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制作人：刘康制作人：刘康 吕胜吕胜 微生物微生物PPTPPT课题制作课题制作 1 1 2 2 DNA的变性和复性 一）DNA的变性 二）DNA的复性 三）核酸分子杂交 3 3 变性(denaturation)和复性(renaturation) u 是双链核酸分子的两个重要物理特性。 u 是核酸研究中经常引用的术语。 u 双链DNA、RNA双链区，DNA: RNA杂种双 链(hybrid duplex)以及其它异源双链核酸分子 (heteroduplex) 都具有此性质。 4 4 一) DNA的变性 指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为 无规则线性结构的现象。 n本质：氢键和疏水键断裂 n部分的或全部的 n可逆的或非可逆的 n不涉及到其一级结构的改变 5 5 变性DNA 的理化及生物学性质 溶液粘度降低 溶液旋光性发生改变 增色效应或高色效应 DNA的增色反应 6 6 破坏双螺旋稳定性的因素 加热 极端的pH 甲醇 乙醇 尿素 甲酰胺 7 7 热变性使DNA分子双链解开所需温度 ( melting temperature) 很狭的温度范围内突发的跃变过程 熔解温度（Tm） 8 8 不同来源DNA间的Tm存在差别的原因 （A）DNA的均一性 DNA分子中碱基组成的均一性 待测样品DNA的组成是否均一 9 9 (B) DNA的(G+C)含量 (G+C)含量越高，即G-C碱 基对越多，Tm值越高。 Tm与(G+C)含量(X)百分数 的关系可用以下经验公式表示 (DNA溶于0.2mol/L NaCl中)： X%(G+C)=2.44(Tm69.3) DNA的Tm值与G-C含量的关系 1010 离子强度低，Tm值低，融点范围宽 离子强度增高，Tm值增高，融点范围变窄 DNA制剂不应保存在离子强度过低的溶液中，一般 保存在1mol/ NaCl溶液中较稳定。 （C）溶剂的性质 1111 二) DNA的复性 指变性DNA 在适当条件下，两条互补链全部或 部分恢复到天然双螺旋结构的现象。 是变性的一种逆转过程 经缓慢冷却即可复性，又称为“退火” 1212 热变性过程和两种冷却过程示意图 1313 影响因素 a）温度和时间 比Tm低25左右的温度是复性的最佳条件 越远离此温度，复性速度就越慢 复性时温度下降必须缓慢 降温时间太短及温差大不利于复性 1414 b）DNA浓度 复性速度与DNA浓度的平方成正比 1515 c）DNA顺序的复杂性 顺序越简单，配对越快。 DNA片段愈
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