理学]小学期 药理实验动物基本知识及基本操作实验方法.ppt

兽医药理学综合性 实验 本次实验内容 l实验一 利尿药、脱水药的利尿作用的观察 l实验二 尼可刹米对兔呼吸兴奋作用观察 l实验三 组胺与抗组胺药对离体肠肌和离体 子宫作用的观察 l实验三 缩宫素和麦角新碱对离体子宫兴奋 作用的观察 目的： 1.验证所学理论，加深对理论知识的理解，巩固 兽医药理学的知识。 2.通过实验掌握有关兽医药理学的技术和方法， 培养学生客观地对生命进行观察、比较和综合 分析能力以及创新思维和创新能力。 兽医药理学实验方法 l 兽医药理学实验的方法一般根据动物的组 织器官是在整体条件下进行实验，还是将其解 剖取下，置于人工环境条件下进行实验，可分 为在体实验方法和离体实验方法。 l1.离体实验方法 离体实验是根据实验目 的和对象的需要，将所需 的动物器官或组织按照一 定的程序从动物机体上分 离下来，置于人工环境中， 设法在短时间内保持它的 生理机能而进行研究的一种 方法。 生物放 大器导 线 l2.在体实验方法 在体实验是在动物处 于整体条件下，保持欲研 究的器官于正常的解剖位 置或从体内除去，研究动 物或某器官生理机能的实 验方法。 在体实验又可分为活 体解剖实验和慢性实验。 兽医药理学实验课的要求 l实验前 预习实验内容并复习相关理论知识； l实验时 1.遵守实验室规则。实验桌上不要放置与实验无关的物品，严禁实验过程中 进食、饮水和嚼口香糖，杜绝危及安全和健康的隐患。 2.爱惜实验动物，使其保持良好的兴奋性；节约药品、水、电。 3.操作前注意倾听教师讲解的实验重点和操作要领，按程序正确操作仪器、 手术器械，按实验步骤进行实验。 4.认真观察和记录实验结果，并加上必要的标记、文字说明；实验过程中还 要思考出现了什么样的结果，为什么会有这些结果，有什么意义。若出 现非可预期结果，还应分析其原因，尽可能地及时解决。 5.试验中要有耐心，必须等前一项实验基本恢复正常后，才能进行下一项实 验，注意观察实验的全过程。 兽医药理学实验课的要求 l实验后 1.实验完成后要及时关闭仪器和设备的电源；按 规定整理实验器具，实验动物放在指定地点； 做好桌面和教室的清洁卫生；离开实验室前要 洗手。 2.及时整理实验记录，分析实验结果，写出实验 报告，按时交老师批阅。 实验报告的书写 实验项目 目的 原理 材料：实验动物，器材，药品 方法：用自己的语言简单扼要描述出来； 结果：要求真实、清楚； 讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处； 结果异常或失败的原因； 结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。 实验动物基本知识及基本 操作、实验方法 熟练的操作技术是实验成功的基础 青海大学农牧学院 机能学实验室 实验动物是生命科学研究最重要的和 不可替代的实验材料。实验动物和动物实 验是研究包括人类在内的生命活动及其疾 病防治规律的基本手段。 一、 实验动物（experimental animal） 婚垫 雄蟾 （一）实验动物的种类 蟾蜍（Toad） 蟾蜍属两栖动物，其一些基本生命活动与哺乳动物近似，其 离体组织和器官所需的生理环境比较简单 (无须供氧和恒温)。 蟾蜍常用于神经生理、肌肉生理、心脏生理，微循环、水肿 等实验。 雄蟾 雌蟾 （一）实验动物的种类 小鼠（Mouse ) 小鼠被广泛的用于生物学、医学、兽医学、生理学、遗传学、药 理、毒理、肿瘤、放射性、食品、生物制品等的科研、生产和教学 。 （一）实验动物的种类 大鼠（Rat ） 大鼠应用于生理学、药药理学、免疫学，内分泌学、 神经生理、营养学、传染病、肿肿瘤和肝外科等的研究。 （一）实验动物的种类 豚鼠（Guinea pig ) 常用于免疫学、微生物学、传染病学、听觉觉生理、实实 验验性坏血症等研究。 （一）实验动物的种类 家兔(Rabbit ) 常用于免疫学、肿肿瘤、实验实验 生理学、生殖生理、 药理学、遗传性疾病等的方面的研究，制造生物制品 。 （一）实验动物的种类 猫（Cat） 猫的神经系统和循环系统较发达，与人很相似。常用 于神经、循环和呼吸方面的实验。 （一）实验动物的种类 犬(Dog ) 常用于基础础医学、药药理、毒理学、实验外科学、行为为学、 肿肿瘤学等方面研究 在以犬为 实验动物的研 究成果中，只 有应用Beagle 才能被国际公 认。 （一）实验动物的种类 猪(Pig) 常应用于皮肤烧伤、肿瘤学、免疫学、心血管及糖尿病 、遗传性和营养性疾病、移植、外科手术等方面的研究 （一）实验动物的种类 猴(Monkey) 主要用于传染 病学、药理学和毒 理学、生殖生理、 口腔医学）营养、 代谢、行为学和高 级神经活动研究及 老年病、器官移植 、眼科、内分泌病 和畸胎学、肿瘤学 动物的捉拿、固定 动物性别的辨别 实验动物的编号 常用给药方法 二、实验动物的基本操作 蟾蜍 （一）动物的捉拿、固定 AB 图1 青蛙(或蟾蜍)捉拿法 图2 青蛙(或蟾蜍)固定法 小鼠 （一）动物的捉拿、固定 图3 小白鼠的捉拿法 大鼠、豚鼠 家兔 （一）动物的捉拿、固定 图5 兔捉拿方法 AB 图4 大鼠和豚鼠的捉拿和固定 蟾蜍 小白鼠 家兔 （二）动物性别的辨别 雄 雌 图6 小鼠性别的特征 染色法 挂牌法 （三）动物的编号 2 1 3 4 5 6 7 8 9 10 20 30 40 70 50 80 6090 图7 小鼠背部的编号方法 （四）常用给药方法 n经消化道给药法 n自动摄取法 n喂药法 n灌胃给药法 n经直肠给药 图8 小鼠灌胃法 胃管 开口器 图9 兔灌胃方法 （四）常用给药方法 n注射给药法 n皮下注射 n腹腔注射 图10 小鼠腹腔注射方法 （四）常用给药方法 n注射给药法 n肌肉注射 n静脉注射 8.5cm 3.5cm 1cm 图11 小鼠尾静脉注射法 图12 兔耳缘静脉注射法 （四）常用给药方法 n涂布给药法 n药物经皮肤吸收、局部作用或致敏 n作用时间根据药物性质和要求定 （五）动物被毛的去除法 n拔毛法 n剪毛法 n剃毛法 n脱毛法 三、实验动物的麻醉 n常用麻醉药 n氨基甲酸乙酯（乌拉坦） n氯醛糖 n巴比妥类 n乙醚 n局部麻醉药 三、实验动物的麻醉 n常用麻醉方法 n全身麻醉 n吸入麻醉 n注射麻醉 n局部麻醉 三、实验动物的麻醉 n麻醉操作要求 n麻醉的基本原则 n注意不同个体的耐受性 n及时判断麻醉的深浅 n静脉麻醉坚持先快后慢原则 n补充麻醉 n麻醉注意事项 四、实验动物手术 n术前准备 n理论准备：了解结构、方法、应急措施等 n材料准备：动物准备、器械准备 药品准备、其他准备 仪器准备 手术器械与使用 n1.手术刀 执刀姿势视切口大小、位置等不同而有指压 执刀姿势视切口大小、位置等不同而有指压式（又称琴弓式或执弓式）、捉刀式（ 或称抓持式）、执笔式及反挑式（外向执笔式）等持法，见图6中a-d。指压式为最常 用的一种执刀方法，发挥腕和手指的力量，多用于腹部皮肤切开及切断钳夹的组织。 抓持式用于切割范围较广、用力较大的坚硬组织，如筋腱、坏死组织、慢性增生组织 等，力量在手腕。执笔式用以切割短小切口，用力轻柔而操作精细，如分离血管和神 经以及切开腹膜小口等，动作和力量主要在手指。反挑式的手法是刀刃由内向外挑开 ，以避免深部组织或器官损伤，如腹膜切开或挑开狭窄的腱鞘等。 n2.手术剪(外科剪、组织剪) 有长短、尖头钝头、直弯之分；弯剪多用 于深部组织的分离，手和剪柄不致妨碍视 线。 n3.剪毛剪（简称毛剪） 毛剪与弯剪类似，只是尖部平钝。用于 术部被毛的剪除，持法与手术剪同。剪毛 时，剪毛剪自然落下逆毛方向一次次将毛 剪下，加力下压或一手提起被毛，均易剪 破皮肤。剪下的毛应集中放入加有清水的 污物盒内，避免到处飞扬。在兔耳缘静脉 注射或鼠尾静脉注射时常用拔毛法。 n4.止血钳(血管钳) 止血钳有弯直长短之分，常用的是蚊嘴 式。作用一是尽量少地夹住出血的血管或 出血点达到止血目的；二是用于分离组织 、牵引缝线等。 n5.手术镊 大小不一，有有齿(外科镊)无齿(解剖 镊)、直头弯头之分。用于夹住和提起组织 ，使于剥离、剪断和缝合。有齿镊用于夹 持较坚硬的组织，如皮肤、筋膜、肌腱等 。无齿镊用于夹持黏膜、血管和神经等较 脆嫩的组织。手术中一般多用左手以执笔 式执镊（图8），持镊时忌将镊柄握于掌心 而妨碍操作的灵活性。 n蛙类手术器械包括：蛙针（金属探针）、 铁剪刀、眼科剪、外科镊、眼科镊、玻璃 分针（玻璃钩）、蛙板或玻璃板、锌铜弓 、蛙心夹等。 n哺乳类手术器械通常包括：剪毛剪、手术 刀、止血钳、外科镊、外科剪、眼科镊、 眼科剪、气管插管、血管插管，有时用到 缝合针线和持针钳等。 四、实验动物手术 n手术 n麻醉动物 n固定动物 n备皮 n皮肤切开 n组织分离 n结扎 n止血 n手术部位保护 n消毒 n缝合抗菌 （具体方法在实验前介绍） 五、实验动物的处死方法 n蟾蜍：剪去头部 n大白鼠、小白鼠：脊椎脱臼法 断头法 打击法 n豚鼠、兔等：空气栓塞法 急性放血法 药物法 六、常用生理溶液 生理溶液 在离体器官实验中，为维持其正常生 命活动，须提供适宜的环境。在体外模仿体液成 分代替其功能的溶液即生理溶液，又称代体液。 生理溶液一般应具备以下条件：与组织液等渗； 含有维持正常机体所必需的、比例适宜的各种无 机盐离子；应含有氧气和营养物质；酸碱度应与 血浆相同，并且有一定缓冲能力。动物种类不同 ，相应的生理溶液也会有区别。常用生理溶液成 分见表1。 n配制溶液时，可按表1内的数字用天平称取 各种物质，然后将其溶解于蒸馏水中。为 求配制手续简便起见，可预先配好各种物 质的浓溶液（也称原液、基础液），用量 筒或吸管按比例吸取一定的容积，然后用 蒸馏水稀释至所需量即可。 n配制方法见表2。 BL-420生物机能实验系 统概述 青海大学农牧学院 机能学实验室 BL-420生物机能实验系统 BL-420生物机能实验系统是配置在微机上的 4通道生物信号采集、放大、显示、记录与处 理系统。它由以下三个主要部分构成，参见图 1-1。 （1）、IBM兼容微机； （2）、BL-420系统硬件； （3）、BL-420F生物信号显示与处理软件。 BL-420系统硬件是一台程序可控的，带4通 道生物信号采集与放大功能，并集成高精度、 高可靠性以及宽适应范围的程控刺激器于一体 的设备。BL-420F生物信号显示与处理软件 利用微机强大的图形显示与数据处理功能，可 同时显示4道从生物体内或离体器官中探测到 的生物电信号或张力、压力等生物非电信号的 波形，并可对实验数据进行存贮、分析及打印 。 BL-420系统原理 从广义上讲，生物机能实验系统是指这样一种 系统：研究人员、老师和学生可以通过该系统 观察到各种生物机体内或离体器官中探测到的 生物电信号以及张力、压力、温度等生物非电 信号的波形，从而对生物肌体在不同的生理或 药理实验条件下所发生的机能变化加以记录与 分析。生物机能实验系统是研究生物机能活动 的主要设备和手段之一。 BL-420生物机能实验系统的基本原理是： 首先将原始的生物机能信号，包括生物电信号 和通过传感器引入的生物非电信号进行放大（ 有些生物电信号非常微弱，比如减压神经放电 ，其信号为微伏级信号，如果不进行信号的前 置放大，根本无法观察）、滤波（由于在生物 信号中夹杂有众多声、光、电等干扰信号，比 如电网的50Hz信号，这些干扰信号的幅度往往 比生物电信号本身的强度还要大，如果不将这 些干扰信号滤除掉，那么可能会因为过大的 干扰信号致使有用的生物机能信号本身无法观 察）等处理，然后对处理的信号通过模数转换 进行数字化并将数字化后的生物机能信号传输 到计算机内部，计算机则通过专用的生物机能 实验系统软件接收从生物信号放大、采集卡传 入的数字信号，然后对这些收到的信号进行实 时处理，一方面进行生物机能波形的显示，一 方面进行生物机能信号的存贮，另外，它还要 根据使用者的命令对数据进行指定的处理和分 析，比如平滑滤波，微积分、频谱分析等。 对于存贮在计算机内部的实验数据，生 物机能实验系统软件可以随时将其调出 进行观察和分析，还可以将重要的实验 波形和分析数据进行打印。 BL-420生物机能实验系统原理图 BL-420F生物信号显示与 处理软件的主界面 利尿药、脱水药的利尿作用 的观察 目的：了解利尿药和脱水药的利尿作用 。 原理：通过药物影响尿液的生成，观察 药物的利尿作用。 动物：家兔 药品：利尿酸、戊巴比妥钠、甘露醇 器材：计算机生物信息采集与处理系统 、记滴器输尿导管等。 实验方法 1.将兔用3%戊巴比妥钠 /Kg麻醉，仰卧固定于兔手术台，剪去颈部被 毛，切开皮肤肌肉，分离迷走神经干，于其下穿一线备用，将导尿管送 入膀胱。 2.计算机化生物信号采集与处理系统：将尿滴记录线接到记滴器上，通 过记滴器与系统的4通道连接，待尿滴滴数稳定后，描记尿液滴数，用 量筒量取每5分钟尿量。 3.耳静脉注射生理盐水25毫升，观察并记录尿量变化。 4.用听诊器听正常心跳的情况，剪断一侧迷走神经，以中等强度电流刺 激其离中断，用听诊器听正常心跳的变化，情况待血压显著下降后，观 察并记录尿量变化。 5.10分钟后，耳静脉注射利尿酸，每隔10分钟观察并记录尿量变化。 6.以中等强度电流刺激其离中断，用听诊器听正常心跳的变化，情况待 血压显著下降后，耳静脉注射垂体后叶素1-2单位，观察并记录尿量变 化。 7.耳静脉注射甘露醇每千克体重0.25-0.5mg，每隔10分钟观察并记录尿 量变化。 结果 正常尿量注射生理 盐水后的 尿量 剪断迷 走神经 的尿