植化方法学2 沈阳药科大学天然药物化学教研室.ppt

植植 化化 方方 法法 学学 宋少江宋少江 第一节大孔吸附树脂分离纯化技术 大孔吸附树脂是70年代以来发展起来 的有机高聚物吸附剂，具有较好的吸附性 能。它的化学结构与离子交换树脂类似， 区别在于后者引入可进行离子交换的酸性 或碱性基团。它的吸附作用是通过表面吸 附、表面电性或形成氢键。多用于工业生 产中，此外也用于临床化验以及作为气相 色谱的载体。目前在中草药化学成分的分 离、富集中的应用越来越受到人们的重视 大孔树脂吸附分离工艺是对中药提取 工艺影响大、带动面最广的技术之一。该 工艺操作简便，成本较低，树脂可反复使 用，适合工业生产。按日投产3吨生药计 算，增加固定资产的投资15万元，而每年 因此节约的能耗、辅料、包装材料、储藏 、运输费用至少在百万以上。因此，它具 有很强的推广应用价值,将对中药提取技 术的跳跃式进步起到促进作用。 一、大孔吸附树脂的性质和分离原理 大孔吸附树脂多为白色的球状颗粒， 粒度多为2060目，通常分为非极性和极 性两大类，根据极性大小还可分为弱极性 、中等极性和强极性。目前常用的为苯乙 烯型和丙烯腈型，在树脂合成时根据需要 引入极性基团则成为极性树脂从而增强吸 附能力。它的理化性质稳定，不溶于酸、 碱及有机溶剂。对有机物的选择性较好， 不受无机盐类及强离子低分子化合物存在 的影响。 吸附原理：大孔吸附树脂为吸附和筛 选原理相结合的分离材料。它的吸附性 是由于范德华引力或生成氢键的结果。 筛选原理是由于其本身多孔性结构所决 定。由于吸附和筛选原理，有机化合物 根据吸附力的不同及分子量的大小，在 大孔吸附树脂上经一定的溶剂洗脱而分 开。这使得有机化合物尤其是水溶性化 合物的提纯得以大大简化。 二 大孔树脂吸附作用的影响因素 图1原理示意图 树脂本身化学结构的影响 大孔吸附树脂是一种表面吸附剂，其 吸附力与树脂的比表面积表电性、能否 与被吸附物形成氢健等有关。引入极性 集团可以改变表面电性或使其与某些被 分离的化合物形成氢键，影响吸附作用 。一般非极性化合物在水中可以被非极 性树脂吸附，极性化合物在水中被极性 树脂吸附。 相似者易吸附的规律： 苯乙烯型树脂易吸附含有共轭双键、 双键和芳香核的物质吸附作用强。 非极性树脂易吸附非极性物质 极性吸附树脂易吸附极性物质 孔径大小最佳比为吸附树脂孔径/ 吸附物质=36/1为好。 树脂粒度：20 60目为宜 溶剂的影响 被吸附的化合物在溶剂中的溶解度 对吸附性能也有很大的影响。通常一种 物质在某种溶剂中溶解度大，树脂对其 吸附力就弱。如有机酸盐及生物碱盐在 水中的溶解度大，树脂对其吸附弱。含 有多量无机盐的中草药水提取物分离时 ，由于无机盐在水中的溶解度很大，无 机盐很快随溶剂前沿被排出，故可用大 孔吸附树脂代替半透膜脱盐。 有人用几种黄酮化合物的碱性水溶 液进行吸附实验，在D和DA-型非极性树 脂上的吸附力弱，易为水所洗脱。而游 离黄酮本身在树脂上的吸附力则增大。 由此可见，酸性物质在酸性溶液中进行 吸附，碱性物质在碱性溶液中进行吸附 较为适宜。 被吸附的化合物的结构的影响 被吸附化合物的分子量大小不同 ，要选择适当孔径的树脂以达到有效 分离的目的。在同一种树脂中，树脂 对分子量大的化合物吸附作用较大。 化合物的极性增加时，树脂对其吸附 力也随之增加。若树脂和化合物之间 产生氢键作用，吸附作用也将增强。 两种分子间作用力的结果、相互 竞争、相互取代、即溶质分子和溶剂 之间的作用力必须小于溶质分子和树 脂表面的作用力。这种物质才能被吸 附，故溶质在溶剂中的溶解度愈小， 愈易被吸附。 吸附量与吸附质的浓度大小有 较大关系，吸附量随吸附质的浓度增 加而增加。 溶液pH的影响： 通过实验确定，但有规律，即pH值不同 在溶剂中的溶解度和解离度不同可估计 出来吸附规律。 温度的影响： 吸附作用是一个放热过程，因而升高温 度对吸附不利，而对脱吸附有利，特别 有些中药成分在温度升高时溶解度增大 ，同样不利于吸附。 温度影响：通过静态试验证实以 2535较好，温度太高或太低 均有所下降。解吸（洗脱）是吸热 过程因此温度高一些比较好，解吸 温度以5080为最宜。 流速：18倍树脂体积每hr基本 可行。 采用DA-201型大孔吸附树脂： 试验条件： 吸附柱：2.4cm，玻璃柱填充高度（h） 48.9cm。 树脂：弱极性DA-201型吸附树脂25g（干）。 水溶胀后体积104.8m1。 流速：4.8ml/毫升树脂/小时 洗脱方式：自上而下顺流 实例： Morin （桑色素）为例 ： 吸附曲线 图3吸附曲线（流出体积与含Morin量关系） 试验结果 洗脱 树脂吸附Morin饱和后（以排出Morin量超过0.3mg/l 为标准） 用甲醇洗脱。（甲醇中加入0.1的苛性碱 调pH值为11）当甲醇用量为树脂体积0.5倍时洗脱 Morin量达最高值 图4洗脱曲线 吸附柱径（）高（h）比： 图5 平均排出口浓度与h/比之间关系 由上图可知，随着树脂柱的h/比增大，排出 Morin的含量明显下降，说明吸附越好，但太大的 （h/）比将增大流体阻力，以10201为宜。 串联柱与单柱吸附效果比较 以试验说明串联和单柱，同一径高比处理效果 基本一致 三 大孔吸附树脂分离条件的确立 要想达到较好的分离效果，必须根据被分 离化合物的大致结构特征来确定分离条件 。首先要根据被分离化合物的分子体积的 大小通过预实验或查文献资料获得所应选 用的树脂的适当孔径。其次，要根据分子 中是否含有酚羟基、羧基或碱性氮原子来 确定树脂的型号和分离条件。一般来说要 达到满意的分离效果，还应注意以下几方 面的影响。 上样溶液的pH值 酸性物质在酸性溶液 中进行吸附，碱性物质在碱性溶液中进行 吸附较为适宜。 如：酚性化合物山奈酚的提取 洗脱液的选择 洗脱液可使用甲醇、乙 醇、丙酮及乙酸乙酯。根据吸附力强弱选 用不同的洗脱剂及浓度。对非极性大孔吸 附树脂，洗脱剂极性越小，洗脱能力越强 。对中等极性大孔树脂和极性较大的化合 物来说，则用极性较大的洗脱剂为佳。为 达到满意的效果，可通过几种洗脱剂浓度 的比较来确定最佳洗脱浓度。实际工作中 甲醇、乙醇、丙酮应用较多。 树脂柱的清洗 化合物经树脂柱吸附之后，在树脂表 面或内部还残留着许多非极性成分或 吸附性杂质成分，这些杂质必须在清 洗过程中尽量洗除。非极性成分一般 用水即可洗除，而吸附性杂质根据情 况可用一定浓度的酸或碱液除去。一 般情况下洗至近无色即可。 四、产品特性及使用方法： 1）由于吸附树脂的性能可以人为调节， 故可因交联剂、致孔剂、pH等因素不同 ，人为调整，加强适应性，扩大各种中 药成分的应用范围。 2）由于吸附树脂物化性能稳定，耐酸碱 ，且不受无机盐存在的影响，所以对工业 废水的处理，中药的酸碱化后的有效成分 提取，有很大应用前景。 3）可以反复应用，经济再生，（ 而活性炭，硅胶等不能经济再生） ，是它最突出的优点。 4）使用寿命长： 可长达5年之久，（10001800余次 ），直到变成粉未状、流速影响为 止。 建议操作： 步骤流速流量备注 填充装 柱 湿法装柱，树脂装填高度小于3米 逆流洗 柱 水洗除去小粒子及破碎树脂 前处理1-5BV/h3BV用乙醇等进行予处理。 水洗脱1-5BV/h3BV必要时根据吸附剂的PH值使用缓冲溶液 吸附1-4BV/h 根据吸附 量 应在吸附容量以下。PH=5-8，温度50度。上柱药液加入 NACL有利于提高吸附 容量。 水洗2-3BV/h0.5-1BV将吸附在树脂上的杂质洗出 解吸 0.5- 3BV/h 2-3BV/h乙醇、丙酮等的（含水）溶液溶出有效成份。温度高有利于解吸 再生 0.5- 3BV/h 3-4BV/h多次应用乙醇、丙酮、碱+乙醇、碱+异丙醇等溶剂 水洗2-3BV/h3-4BV/h碱再生后加入酸中和 1) 树脂含水70%左右，湿态0以上保存。 严防冬季将球体冻裂。 2) 使用前，进行程度不同的予处理,将树 脂内孔残存的惰性溶剂浸除。方法是在提 取器内加入高于树脂层10cm的乙醇浸渍4小 时，然后用乙醇淋洗，洗至流出液在试管 中用水稀释不浑浊时为止。最后用水反复 洗涤至乙醇含量小于1%或无明显乙醇气味 后即可用于生产。 3) 生产中，建议树脂装填高度2米左右， 吸附流速4-10米/小时（1-4BV/小时）。解 吸剂可选用乙醇、甲醇、丙酮等。 4）树脂强化再生方法： 当树脂使用一定周期后,吸附能力降低或受 污染严重时需强化再生，其方法是在容器 内加入高于树脂层10CM的3%-5%盐酸溶液浸 泡2-4小时，然后进行淋洗通柱。继用3-4 倍树脂体积同浓度的盐酸溶液通柱,然后用 净水洗至接近中性；再用3%-5%的氢氧化钠 溶液浸泡4小时。最后淋洗通柱,用同浓度 的3-4倍树脂体积的氢氧化钠溶液通柱，最 后用净水清洗至PH值为中性,备用。 五、在中草药有效成分的分离、富 集中的应用 大孔吸附树脂对中草药化学成分如 生物碱、黄酮、皂苷、香豆素及其他一 些苷类成分都有一定的吸附作用。对糖 类的吸附能力很差，对色素的吸附能力 较强。 在皂苷类化合物分离、富集中的应用 在测定人参总皂苷的含量时应用D101型大孔吸 附树脂对样品进行处理，人参皂苷可完全吸附在 树脂柱上，且易于解吸回收，回收率为 94.58 ，而且此树脂柱经充分淋洗后即可重复使用，方 法简便。 用大孔吸附树脂法提取蒺藜总皂苷。将蒺藜的提 取液上D-101型大孔吸附树脂柱，用水洗至流出 液无色后，用800mLL乙醇洗脱至薄层检查无蒺 藜总皂苷为止。这样制得的蒺藜黎总皂苷可有效 去除糖类等水溶性杂质及大部分脂溶性杂，皂苷 的得率也明显优于传统方法。 黄酮类化合物分离、富集中的应用 用大孔树脂分离葛根中的总黄酮，将 葛根的70乙醇提取的浓缩液加到大孔树 脂柱上，先用水洗脱，再用70乙醇洗脱 至TLC检查无葛根素斑点为止。这样制得 的葛根总黄酮的收率为9.92（占生药总 黄酮的84.58），高于正丁醇法的 5.42 ， 2种方法的主要成分基本一致。用大 孔吸附树脂对黄酮类吸附效果较好，具有 操作简便、树脂再生容易、有机溶剂用量 小、提取率高的特点。 在苷类化合物分离、富集中的应用 在对赤芍总苷的生产工艺进行研究 中发现赤芍的70乙醇提取液浓缩后上大 孔吸附树脂柱，水洗脱后用20乙醇洗脱 ，收集洗脱液，浓缩即得赤芍总苷，收率 为5以上，且其中所含的芍药苷占75 以上。具有操作简便、树脂再生容易、得 率恒定、产品质量稳定等特点。 在酚性和酸性化合物的分离、富集中 的应用 在川芎提取、纯化工艺条件的实验研究中 发现乙醇回流提取，浓缩提取液后上大孔吸附树 脂柱，先用水洗脱，再用30乙醇洗脱，所得洗 脱液浓缩即为川芎总提取物，其中川芎嗪和阿魏 酸的含量约占2529，总收率为0.6。此 法简便、准确，适用于生产。六味地黄丸的水煎 液过D101型大孔吸附树脂柱，其中的丹皮酚约 98可被吸附，马钱素86被吸附。此法有效地 减少服用时的剂量。 在生物碱类分离、富集中的应用 传统分离纯化生物碱一般用阴离子交换树脂 。因解吸时需要用酸、碱或盐类洗脱剂，引人杂 质，给后来的分离带来不便。换用吸附树脂则可 避免此类问题。如用AB8型树脂提取喜树碱， 可直接得到含量约为50的产品。小檗碱、莨菪 碱可用非极性吸附树脂吸附纯化。因吸附树脂可 用有机溶剂进行解吸，蒸干溶剂后不会给产品中 引入杂质，且解吸容易，洗脱峰集中。是富集生 物碱类物质的较好方法。 另外，对大孔吸附树脂吸附富集不同中草 药有效部位的特性研究表明，其吸附力强 弱的规律是：黄酮生物碱酚性成分 无机物。因此提示使用同一种树脂富集 不同中草药的有效部位是可行的，但是应 选择适宜的树脂型号和合适的条件，调整 上柱药液与树脂用量的比例，保证比上柱 量较低的有效部位和成分也能保留在树脂 上。是充分利用大孔吸附树脂的一种新的 思路。 六、大孔吸附树脂 在新药研究中的应用 应在成品中建立树脂残留物或裂解物的检 测方法，制订合理的限量（二类以上新药 可仅控制原料），并列入质量标准正文。 若为苯乙烯骨架型大孔吸附树脂残留物检 查项目暂定为：苯（2ppm）、甲苯（ 890ppm）、二甲苯（2170ppm）、苯乙 烯、烷烃类、二乙基苯类（二乙稀基）及 其它可能因树脂引入的有机残留物等，其 限量不能高于国家标准或国际通用标准。 第二节第二节 离子交换树脂离子交换树脂 离子交换是利用一种不溶性高分子化合 物，它的分子中具有解离性基团（交换 基），在水溶液中能与溶液中的其他阳 离子或阴离子起交换作用。此种交换反 应都是可逆的，一般也都是遵循化学平 衡的规律。用离子交换法直接从植物抽 提液中交换含游离离子基团的酸、碱及 两性成分，使与糖类等无游离离子基团 的中性物质分开，而被吸着的物质也可 用另一洗脱液洗脱下来，这就是常用的 离子交换法。 离子交换树脂： 型号名称主要用途 001X 7 强酸性苯乙烯系阳离子交换 树脂 高纯水制备，抗生素提炼，医药化 工等。 201X 7 强碱性苯乙烯系阴离子交换 树脂 纯水制备，糖液脱色，生化制品制备。 D001大孔强酸性苯乙烯阳离子交 换树脂 工业水处理，贵金属回收，氨基酸回收 、催化等。 D201大孔强碱性苯乙烯阴离子交 换树脂 纯水制备，生化药物分离和糖类提纯， 癸二酸脱色专用。 D113大孔弱酸性丙烯酸阳离子交 换树脂 工业水处理，生化药物的分离和纯化。 D301大孔弱碱苯乙烯系阴离子交 换树脂 纯水及高纯水制备，含铬废水处理回收 。药液脱色。 D900 大孔弱碱阴离子交换树脂 新型脱色树脂。与大孔吸附树脂配 合使用。 在天然植物提取中脱色。可在醇液 中使用。 1强酸性阳离子交换树脂 一般为黑褐色。是最常用的强酸性阳离子 交换树脂，以苯乙烯为单位，母体上连结 -sO3H，结构如下： 2强碱性阴离子交换树脂 树脂的母体和苯乙烯强酸性树脂相同 。即在此母体上连给季铵，结构如下： 3弱酸性阳离子交换树脂 含有-COOH的树脂，树脂的母体 有芳香族和脂肪族两种。 4弱碱性阴离子交换树脂 含有-NH2，=NH， N的树脂，树 脂的母体有芳香族和脂肪族两种。 影响离子交换的有关因素 1溶液的酸碱度 离子交换剂可以简单地理解为一种高分子不溶 性酸和碱，因此溶液的酸碱度对离子交换有很大 的关系。当交换溶液中氢离子的浓度显著增高时 ，则因同离子效应离子交换反应就很少进行，甚 至不进行。通常酸性交换剂交换液的pH应大于2 、弱酸性交换剂的交换液pH应在6以上。同样在 阴离子交换剂中，亦会发生同样的情况，故强碱 性交换剂的交换液的pH应在12以下，弱碱性应在 7以下。 2对交换离子的选择性 离子交换剂对交换化合物来说 ，主要取决于化合物的解离离子的电 荷、半径及酸碱性的强弱。解离常数 大，酸碱性强者置换容易，但洗脱相 对来说较难。解离离子价数愈高，电 荷愈大，则它的吸附性愈强，愈易交 换在交换树脂上。原子序数大,则交 换吸附就强。 3、被交换物质在溶液中的浓度 欲交换分离的化合物，离子交换操 作通常是在水溶液或含有水的极性溶剂 中进行，这样有利于解离与交换。高浓 度有时会影响吸附次序及选择性；浓度 过高，亦会引起树脂表面及内部交联网 孔收缩，影响离子进入网孔。所以一般 实验操作时，所用的溶液的浓度应该略 稀，有利于提取分离。 4、温度的影响 一般温度增高，离子交换速度 加快，在洗脱时亦可提高洗脱能力 。但对不耐热的交换剂应注意提高 温度的条件。避免引起交换剂的破 坏。 5、溶剂的影响： 通常在水中进行交换，亦可采用含水 的极性溶剂。但在极性小的溶剂中难以进 行交换或不进行交换，而且选择性也减少 或消失。 此外对交换树脂本身来说，交联度的 大小可以增加交换树脂对被交换物质的选 择性。树脂颗粒的大小亦会影响交换速率 ，颗粒小，增加交换速度。 离子交换的基本操作 离子交换一般都在柱中进行。困为在 柱中随流而下的样品相继与新树脂接触， 所以不会产生逆交换。 色谱柱的准备：把树脂放在烧杯中，加 水充分搅拌，将气泡全部赶掉，放置几分 钟使大部分树脂沉降，倾去上面的泥状微 粒。反复上述操作到上层液透明为止。粒 度小的树脂，搅拌后要放置稍久，因为较 难沉降。如果急于倒水，往往损失较大。 上述准备好的树脂，加少量水搅拌后 倒入保持垂直的色谱柱中，使树脂沉下。 如果把粒度大小范围较大的树脂和多量的 水搅拌后分几次倒入，柱子上下部的树脂 粒度往往会不一致。另外在离子交换中要 注意不让气泡进入树脂层。如果有气泡进 来，样品溶液和树脂的接触就不均匀。因 此要注意把液面保持在树脂层的上面。滴 加时要注意不要把树脂冲散。放一块脱脂 棉或一层玻璃丝也可以避免冲散树脂。 样品量与树脂量的比例：每一种树 脂都有一定的交换当量（1g干燥树脂理 论上能交换样品的毫克当量数），如强 碱2014为3.5，强酸17为4.5等。强 酸17的4.5毫克当量/克,就是说这种树 脂的1克能够交换丙氨酸89.094.5毫克 （注：丙氨酸的分子量为89.09）。如果 用阳离子交换树脂，样品可以加到全交 换当量的1/2,用阴离予交换树脂，样品 可以加到全交换当量的1/41/3。 色谱操作： 有时要使用100目以下的树脂，但流速 较慢需加压。树脂越细或色谱柱越长， 所加压力就越大。洗脱所用的洗脱液可 以是均一的，也可以是梯度的，关于树 脂量、色谱柱的粗细、展开溶剂量和流 速的关系，可见下表 离子交换法的应用 离子交换法在工业上用途很广。 在中草药有效成分的分离方面，可用于 氨基酸、肽类、生物碱、有机酸、酚类 等的分离。由于离子交换树脂的应用， 特别对水溶性成分的分离，比以前方便 得多。 常用于有效部位的分离 民间使用中草药往往用煎剂，一般可用 水煎剂通过强酸性再通过强碱性数脂，分 别洗脱，分成酸性、中性、碱性部位供动 物或临床试验， 生物碱的分离 可用强酸性树脂从中草药水浸液或稀酒 精提取液或酒精提取部位的水溶部分直接 交换生物碱，用氨水或氨性酒精洗脱，所 得部位，再用其他分离手段分离。此法由 于树脂可反复使用，特别对水溶性生物碱 的提取分离，较经典方法有利。 有机酸及酚性物质的提取分离 能用离子交换色谱法满意地分出多 种有机酸。 氨基酸的提取分离 离子交换色谱是分离氨基酸的有效 方法，一般利用不同pH的缓冲液梯度洗 涤达到分离目的。目前氨基酸自动分析 仪，主要也是利用用离子交换色谱法设 计成的。 离子交换树脂应用注意事项: 1) 贮存运输 应贮存在密封容器内，避免受冷或爆 晒。 贮存温度：4-40之间。 树脂贮存期为2年，超过2年复检合格 方可使用。若发现树脂失水，不能直接 向树脂中加水，应先加入适量浓食盐水 ，使树脂恢复湿润。 2) 预处理 阳树脂的预处理 首先使用饱和食盐水，其量约等于树 脂体积的两倍，将树脂浸泡18-20小时， 然后用清水漂洗净，使排出水不带黄色； 再用2%-4% NaOH溶液，其量与上相同，浸 泡2-4小时，放尽碱液后，冲洗树脂直至 排出水接近中性为止；最后，用5%HCl溶 液，其量亦与上述相同，浸泡4-8小时， 放尽酸液，用清水漂流至中性待用。 阴树脂的预处理 其预处理方法中的第一步与阳树脂预处理 方法中的第一步相同；而后用5%HCl浸泡4 -8小时，然后放尽酸液，用水清洗至中性 ；而后用2%-4%NaOH溶液浸泡4-8小时后， 放尽碱液，用清水洗至中性待用。 第三节 反应薄层 1234 1234 234 234 Miller和kirchner 首先在1953年开 创并发展了直接在薄层板上实现有机反应 的想法。方法是将样品滴加在薄板上然后 复加上试剂进行反应，再用适当的溶剂展 开反应产物。这种方法既不同于将样品放 进小试管加入试剂，也不同于在毛细管中 进行的一般化学反应。根据原来化合物Rf 值再联系反应产物的色谱行为常常足以能 够鉴别一个化合物或者可能提供鉴定一个 化合物的极有价值的线索。 反应薄层既可以用于中草药中未进行分离 之前各类成分的早期识别，又可以对一个 纯化合物进行微量定性鉴别。 例如：将柠檬醛滴加在硅胶薄层板上然后 复加一滴30H2O2，再将反应后的薄层板 暴露在紫外光下十分钟，由于催化氧化成 牦牛儿酸。然后再将第二块板滴加样品柠 檬醛在其上复加1滴10氢化锂铝的乙醚 溶液，则柠檬醛被还原成牦牛儿醇。 虽然反应薄层在有的时候于薄层板 上反应不能进行完全，以致于有原始样 品与反应生成产物混合存在。但是许多 情况下能够通过这些有机的特殊反应只 消耗 未知物极微量的样品（对天然产 物尤其重要）却提供了大量的有关结构 鉴别的情报，操作又简单是值得广泛采 用的。 一、氧化 氧化反应所使用的氧化剂也有许多种，操 作方法也略有不同；有的将薄板上的样品 滴加一滴饱和的铬酐（CrO3）冰醋酸溶液 进行氧化。有些样品能用30H2O2在UV光 下暴露十分钟来氧化，也可用臭氧（ Ozone）处理薄层；将样品滴加在薄层上 ，再将有样品的薄板放到内含10-15臭 氧的干燥器中15-20分钟，取出薄板放在 空气中除尽O3，再展开薄层。 二、还原： 常用LiAlH4来还原样品；方法是加入 一滴10氢化锂铝溶液来进行，溶液试 剂不要太浓，以防试剂本身带来的潮气 使反应太猛烈。用此试剂进行酯的还原 需先在小试管或毛细管中进行；而后再 将反应物滴加在薄板上。进行酯类的还 原反应更重要的还原试剂是用异丙醇铝 来实现。 三、脱水 萜醇类可以用加入浓硫酸到样品的方 法变成烃类。然后用环已烷展开。因 为含氧的化合物极性大不能被环已烷 展开，而烃类可以从反应区域中被展 开加以区别。氧氯化磷及无水吡啶-铬 酸也可作为TLC脱水剂，但需要先在小 试管中进行然后将反应产物滴加在TLC 展开之。 四、水解 薄层板放进充满浓盐酸蒸气的槽内 加热10015-30min，进行水解。 除利用酸水解外，也可以在TLC上 进行碱水解，常用5KOH和2N NaOH加 热进行。 在中草药的研究中最重要的是还是 苷类（皂苷及黄酮苷等等）的水解， 以便鉴定水解后产生的糖及苷元。 1纯苷的鉴定 所要鉴定的苷若已分离成单一化合物，而 且量很少时，用下述方法是比较有用的。 将样品的乙醇（或甲醇）溶液点在硅胶薄 层板，点样量为20-100g，取一个硬质玻璃缸 ，缸中加入约1cm厚的浓盐酸，并于100C加热30 分钟，使缸中充满盐酸蒸气，再将已载样的薄 层板迅速地放入缸内的玻璃架上（勿接触液面 ）然后继续在100C加热20分钟，使苷在盐酸蒸 气中水解，取出薄层，用吹风机吹尽盐酸，薄 层就可以用不同展开剂鉴定水解生成的糖。 水解条件： 室温盐酸蒸气中放置