/3 1/3 图1 吸光度(对数值)时间曲线 K=K=（lgOD1-lgOD2lgOD1-lgOD2）/ (t2- t1)/ (t2- t1) 三、材料三、材料 健康昆明种小鼠，健康昆明种小鼠，6-86-8周龄，体重周龄，体重18-22g18-22g。 印度墨汁：以生理盐水稀释印度墨汁：以生理盐水稀释3-43-4倍（临用前配制）倍（临用前配制） 0.1% Na0.1% Na 2 2 COCO3 3： ： 0.1g Na 0.1g Na 2 2 COCO 3 3 加双蒸水至加双蒸水至100ml100ml （临（临 用前配制）用前配制） 肝素：肝素：250u/ml250u/ml 天平、注射器、镊子、手术剪，滤纸，毛细管、天平、注射器、镊子、手术剪，滤纸，毛细管、 血色素吸管（或硬质玻璃尖嘴滴管）、小试管、血色素吸管（或硬质玻璃尖嘴滴管）、小试管、 载玻片、玻璃平皿、计时器、载玻片、玻璃平皿、计时器、72307230分光光度计分光光度计 四四 操作步骤操作步骤 小鼠称重小鼠称重 用印度墨汁，按小鼠每用印度墨汁，按小鼠每10g10g体重体重0.05ml0.05ml计算，经计算，经左眼左眼眼眼 眶后静脉丛注入体内，注射完毕，眶后静脉丛注入体内，注射完毕，立即计时立即计时( (注意注射注意注射 的深度和力度）。的深度和力度）。 注入墨汁后注入墨汁后220220分钟内选两个时点（例如分钟内选两个时点（例如2 2分钟，分钟，1010分分 钟，可以自定时间，但两次间隔时间要长一些），用钟，可以自定时间，但两次间隔时间要长一些），用 预先肝素处理的毛细管分别从预先肝素处理的毛细管分别从右眼右眼眶静脉丛取血眶静脉丛取血20l20l ，置入盛有，置入盛有2ml 2ml Na2CO3溶液的试管中，摇匀。溶液的试管中，摇匀。0.5cm0.5cm 比色杯在比色杯在721721分光光度计分光光度计600nm600nm波长处测光密度（波长处测光密度（ODOD ），用），用0.10.1Na2CO3溶液为空白。溶液为空白。 处死小鼠，取肝，脾称重（若肝脾皆变黑，说明注射处死小鼠，取肝，脾称重（若肝脾皆变黑，说明注射 成功）。成功）。 五五 计算与结果计算与结果 按下式计算吞噬指数按下式计算吞噬指数 K= K=（lgODlgOD 1 1 -lgOD-lgOD 2 2 ）/ (t/ (t 2 2 - t- t 1 1 ) ) K K为未经校正的吞噬指数。为未经校正的吞噬指数。 ODOD 1 1 为为t t 1 1 （例如（例如2 2分钟）血标本的分钟）血标本的ODOD值值 ODOD 2 2 为为t t 2 2 （例如（例如1010分钟）血标本的分钟）血标本的ODOD值值 吞噬指数吞噬指数 体重体重/( /(肝重肝重+ +脾重）脾重）KK1/3 1/3 六六 注意事项注意事项 静脉注入碳粒的量，取血时间，取血量一静脉注入碳粒的量，取血时间，取血