[理化生]222动物细胞融合与单克隆抗体第二课时.ppt

复习题问 1、动物细胞融合的原理？ 2、诱导动物细胞融合的方法？ 3、动物细胞融合成功的标志？ 4、动物细胞融合最重要的应用是？ 2.2.2 动物细胞融合与 单克隆抗体 第二课时 长期以来，为了获得抗体，采用的是把某 种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清 中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的 抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯 度低，反应不够灵敏。人们发现，在动物发生 免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达 百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分 泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体 ，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 问题： 体外培养的条件下，一个B淋巴细胞是 不可能无限增值的，如何使单个B淋巴细胞 增殖呢？有什么方法能使一个细胞同时具备 产生抗体和无限增殖能力呢？ 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验 杂交瘤技术 两人因此在1984年获诺贝尔奖 将能够产生特定抗体的B淋巴细胞 和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合 在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞 既能在体外快速增殖，又能持续分泌特 异性抗体。 二、单克隆抗体 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆)形 成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的 化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗 体。 1、概念 特异性强、灵敏度高,并且可以大量制备 2、优点 3、制备过程 体内培养 注射抗原已免疫的B 淋巴细胞 骨髓瘤细胞 筛 选 杂交瘤细胞 能产生特定抗体的杂交 瘤细胞 筛 选 体外培养 单克隆抗体 第一次筛选（选择培养基）： 杂交瘤细胞 第二次筛选（专一抗体阳性检验）： 能产生特异性抗体的杂交瘤细胞 4、两次筛选的目的 融合后的细胞经选择培养基培养后，能 存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤 细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常 用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀 释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不 超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各 孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫 吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结 合的培养孔为阳性孔。 阳性孔中的细胞还不能保证是来自单 个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限 稀释，一般需进行34次，直至确信每个 孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即 为杂交瘤细胞的克隆化培养。 能准确识别各种抗原物质的细微差异，并 跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效 、简易、快速的优点。 5、单克隆抗体的应用 （1）、作为诊断试剂 （2）、用于治疗疾病和运载药物 主要用于癌症治疗，可制成“生物导弹”， 也有少量用于治疗其它疾病。 生物导弹：单克隆抗体 + 药物 （导向）（弹头） 动物细胞工程 植物细胞工程 植物组织培养 植物体细胞杂交 应用 动物细胞培养 核移植技术 动物细胞融合 单克隆抗体 细胞工程 2、B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不 能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它 能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗 体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进 行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个 亲本细胞的特性在体外培养条件下能不断 增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。 1、单克隆抗体是指 A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B.单个B淋巴细胞增殖产生的抗体 C.单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的 抗体 D.单个抗体通过克隆化，产生大量抗体 C 2、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆 抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 A.经过免疫的T淋巴细胞 B.未经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的B淋巴细胞 D.未经过免疫的B淋巴细胞 C 3、单克隆抗体制备过程中杂交瘤细胞是 A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而 成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合 而成 D 4、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细 胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细 胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A、 B、 C、 D、 C 5、用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列 实验步骤中错误的是 A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B 淋巴细胞 B用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细 胞 C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 D筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗 体的细胞群，培养后提取单克隆抗体 B 6.关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是 A.可以制成诊断盒，用于疾病的诊断 B.可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗 C.可以利用基因工程技术生产 D.可以在生物体内生产，不能体外生产 D 7、“生物导弹”是指 A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物 D 8、单克隆抗体的优点是 _ 9、单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的原 因是_ 10、产生抗体的细胞是_ 产生单克隆抗体的细胞是_ 特异性强、灵敏度高、可大量制备 每一种B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体 效应B细胞（浆细胞） 杂交瘤细胞 11、杂交瘤细胞的特点: _ 12、首次筛选是为了获得_ 第二次筛选时为了获得 既能无限增殖，又能分泌特异性抗体 杂交瘤细胞 既能无限增殖，又能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞 13、看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步 ？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解 的字母按正确顺序连接起来。顺序是？ 14、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计 的生产破伤风杆菌抗体的实验方案： B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到小鼠腹腔 A C 1）、该实验方案的目的是_ 2）、该方案能达到预期效果吗？为什么？ 3）、A是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞 能够产生_ 制备单克隆抗体 不能。没有将抗原注入小鼠体内，无法 获得产生单一抗体的B淋巴细胞 B细胞 抗体 4）、图中B为_过程，常用_ 作为诱导剂，该细胞继承_的遗传 特性，既能_,又能_。 5）、C过程指细胞培养，该过程包括_培 养和_培养两个阶段，其中_代以内的 的细胞属于细胞株。 细胞融合灭活的病毒 双亲细胞 分泌抗体无限增殖 原代 传代50 15、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图： （1）_ 技术是单克隆抗体技术的基础。 （2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于 _培养基。 （3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越 性是_ _。 动物细胞培养 选择 特异性强,灵敏度高 （4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常 用的诱导剂外，还可以采用_ _。 （5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的 _特点，又具备淋巴细胞的 _ _特点。 （6）淋巴细胞是由动物体_中的_ _ _细 胞分化、发育而来。 灭活的病毒 无限增殖 分泌特异性抗体 骨髓造血干细胞 16、1975年，英国剑桥 大学分子生物学实验室 的科勒和米尔斯坦，把 小鼠的淋巴细胞和小鼠 的骨髓瘤细胞融合起来 ，成为杂交瘤细胞，实 现在体外大量生产抗体 的目的。实验过程如图 ： (1)、淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞 ，两种细胞膜也能“融合”在一起，说明细胞 膜 。 (2)、单克隆抗体的准确定义应为 A一类特殊抗体 B无