非法酵革兰阴性杆菌特征及鉴定思路课件幻灯

非法酵革兰阴性杆菌特征 及鉴定思路 张秀珍 内容 非发酵细菌分类 主要非发酵细菌特征 非发酵细菌耐药特征 临床最常分离非发酵细菌鉴定 非法酵革兰阴性杆菌感染特点 引起临床各科室 人体各部位感染 鉴定比肠杆菌科复杂 耐药谱广 临床治疗困难 非发酵菌的分类和生物学特性非发酵菌的分类和生物学特性 l不发酵葡萄糖有氧方式代谢 包括不同的科、属、种包括不同的科、属、种 l l缺乏糖酵解酶类缺乏糖酵解酶类 代谢必须在有氧环境中进行代谢必须在有氧环境中进行 u 非发酵菌非发酵菌 NonfermentativeNonfermentative Bacilli Bacilli l l不是细菌分类的正式名称不是细菌分类的正式名称 是对一大群细菌是对一大群细菌 的统称的统称 非发酵菌的分类和命名 l与肠杆菌科不同，非发酵菌不能简单地归 于具有明显特征的某一菌科，且很多非发酵 菌的正确分类问题仍未解决 l 主要的非发酵菌分为6个科 1 分类不明 l l其余不属于以上菌科的非发酵菌暂时归类其余不属于以上菌科的非发酵菌暂时归类 于分类学尚未明确的细菌于分类学尚未明确的细菌 非发酵细菌原分类: 假单孢菌科 奈瑟菌科 未分科 非发酵细菌现代分类 假单孢菌科 产碱杆菌科 甲基球菌科 根瘤菌科 黄杆菌科 莫拉菌科 未定 临床常见非发酵菌的分类 科科 名名 属属 名名 假单胞菌科假单胞菌科假单胞菌属假单胞菌属寡氧（窄食）寡氧（窄食） 单胞菌属单胞菌属 伯克菌属伯克菌属 甲基球菌科甲基球菌科甲基杆菌属甲基杆菌属 产碱杆菌科产碱杆菌科产碱杆菌属产碱杆菌属鲍特菌属鲍特菌属 根瘤菌科根瘤菌科土壤杆菌属土壤杆菌属 黄杆菌科黄杆菌科黄杆菌属黄杆菌属金色杆菌属金色杆菌属稳杆菌属稳杆菌属 威克菌属威克菌属伯杰菌属伯杰菌属无色杆菌属无色杆菌属 莫拉菌科莫拉菌科莫拉菌属莫拉菌属不动杆菌属不动杆菌属 分类不明分类不明玫瑰单胞菌属玫瑰单胞菌属人苍白杆菌人苍白杆菌鞘氨醇菌属鞘氨醇菌属 与鉴定方法相关的分组 第一组 有动力,极鞭毛: 假单胞菌科 rRNA群IV 第二组第二组 有动力有动力, ,周鞭毛周鞭毛: : 产碱杆菌科产碱杆菌科 产碱杆菌属产碱杆菌属 第三组第三组 无动力无动力,OXI(+):,OXI(+): 黄杆菌科黄杆菌科 黄杆菌属黄杆菌属 华丽杆菌属华丽杆菌属 稳杆菌属稳杆菌属 第四组第四组 无动力无动力,OXI,OXI（- -） 不动杆菌属不动杆菌属 非发酵菌的分类非发酵菌的分类 假单胞菌科假单胞菌科 rRNArRNA I I群群 rRNArRNA III III群群 rRNArRNA V V群群 rRNArRNA IV IV群群 rRNArRNA II II群群 假单胞菌属假单胞菌属 伯克菌属伯克菌属 丛毛单胞菌属丛毛单胞菌属 短波单胞菌属短波单胞菌属 寡养（窄食）单胞菌属寡养（窄食）单胞菌属 有动力有动力 极鞭毛极鞭毛 第一组第一组 假单孢菌科根据假单孢菌科根据rRNArRNA-DNA-DNA同源性同源性 研究分为研究分为5 5组组 rRNA-I: 假单孢菌属 铜绿铜绿 荧光荧光 恶臭恶臭 门多萨门多萨 产碱产碱 斯氏斯氏 类产碱类产碱 假单胞菌属生物学特性假单胞菌属生物学特性 G G - - 杆菌杆菌 直或微弯直或微弯 一根或多根极鞭毛一根或多根极鞭毛 氧化利用葡萄糖氧化利用葡萄糖 氧化酶阳性氧化酶阳性 rRNArRNA II II 伯克菌属伯克菌属: : 类鼻疽 ; 葱头; 唐菖蒲; 皮氏; 伯伯克菌属生物学特性克菌属生物学特性 uu所有所有rRNAIIrRNAII群的细菌归入一个新的菌属群的细菌归入一个新的菌属 伯克菌属包括伯克菌属包括1313个种个种 其中假鼻疽伯克菌其中假鼻疽伯克菌 葱头、唐昌蒲、皮氏伯克菌均以前称为假单葱头、唐昌蒲、皮氏伯克菌均以前称为假单 胞菌胞菌 伯伯克菌属生物学特性克菌属生物学特性 uu葱头伯克菌葱头伯克菌 l l G-G-杆菌杆菌 多根极鞭毛多根极鞭毛 氧化利用葡萄糖氧化利用葡萄糖 氧化酶阳性氧化酶阳性 弱阳弱阳 伯克菌属生物学特性伯克菌属生物学特性 葱头伯克菌葱头伯克菌 黄色菌落黄色菌落 赖氨赖氨 生长无特殊要求生长无特殊要求 SXT SXT 敏感敏感 常用药物常用药物 氨基糖甙类氨基糖甙类 天然耐药天然耐药 酸阳性酸阳性 l l 植物病原菌葱头腐烂和人类的坏疽植物病原菌葱头腐烂和人类的坏疽 l l水源和潮湿表面水源和潮湿表面 唐菖蒲伯克菌唐菖蒲伯克菌 伯克菌属生物学特性伯克菌属生物学特性 黄色无荧光菌落黄色无荧光菌落 氧化酶阴性氧化酶阴性 不分解麦芽糖不分解麦芽糖 ONPG ONPG 阳性阳性 尿酶阳性尿酶阳性 伯克菌属生物学特性伯克菌属生物学特性 皮氏伯克菌皮氏伯克菌 生长缓慢生长缓慢 3 3个生物型个生物型1212根鞭毛根鞭毛 针尖样菌落针尖样菌落 伯克菌属生物学特性伯克菌属生物学特性 uu类鼻疽伯克菌类鼻疽伯克菌 l l人和动物类鼻疽病人和动物类鼻疽病 生长有特定区域生长有特定区域 存在于赤道南北纬存在于赤道南北纬2020度之间的土壤度之间的土壤 和不流动的水中，主要泰国和越南。和不流动的水中，主要泰国和越南。 l l大多数感染无症状，只能通过血清学诊断大多数感染无症状，只能通过血清学诊断 刺激性泥土味刺激性泥土味生长无特殊要求生长无特殊要求 rRNArRNA III III 丛毛菌科丛毛菌科: : 丛毛单胞菌属 食酸菌属 丛毛单胞菌科生物学特性丛毛单胞菌科生物学特性 uu 具有特征性的长极丛鞭毛具有特征性的长极丛鞭毛 uu 食酸丛毛单胞菌最常分离食酸丛毛单胞菌最常分离 uu 通过通过OFOF果糖果糖 甘露醇甘露醇 乙酰胺阳性乙酰胺阳性 与其它菌相鉴别与其它菌相鉴别 唯一橘黄色吲哚反应唯一橘黄色吲哚反应 uu OFOF葡萄糖培养基上不产酸葡萄糖培养基上不产酸 丛毛单胞菌属生物学特性丛毛单胞菌属生物学特性 uu丛毛单胞菌属丛毛单胞菌属 l l土生单胞菌土生单胞菌 不是人类致病菌不是人类致病菌 l l食酸丛毛单胞菌食酸丛毛单胞菌 机会感染菌机会感染菌 唯一橘黄色吲哚反应唯一橘黄色吲哚反应 l l睾酮丛毛单胞菌属睾酮丛毛单胞菌属 极为少见极为少见 食酸菌属食酸菌属 食酸菌属生物学特性食酸菌属生物学特性 敏捷食酸菌敏捷食酸菌 中泛食酸菌中泛食酸菌 德氏食酸菌德氏食酸菌 氧化酶阳性氧化酶阳性 有动力有动力 氧化利用糖类氧化利用糖类 临床意义不明临床意义不明 rRNArRNA IV IV 短波单胞菌属短波单胞菌属 缺陷短波单胞菌缺陷短波单胞菌 泡囊短波单胞菌泡囊短波单胞菌 短波单胞菌属生物学特性短波单胞菌属生物学特性 短波单胞菌属短波单胞菌属 氧化酶阳性氧化酶阳性 不分解糖不分解糖 醇或反应很弱醇或反应很弱 短波短波 紧密螺旋单极鞭毛紧密螺旋单极鞭毛 生长缓慢生长缓慢 48h 48h 可见菌落可见菌落 深黄到橘黄色素深黄到橘黄色素 七液苷阳性七液苷阳性 区别于其他产碱假单胞菌区别于其他产碱假单胞菌 临床少见临床少见 体弱体弱 免疫力低下患者感染免疫力低下患者感染 菌血症菌血症 rRNArRNA V V 寡养单胞菌属寡养单胞菌属或窄食单胞菌属或窄食单胞菌属 嗜麦芽寡氧单胞菌 嗜麦芽寡养单胞菌名称变化嗜麦芽寡养单胞菌名称变化 寡养单胞菌属生物学特性寡养单胞菌属生物学特性 19611961年嗜麦芽假单胞菌年嗜麦芽假单胞菌 19831983年嗜麦芽黄单胞菌年嗜麦芽黄单胞菌 19931993年嗜麦芽寡养（窄食）单胞菌年嗜麦芽寡养（窄食）单胞菌 寡养寡养( (窄食窄食) )单胞菌属单胞菌属 寡养单胞菌属生物学特性寡养单胞菌属生物学特性 无溶血无溶血 呈淡绿色或浅绿色呈淡绿色或浅绿色 有氨水味有氨水味 血平板菌落粗糙血平板菌落粗糙 菌落特点菌落特点 氧化酶阴性氧化酶阴性 葡萄糖氧化缓慢葡萄糖氧化缓慢 麦芽糖快速氧化麦芽糖快速氧化 赖氨酸赖氨酸 DNA DNA 阳性阳性 寡养单胞菌属生物学特性寡养单胞菌属生物学特性 生化反应生化反应 耐药特点耐药特点 寡养单胞菌属生物学特性寡养单胞菌属生物学特性 天然耐药天然耐药 泰能泰能 SXT SXT 敏感敏感 氨基糖甙类氨基糖甙类 不定菌属的非发酵菌不定菌属的非发酵菌 金色单胞菌属金色单胞菌属 黄色单胞菌属黄色单胞菌属 （浅黄假单胞菌）（浅黄假单胞菌） 浅金黄单胞菌浅金黄单胞菌 栖稻黄色单胞菌栖稻黄色单胞菌 （栖稻黄色假单胞菌（栖稻黄色假单胞菌 ） 不定菌属的非发酵细菌不定菌属的非发酵细菌 鞘氨醇鞘氨醇 希瓦菌属希瓦菌属 希瓦希瓦 1616个种个种 深海深海 羽田羽田 少动鞘氨醇菌少动鞘氨醇菌 有意义有意义 单胞菌属单胞菌属 鞘氨醇单胞菌鞘氨醇单胞菌: : 1616个个 少动鞘氨醇有意义少动鞘氨醇有意义 希瓦菌希瓦菌: : 希瓦希瓦 深海深海 非发酵菌的分类非发酵菌的分类 第二组第二组 有动力有动力 周鞭毛周鞭毛 土壤杆菌属土壤杆菌属 医学上唯一有意义的菌属医学上唯一有意义的菌属 根瘤菌科根瘤菌科 产碱杆菌科产碱杆菌科 产碱杆菌属产碱杆菌属 鲍特菌属鲍特菌属 非发酵菌的分类非发酵菌的分类 条件致病菌条件致病菌 院内感染院内感染 产产碱杆菌属碱杆菌属 木糖氧化产碱杆菌 木糖氧化亚种 脱硝亚种 粪产碱杆菌 皮氏产碱杆菌 非发酵菌的分类非发酵菌的分类 产碱杆菌的主要生物学特性产碱杆菌的主要生物学特性 菌种菌种硝酸盐硝酸盐丙二丙二木糖木糖葡萄糖葡萄糖 粪产碱粪产碱 - - + + - - - - 木糖氧化亚种木糖氧化亚种 + + + + + + + + 脱硝亚种脱硝亚种 + + + + - - - - 皮氏产碱杆菌皮氏产碱杆菌 - - - - - - - - 产碱杆菌属生物学特性产碱杆菌属生物学特性 产碱杆菌属产碱杆菌属 粪产碱杆菌粪产碱杆菌 木糖氧化产碱杆菌木糖氧化产碱杆菌 木糖氧化亚种木糖氧化亚种 脱硝亚种脱硝亚种 皮氏产碱杆菌（皮氏产碱杆菌（19861986年描年描 述）述） 产碱杆菌属生物学特性产碱杆菌属生物学特性 粪产碱杆菌粪产碱杆菌 临床标本中最常见临床标本中最常见 菌落细小菌落细小 边缘不规则边缘不规则 在碳水化合物培养基上在碳水化合物培养基上 强烈碱性反应强烈碱性反应 还原亚硝酸盐还原亚硝酸盐 不还原硝酸盐不还原硝酸盐 黄杆菌科黄杆菌科 黄杆菌属黄杆菌属 金色杆菌属金色杆菌属 稳杆菌属稳杆菌属 威克菌属威克菌属 伯杰菌属伯杰菌属 非发酵菌的分类非发酵菌的分类 第三组第三组 无动力无动力 氧化酶阳性氧化酶阳性 分类学不明分类学不明 鞘氨醇菌属鞘氨醇菌属 寡源菌属寡源菌属莫拉菌属莫拉菌属 华丽杆菌属 最新分类最新分类变动很大变动很大 金色杆菌属金色杆菌属 粘黄杆菌粘黄杆菌 产吲哚黄杆菌产吲哚黄杆菌 大比目鱼黄杆菌大比目鱼黄杆菌 脑膜败血黄杆菌脑膜败血黄杆菌 大菱鲆黄杆菌大菱鲆黄杆菌 黄杆菌科生物学特性黄杆菌科生物学特性 被重新分为被重新分为短稳杆菌短稳杆菌 归为新的属归为新的属MyroidesMyroides， 水生水生 约翰约翰 食果胶食果胶 嗜冷嗜冷 嗜糖嗜糖 琥珀黄杆菌琥珀黄杆菌 黄杆菌属黄杆菌属 吲哚都是阴性吲哚都是阴性 芳香黄杆菌芳香黄杆菌 短黄杆菌短黄杆菌 在人类临床标本中尚未发现在人类临床标本中尚未发现 黄杆菌科生物学特性黄杆菌科生物学特性 嗜醇鞘氨醇杆菌嗜醇鞘氨醇杆菌 黄杆菌科分类及生物学特性黄杆菌科分类及生物学特性 临床标本中遇到的已有新的归属的种临床标本中遇到的已有新的归属的种 脑膜败血金色杆菌脑膜败血金色杆菌 IIbIIb黄杆菌（伯杰手册归入金粉黄杆菌）黄杆菌（伯杰手册归入金粉黄杆菌） 短稳黄杆菌短稳黄杆菌 多食鞘氨醇杆菌多食鞘氨醇杆菌 第第IVIV组组 无动力无动力 氧化酶阴性氧化酶阴性 不动杆菌属不动杆菌属 不动杆菌的分类主要生物学特性不动杆菌的分类主要生物学特性 新一版伯杰手册新一版伯杰手册 醋酸钙不动杆菌醋酸钙不动杆菌 开始被归于奈瑟菌科开始被归于奈瑟菌科 但最近又被归于莫拉菌但最近又被归于莫拉菌科科 DNA-DNADNA-DNA杂交杂交 营养特征营养特征1717个基因种个基因种 利用生化特征利用生化特征 生长试验可区分其中生长试验可区分其中 1616个基个基 因种因种 7 7个基因种有菌名个基因种有菌名 不动杆菌的分类主要生物学特性不动杆菌的分类主要生物学特性 只有只有7 7个基因种有菌名：个基因种有菌名： 基因种基因种11醋酸钙醋酸钙 基因种基因种2 2 鲍曼鲍曼 基因种基因种44溶血溶血 基因种基因种5 5 琼氏琼氏 基因种基因种7 7 约翰逊约翰逊 基因种基因种8 8 洛菲不动杆菌洛菲不动杆菌 其余基因种未命名 不动杆菌的分类主要生物学特性不动杆菌的分类主要生物学特性 生物学特性生物学特性 血琼脂血琼脂 菌落圆形菌落圆形 光滑光滑 边缘整齐边缘整齐 灰白色一般无色素灰白色一般无色素 有的产生黄褐色色素有的产生黄褐色色素 G G - - 球杆菌球杆菌 常成对排列常成对排列 不易脱色不易脱色 常染成假阳性常染成假阳性 拉丝试验容易成假阴性拉丝试验容易成假阴性 有的种产生有的种产生 溶血溶血 不不动杆菌的主要生物学特性动杆菌的主要生物学特性 氧化酶阴性 触酶反应不定 吲哚 H2S 甲基红 VP反应均阴性 不产生赖、鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解 酶 有的种能产生苯丙氨酸脱氨酶 所有种不能还原硝酸盐 大多数能利用枸橼酸盐 无动力，硝酸盐还原阴性 非发酵菌的生物学特性非发酵菌的生物学特性 G-G-杆菌杆菌 球杆菌球杆菌 氧化酶大多阳性氧化酶大多阳性 少数阴性少数阴性 多数菌属有动力多数菌属有动力 少数无动力少数无动力 极生极生 周生鞭毛周生鞭毛 无鞭毛无鞭毛 OFOF糖大多氧化型糖大多氧化型 少数产碱或不利用少数产碱或不利用 非发酵菌的鉴定非发酵菌的鉴定 临床标本中最常见临床标本中最常见 铜绿铜绿 鲍曼不动鲍曼不动 嗜麦芽窄食单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌 选择少数关键性试验便可容易鉴定选择少数关键性试验便可容易鉴定 快速为临床医生提供信息快速为临床医生提供信息 uu 简便法简便法 非发酵菌的鉴定非发酵菌的鉴定 u 分组法分组法 非铜绿 鲍曼不动 嗜麦芽 必须增加其他试验进行种的鉴定必须增加其他试验进行种的鉴定 根据动力和氧化酶将各种根据动力和氧化酶将各种 临床上重要的非发酵菌分为临床上重要的非发酵菌分为 四个部分四个部分 非法酵革兰阴性杆菌的共同特点 在中国兰或麦康开选择培养基上呈不发酵 乳糖的菌落(中国兰上粉红色) 氧化酶大多阳性 有鞭毛或无鞭毛 革兰阴性杆菌或球杆菌 不能发酵糖 色素 鉴定非发酵革兰阴性杆菌的 基本步骤 初始菌落识别: 在中国兰或麦康开培养基上呈不分解乳糖的菌落 氧化酶 革兰染色 色素 确认非发酵细菌 O/F 鞭毛染色 选择鉴定系统 API 20NE ATB VIEK2Compact等 临床常见非发酵革兰阴性细菌的耐 药特征 铜绿假单孢菌 不动杆菌 嗜麦芽窄食单孢菌 绿脓杆菌耐药机制 膜蛋白缺失使通透性下降 高产ampC酶; 产ESBL; 产金属酶 泵出机制 铜绿假单孢菌 铜绿假单胞菌的细胞外膜上没有大多数革 兰阴性细菌所具有的典型的高渗透性孔蛋 白，它的孔蛋白通道对小分子物质的渗透 速度仅为典型孔蛋白通道的1%。 产KPC酶 国内： 已在肠杆菌科的多个菌属中有报道。 肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、产酸克雷伯菌 、沙门菌属、弗劳地柠檬酸杆菌和铜绿假单胞菌 等。 该类酶除阴沟肠杆菌可有染色体介导外，其他各类细菌均 可为质粒介导，已成为临床治疗难题 如何检测? 产KPC酶的菌株用常规药敏试验不容易检出。 CLSI关于碳青霉烯类的判断标准： 厄他培南2g/ml 亚胺培南、美罗培南4g/ml 因此，MIC2g/ml 或4g/ml的菌株仍可判断为敏感的 警惕：在常规药敏中如遇第三、第四代头孢菌素以及其他 的-内酰胺类耐药的菌株均应该进行稀释法测定碳青霉烯 类的对这些菌株的MIC。 检测KPC酶的最佳底物 厄他培南是检测KPC酶的最佳底物。 建议1：可将该药列为常规药敏试验的品种 建议2：对所有具有ESBLs/AmpC酶样表型（即 对第三、第四代头孢菌素耐药）的肠杆菌科细 菌采用纸片法或MIC法（E-试验）进行厄他培南 （和其他碳青霉烯类）的测定。 如MIC为2或4g/ml应视作有产KPC酶和其他碳 青酶霉烯酶的可能。 这时应与临床医师联系，并将该菌株送往参考 试验室作进一步的研究。 改良的Hodge 试验 0.5麦氏浊度单位大肠埃希菌 ATCC25922涂布MH平板 中间贴亚 胺培南（10g）纸片 接种待检菌的无菌接种环自 纸片外缘向平板边缘划线 35过夜培养 结果判断：亚胺培南抑菌圈内 出现 待检菌矢状生长者为产碳青霉 烯酶 菌株 PCR 扩增试验、DNA测序证实 为某种KPC酶 E c