Elecsys检测HBV血清学指标在疾病诊断和管理中的应用.pptVIP

Elecsys检测乙型肝炎血清学指标 在疾病诊断和管理中的应用 机会： 在中国： HBsAg携带者超过1.2亿！慢性乙肝患者约3000万！每年报告乙肝新发病例数 约50万！ 超过80的乙肝2对半检测是通过ELISA方法完成！ 两对半检测的化学发光市场的NO.1是雅培！ 乙型肝炎现状 什么是乙肝病毒 不同形态的每一种病毒颗粒都是由一个核酸芯子和一个蛋白质衣壳所组成 病毒包含的核酸要么是DNA分子，要么是RNA分子。根据核酸的不同，病毒 可以分为DNA类病毒（例如乙肝HBV）和RNA类病毒（例如丙肝HCV，艾滋病 病毒HIV） 乙肝病毒结构 电化学发光（ECL）检测乙肝标志物 检测项目检测原理 HBsAg双抗体夹心法 HbsAg Confirmatory Test表面抗原确认实验 Anti-HBs双抗体夹心法 HBeAg双抗体夹心法 Anti-HBe竞争法 Anti-HBc竞争法 Anti-HBc IgMU链捕获 Elecsys Anti-HBs - Test principle -夹心法 Cutoff Formula = Cal 1 x 0.47 + Cal 2 (E170) = Cal 1 x 0.7 + Cal 2 (E2010) COI = Sample / Cutoff Elecsys Anti-HBc - Assay principle -竞争法 Cutoff Formula = Cal 1 + 0.65 x Cal 2 COI = Sample / Cutoff Elecsys Anti-HBc IgM - Assay principle - 捕获获法 expand testing market 易患者早期检测 监测治疗诊断预防 detection test / drugtesttesttesttesttest 提供健康信息: - 患病风险 - 健康状况 - 药物选择 - 治疗效果 应用一：罗氏集团 罗氏诊断与罗氏制药 提供诊断治疗监控的一体化解决方案 罗氏制药 中枢神经系统 传染性疾病 肿瘤学，病毒学 心血管疾病 骨质疏松药物 发炎性和自体免疫疾病 皮肤病学 代谢紊乱 移植 Roche 肝病检测相关产品 PCR 免疫 分子诊断 临床生化 Roche 乙肝检测/治疗相关产品 血清标志物诊断 Immunoassays (Elecsys) PCR (Amplicor/TaqMan) 治疗 Pegasys Roferon-A 检测 PCR (Amplicor/TaqMan) 基因分型检测 (Lightcycler科研项目) 应用二：溯源至国际标准 HBsAg II 1st WHO Reference Standard 1977 1000 800 600 400 200 0 02004006008001000 Elecsys Anti-HBs based on WHO reference standard IU/L Elecsys Anti-HBs based on Master calibrators IU/L Passing/Bablok: y = 0.19 + 0.997xr = 1.00 Linear regression: y = 0.57 + 0.99x 应用二：溯源至国际标准 Elecsys Anti-HBs Standarduzation against WHO reference material 应用三：Elecsys HBsAg 先进的原理、高灵敏度与高特异性的完美结合 如何实现：使用两种不同的抗体分别进行捕获和标记 钌标记的寡聚HBs抗体，多价结合 ，可放大信号，提高灵敏度。 生物素标记的单克隆捕捉抗体，排除 了干扰，保证卓越的特异性。 临床特异性即阴性样本符合率； 临床特异性越高，假阳性率越低。 在欧洲多个评估中心对5892个标本的 检测中， Elecsys HBsAg显示出优异的 99.94% 的临床特异性 应用三：Elecsys HBsAg 高灵敏度与高特异性的完美结合 Weber et al Improved detection of hepatitis B virus surface antigen by a new rapid automated assay. J Clin Microbiol. 1999, 37:2639-47. 和雅培的测试相比，Elecsys HBsAg 具 有更优异的特异性和灵敏度。 (published data) “Elecsys HBsAg完美结合了高灵敏度（100）与高特异性（100），尽管这两者的判断标 准是相互对立的。” NPV：阴性预测值 PPV：阳性预测值 应用三：Elecsys HBsAg 高灵敏度与高特异性的完美结合 临床灵敏度即阳性检出率； 临床灵敏度越高，假阴性率越低 Elecsys HBsAg 相比于DPC Immulite 和 Abbott Axsym, IMx, Auszyme具有更优异的灵敏 度 Assay I1: DPC Immulite 2000 Assay I2: DPC Immulite Assay A1: Abbott Axsym Assay A2: Abbott IMx Assay A3: Abbott Auszyme 应用三：Elecsys HBsAg 高灵敏度与高特异性的完美结合 高灵敏度可用于感染的早期检测 Cut-off COI: Cut Off Index Assay A1: Abbott Axsym Elecsys HBsAg相对 Abbott Axsym 显 示出更优异的血清转化灵敏 度，能更早地检测出被感染 的病人。 罗氏诊断内部实验结果。 应用三：Elecsys HBsAg 高灵敏度与高特异性的完美结合 高灵敏度可用于感染的早期检测 Elecsys HBsAg与其他品牌的检测相比，其差异是显著的 （p 0.05 COI (preliminary)COICOIIU/mL 1113A1141398.01303.6206.8106.2pos 2P120L 10.7 7.8239.3122.9pos 3R122I 130.1 128.886.624.9pos 4R122T 658.5 617.0171.7108.3pos 5E122I 164.7 130.476.612.9pos 6T123N 2595 2088.11.833.7pos 7122RA123127.0141.525.36pos 8122RGA1247.9101.9210.6pos 9T131I1450.51337.2220.5111.3pos 10T131P1221.61140.5208.188.5pos 11Y134S1109.21052.4208.196.7pos 12K141E9.36.6159.030.9pos 13P142L 929.9 292.1238.2156.6pos 14D144G157.3152.460.36.3pos 15P142L / G145R28.50.7111.217.0nd 16C147S 28.7 5.5289.145.9pos 17C147T, C149T 4.3 1.270.45.0pos 18E164D1664.91551.7192.4117.5pos 19S174N2669.02105.3288.9246.9pos Abbott Axsym 在123 位点突变的检 测能力很差 al. J Clin Microbiol 2004, 42: 2861-65 Levicnik-Stezinar S: Clin. Lab. 2004, 50:49-51. Elecsys HBsAg 能检测出所有的7个突变 标本，而 Assay E, O 和 V 都有部分样 本漏检 A1 : Abbott Axsym, E: Behring Enzygnost; V: Ortho Vitros O: Microtiterplate assay 应用五：Elecsys HBsAg 检测突变的能力 Elecsys HBsAg检测天然HBsAg突变样本 应用五：Elecsys HBsAg 检测突变的能力 Elecsys HBsAg的检测突变的能力综述 Elecsys HBsAg能检测重组及天然天然的各种突变样品，然而有 些厂家的试剂则不能检测123（Abbott）、143（DPC）位点 的突变。 不同的HBsAg免疫检测方法对检测不同HBsAg突变的能力 及灵敏度不同。 Elecsys具有最全面的检测能力,灵敏地识别病毒变异 病毒出现新的变异株时，也能准确的检测出来。 应用六：Elecsys Anti-HBs定量检测、精密度高 从低浓度高浓度均具有极高的精密度 提供准确可靠的疫苗接种前和接种后的保护性抗体量化指标 指示免疫应答 AntiHBS(IU/l) 接种的要求 100007年后 第一,第二,第三次接种后Elecsys Anti-HBs与其他Anti-HBs试剂检测后的结果 Elecsys Anti-HBs用于监测免疫应答的疗效 Correlation to comparison assay (2) 10000 1000 100 10 1 0 0110100100010000 Vaccinated persons (n = 113) Elecsys Anti-HBs IU/L Test B IU/L n = 0n = 109 n = 4n = 0 具有非常好 的相关性 Elecsys Anti-HBs 疫苗接种后检测结果同AxSym比较 v 表面抗原存在不同的亚型， 所以抗体具备多样性。使用不同的厂家的 试剂检测AntiHbs的结果会有一定的差异。 v 各家试剂中采用的表面抗原的材料（来源于血浆或者基因工程），抗原 的亚型以及处理程序等都很大程度的影响着Anti-HBs的结果 v 血清中抗体的复杂性： 感染的患者的体内会存在着抗a,d or y等抗原 决定簇的特异抗体，接种的个体产生的抗体的构成依赖于疫苗的成份 v 罗氏Anti-HBs试剂中使用的HBsAg是来源于人类血清的纯化的含有各种 亚型的HBsAg v 国际标准 阳性10U/l； 通常认为 100 U/l 才具备保护能力。 Elecsys Anti-HBs 校准品：PEI-U (Paul-Erlich Institute Unit) 精密度： CV% 4% 测定范围： COI PEI-U/ml 线性范围 1.5 400 0.3 100 最高点 2000 1000 Hook 300 150000 应用七：Elecsys HBeAg 可定量检测 提供临床监控最重要的量化指标 可用于急性乙型肝炎早期指标；乙型肝炎病毒感染的病人随访；高度传染性的标志； 治疗监控 400 COI 100 U/mL 2000 COI 1000 U/mL 300 COI 150000 U/mL 检出灵敏度及特异性都极佳 Elecsys HBeAgElecsys HBeAg 测定结果的计算测定结果的计算 COI 样本 400 用稀释液作1：100稀释后再测 按公式计算 U/ml X100 报告结果 HBeAg (U/mL) = ( 样本COI HBeAg质控1COI) x 0.227 通过样本的稀释和COI与PEI-U/mL的换算 Elecsys HBeAg测定可报告定量的结果 HBeAg的值对于慢性乙肝抗病毒治疗的应用价值 HBeAg 的血清学转换是被认为是慢性乙肝治疗的最重要的短期目标 在治疗中和治疗前HBeAg的浓度对于抗病毒治疗的预示价值要超过HBV DNA 对于治疗后的04周，HBeAg水平的下降（50)的预示意义是独立的 预示意义要远超HBV DNA,HBV DNA快速下降(90%)也有可能最终不 能 发生HBeAg转阴 在治疗中HBV DNA的下降与HBeAg血清转换不一定一致 HBeAg 检测提供治疗监控的丰富信息 v 在治疗后72周时的血清转换率与HBeAg的基线值呈独立相关 基线值越低，血清转换几率越高 HBeAg 100PEIU/ml, 72周时只有5%的转阴率 高临床特异性和出 色的辨别能力降低 复测率。 在1354例献血者样本中，临床特异性达到99.8%。 应用特殊的DTT还原剂进行预处理，消除了由于IgA或IgM相关分子引起的非特异反应。 应用八：Elecsys Anti-HBc高特异性降低复测率 Elecsys检测不受类风湿因子干扰， 优于其他竞争对手 更少的假阳性，降低复测率 应用九：Elecsys Anti-HBc IgM高特异性降低复测率 应用十：核酸检测技术在HBV中的应用 检测检测HBVDNAHBVDNA是判断乙肝病毒是判断乙肝病毒 有无复制的有无复制的“金标准金标准” 乙肝乙肝“二对半二对半”或或“乙肝六项乙肝六项”已能反映乙肝病毒有无复制、有无传染性，已能反映乙肝病毒有无复制、有无传染性， 为何还要检测为何还要检测HBVDNAHBVDNA呢呢 ? ? 1 1、“小三阳小三阳”，乙肝病毒进入非复制状态，传染性消失或很低，病情趋于，乙肝病毒进入非复制状态，传染性消失或很低，病情趋于 稳定。但实际情况是有时病人的转氨酶仍稳定。但实际情况是有时病人的转氨酶仍 然反复波动，甚至出现黄疽，经检然反复波动，甚至出现黄疽，经检 测测HBVDNAHBVDNA阳性，可以肯阳性，可以肯 定，病毒仍复制活跃、病情不稳定与乙肝病毒活跃有定，病毒仍复制活跃、病情不稳定与乙肝病毒活跃有 关。关。“小三阳小三阳”乙肝因其乙肝因其HBeHBe Ag Ag阴性，被医生称为阴性，被医生称为“HBeAgHBeAg阴性肝炎阴性肝炎”，也称，也称 “异型乙肝炎异型乙肝炎”。对此型乙肝不能掉以轻心，病情可能更重。对此型乙肝不能掉以轻心，病情可能更重。 2 2、在检测病人、在检测病人“二对半二对半”时，仅发现其中时，仅发现其中1 1项阳性，如项阳性，如HBsAgHBsAg阳性或单一的阳性或单一的 抗抗 HBcHBc阳性阳性，这并不能说明病人体内的病毒有无复制，必，这并不能说明病人体内的病毒有无复制，必需检测需检测HBVDNAHBVDNA， 一旦阳性一旦阳性 、就可肯定仍有病毒复制、也有传染性。、就可肯定仍有病毒复制、也有传染性。 应用十：核酸检测技术在HBV中的应用 应用十：核酸检测技术在HBV中的应用 3 3、有一些肝炎病人的、有一些肝炎病人的“二对半二对半”5 5项全部阴性，甚至甲、丙、丁、戊型项全部阴性，甚至甲、丙、丁、戊型肝炎病毒肝炎病毒 标志物标志物也是也是阴性阴性，但病人的转氨酶却很高，有黄疽，肝功能损伤明显，通过测，但病人的转氨酶却很高，有黄疽，肝功能损伤明显，通过测 HBVDNAHBVDNA后，可能发现为阳性，就此可断定这种肝炎叫后，可能发现为阳性，就此可断定这种肝炎叫“慢性隐匿性慢性隐匿性 乙肝乙肝”，在，在 不明原因的肝炎中，此类型肝炎约占不明原因的肝炎中，此类型肝炎约占3030一一6060。 4 4、有的乙肝病人竟被检测到抗一、有的乙肝病人竟被检测到抗一HBsHBs，这是保护性抗体，它的阳性说明感染结，这是保护性抗体，它的阳性说明感染结 束，但为什么病人的病情依旧，并无好转迹象束，但为什么病人的病情依旧，并无好转迹象? ?如如HBVDNAHBVDNA阳性，问题又解决了，阳性，问题又解决了， 这这 叫叫“抗抗HBsHBs阳性乙肝阳性乙肝”，也是病毒变异的结果。，也是病毒变异的结果。 敏感性高,特异性强 指示病毒复制 可用于窗口期的检查 核酸定量动态检测可用于疗效观察 应用十：核酸检测技术在HBV中的应用 核酸检测的优越性 准确 快速 全能 灵敏 通量 自动 LightCycler 480LightCycler 2.0 罗氏肝炎检测 令诊断及监测结果具有高度安全性 Back Up HBsAg / Anti-HBs同时出现的探讨 这个发现从上个世纪70年代就有相关研究在不停的探讨。 最早检测肝炎血清学标记物使用RIA技术， 这种技术较ELISA要敏感些。 进入80年代，更多的客户使用ELISA方法,检出几率少些。 90年代后， 随着新的技术的出现，研究和探讨产生机制和意义一直在进行。 v 病人处于HBV感染的恢复期，病 人体内存在HBsAg-Anti-HBs的免 疫复合物 v 两种HBV亚型感染，一种亚型已 经产生抗体，另外一种还没有 （HBsAg Ad/ Anti-HBs Ay) v 存在HBV的突变,常见于： 1、 新生儿母婴感染 2、 肝移植的患者 v IFN治疗出现 HBsAb 血清转 换,因 S 基因变异,而未能清除 HBsAg； v 疫苗接种，有正常的 HBsAb 应答,感染决定族变异的免疫 逃避变异株 HBsAg / Anti-HBs同时出现的探讨 RIA ELISA Now Gastroenterology 1987；93：67580（RIA） Concurrence : 73 / 228 (32%) 主要结论： v在慢性活动性肝炎的患者中出现的比例要高于急性肝炎和稳定期以及携带者； v研究了30例具体情况。其中25例属于不同亚型感染；1例是存在免疫复合物； v分析和病毒复制和炎症有关