翻白草降血糖作用的研究.pdf

湖北中医药大学学位论文原创性声明 本人声明：所呈交的学位论文是在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成 果除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖北中医学院或其他单位的学位或证书而使 用过的材料对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中作了明确的说明 本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担 。 学位论文作者橼e 弘 矶- 1 年3 - 月沙日 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解湖北中医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部份内容， 可以采用复印、缩印或其他手段保留学位论文；学校可以根据国家或湖北省有关部门 的规定送交学位论文。同意中国优秀博硕士论文全文数据库出版章程的内容。 ( 保密论文在解密后遵守此规定) 论文作者张l 渺。导臌：勿诌砌年，月小 目录 中文摘要i a b s t r a c t m 缩略词表 前言。l 翻白草降血糖作用的研究5 实验材料5 实验方法。：6 实验结果。8 讨论1 5 结论2 3 参考文献2 5 附录2 7 综述2 8 致 射3 1 中文摘要 目的：建立和比较实验性糖尿病小鼠的造模方法，研究翻白草对四氧嘧啶 诱导的糖尿病小鼠的降血糖作用，确定翻白草降血糖有效部位，初步探讨 其降血糖作用机制，为指导翻白草的临床应用提供基础。方法：分别采用 单次高剂量注射四氧嘧啶( 2 0 0 r a g k g 。1 ) 的方法和高脂饲料( 1 0 蛋黄，1 0 猪油，1 胆固醇，0 2 胆盐，7 8 8 基料) 加低剂量注射四氧嘧啶( 9 0 m g k g 。1 ) 的方法造模，并确定高脂饲料加低剂量注射四氧嘧啶为本实验 的造模方法，建立小鼠糖尿病模型。实验首先将翻白草经水提取制得总提 物，然后过滤、浓缩、冷冻干燥得总提物，将总提物再分别用1 0 0 、5 0 乙醇回流提取、过滤、浓缩、冷冻干燥制得组份1 ( 1 0 0 醇回流部位) 及 组份2 ( 5 0 , 醇回流部位) 和剩余的残渣部分，采用高脂饲料加腹腔注射 低剂量四氧嘧啶方法复制小鼠糖尿病模型，以小鼠胰腺、体重、等脏器系 数、空腹血糖( f b g ) 、肝糖原、血清游离脂肪酸( f f a ) 、总胆固醇( t c ) ， 甘油三酯( t g ) 为检测指标，按照试剂盒的规定，运用生化分析方法将翻白 草和其乙醇回流提取的三个组份进行降糖作用的研究，为进一步应用和开 发翻白草功能性药品、保健品提供理论依据。 糖尿病( d m ) 是一种常见的内分泌代谢疾病，由于胰岛素分泌不足相 引起的血糖、脂肪和蛋白质代谢的紊乱，其主要特点是表现出高血糖及糖 尿，典型症状是多尿、多饮、多食和消瘦。并且难以治愈，易诱发心、脑、 肾、视网膜及神经系统等疾病。随着人们生活方式的改变和老龄化进程的 加速，患病率在全球范围内都呈上升趋势，糖尿病己成为一个世界性卫生 保健问题。为了防治和控制糖尿病，研究和开发降糖药物已成为当今医药 工作者的一个重大课题。 翻白草【l 】( h e r b a p o t e n t i l l a e d i s c o l o r i s ) ，又名天青地白草，属蔷薇 科委陵菜属植物；其味甘、微苦，性平，无毒，入肝、胃、大肠经有清热 润燥、凉血解毒、止血消肿、止痢之功效【2 1 ：多用于治疗痢疾、疟疾、痈 肿、各种出血。然而民间偏方常用于治疗糖尿病，效果很好，近几年已有 少量研究和临床报道【3 1 ，证实翻白草有较好的降血糖作用，但关于翻白 草对糖尿病的作用机制尚未见报道。本实验拟定翻白草作为研究对象来探 讨其总提物及乙醇回流后的组分i 及组份2 和剩余的残渣部分的降血糖作 用。实验结果如下 结果： i 实验证明，高脂饲料加低剂量注射四氧嘧啶的造模方法优于单次高 剂量腹腔注射四氧嘧啶的方法。 2 翻白草能使糖尿病小鼠精神好转，活动增多，体重增加，改善“多 尿、多饮、多食的症状，改善胰腺、脾等的脏器系数。 3 翻白草能显著降低糖尿病小鼠空腹血糖值，改善糖耐量，增加葡萄 糖在肝组织中的异生。其中，组份2 即5o 乙醇回流部位的作用最强。 4 翻白草能显著降低糖尿病小鼠血清游离脂肪酸值、血清总胆固醇 ( t c ) 和甘油三酯( t g ) 含量，缓解脂代谢异常。 5 翻白草降血糖的最有效部位为组份2 即5 0 乙醇回流部位，其降血 糖的原理可能是通过作用于胃肠道，调节糖代谢、促进肝糖原合成、减少 肝糖原分解而发挥作用。 结论：翻白草能显著改善糖尿病小鼠糖代谢和脂代谢异常，减轻糖毒 性和脂毒性，防治糖尿病及其发症的发生与发展，确定了翻白草降血糖活 性的最佳部位，进一步阐明了翻白草降血糖活性部位与降血糖活性之间的 联系，为在临床上用中草药防治糖尿病开辟了一条新的思路，丰富了传统 得中医理论依据，但其确切的有效成分及作用机制还需进一步研究。 关键词：翻白草；糖尿病；降血糖；糖耐量 b s t m c t t h e h y p o g l y c e m i c e f f e c to fd i s c o l o r c i n q u e f o i l h e r b o n a l l o x a n i n d u c e dd i a b e t i cm o u s e s p e c i a l i t y ：p h a r m a c e u t i c a lc h e m i s t r y a u t h o r ：z h o uz h i w e n t u t o r ：p r o f f a n g n i a n b a i o b j e c t i v e s ：t od e v e l o pam e t h o df o re st a b li s h m e n to fd i a b e ti cm o u s e m o d e la n di n v e s t i g a t et h ee f f e c t so fv i s c o l o rc i n q u e f o i lh e r b e x t r a c to nt h el e v e l so fs u g a r ，t c ，t g ，s o d ，m d aa n dn e f ai nb l o o d o fa 11 0 x a n i n d u c e dd i a b e ti cm i c e m e t h o d s ：m i c ew a si n d u c e dt ob e d i a b e t i cb yt w om e t h o d s ：as i n g l eh i g hd o s ei n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o no f2 0 0m g k gb o d yw e i g h t ( h v oo fa ll o x a na n d h i g h f a t d i e tf o ram o n t hf o ll o w e db ysi n g l ei n t r a p e r it o n e a li n j e c ti o no f 9 0 m g k gb o d yw e i g h t ( b w ) o f a ll o x a n h i g h f a td i e ta n d a l l o x a n i n d u c e dd i a b e t i cm i c ew e r eu s e di nt h i ss t u d ya n dt r e a t e d w it he x t r a c to fd is c o l o rc i n q u e f o i1h e r bb yi n t r a g a st ri e a d m i n i s t r a t i o n t h ee f f e c t so fd is c o l o rc i n q u e f o i lh e r bo nt h e g l u c o s et o l e r a n c ea n dt h e l e v e l so fs e r u mg l u c o s e ，t c 、t g 、s o d 、 m d aa n dn e f aw e r ei n v e s t i g a t e d i nt h es t u d y ，t h et o t a ln is c o l o r c i n q u e f o i lh e r bd e c o c ti o nw a se x t r a c t e dw it hb e i1i n gw a t e r ，a n dt h e e x t r a c to fv i s c o l o rc i n q u e f o i lh e r bd e c o c t i o nw a sr o t a r ye v a p o r a t e d u n d e rr e d u c e dp r e s s u r ea tr o o mt e m p e r a t u r ef o ll o w e db yd r y i n gi n a f r e e z e - d r y e r t h r e ef r a c ti o n s o fd r ye x t r a c to fd is c o l o r c i n q u e f o i 1h e r bd e c o c ti o nw e r eg e n e r a t e db yc o o li n gfi1tr a ti o n ( f r a c ti o ni ) ，f o ll o w i n ge x t r a c ti o n w i t h10 0 、5 0 a l c o h o l ( f r a c t i o ni i ) ，a n dr e m a i n d e ra f t e re x t r a c t i o n so f1 0 0 a n d5 0 m e t h a n o l ( f r a c t i o ni i i ) t h e ni n v e s t i g a t et h et o t a le x t r a c to f i i i d is c o l o rc i n q u e f o i1h e r bd e c o c ti o na n dit st h r e ef r a c t i o n so nb o d y w e i g h t ，s p l e e na n do t h e ro r g a n sc o e f f i c i e n t ，f a s t i n gb l o o dg l u c o s e ( f b g ) ，1i v e rg l y c o g e n ，s e r u m f r e ef a t t ya c i d s ( f f a ) ，t o t a l c h o l e s t e r o l ( t c ) ，t r i g l y c e r i d e ( t g ) w e r em e a s u r e d i no r d e rt o i n v e s t i g a t et h eb l o o dg l u c o s ea n dl i p i dm e t a b o l i s m ，d e t e r m i n et h e m o ste f f e c ti v ef r a c ti o no f d is c o l o rc i n q u e f o i1h e r ba n dp r o v i d ea t h e o r e t i c a lb a s isf o rt h ef u r t h e ra p p l i c a t i o na n dd e v e l o p m e n to f v is c o l o rc i n q u e f o iih e r bw em a k et h isr e s e a r c h d i a b e t e sm e liit u s ( d m ) ，o n eo ft h em o s tc o m m o nc h r o n i ca n d s y s t e m i cd is e a s ei nt h ew o r l d ，isc h a r a c t e r i z e db yh y p e r g l y c e m i a r e s u lti n gf r o md e f e c t si ni n s u li ns e c r e ti o n ，i n s u li na c ti o no rb o t h i ti sc l a s s i f i e di n t ot w ot y p e s ：t y p e1 ( i n s u l i n d e p e n d e n t ) a n dt y p e 2 ( i n s u li n i n d e p e n d e n t ) t y p e1d i a b e t e si sc a u s e db ya na b s o l u t e d e f i c i e n c yo fi n s u l i ns e c r e t i o nf r o m 一p a n c r e a t i ce e l l s i nt h e o t h e r ，t y p e2d i a b e t e si sc l o s e l ya s s o c i a t e dw i t ho b e s i t ya n di s c h a r a c t e r i z e db yac o m b i n a t i o no fr e s is t a n c et oi n s u l i na c t i o na n d a ni n a d e q u at ec o m p e n s at o r yi n s u li n s e c r e t o r yr e s p o n s e r e s u l t s ： 1t h e r ea r et w ow a y st om a k et h em i c et ob ed i a b e ti ct h a th i g h - f a t d i e tf o ram o n t hf o l l o w e db ys i n g l ei n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o no f 9 0m g k gb o d yw e i g h t ( b w ) o fa ll o x a ni s s u p e r i o rt oasi n g l eh i g h d o s ei n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o no f2 0 0m g k gb o d yw e i g h t ( b w ) o f a ll o x a na n dw ec h o o s et h ef o r m e ro n e 2d i s c o l o rc i n q u e f o i1h e r bm a k eag r a d u a li m p r o v e m e n ti nt h es p i r i t o fd i a b e t i cm i c e ，i n c r e a s e da c t i v i t y ，w e i g h tg a i n ，i m p r o v e m e n t s y m p t o m s ，i m p r o v e m e n to ft h eo r g a n sf a c t o r 3d is c o l o rc i n q u e f o i1h e r bl o w e rd i a b e ti cm i c eb l o o d g l u c o s e si g n i f i c a n tl y ， i m p r o v eg l u c o s e t o l e r a n c e ， i n c r e a s e h e p a ti c g l y c o g e nc o n t e n t t h ef u n c t i o no ft h ef r a c t i o n1 1w a st h es t r o n g e s t 3d i s c o l o rc i n q u e f o i lh e r br e d u c ed i a b e t i cm i c es e r u mf r e ef a t t y a c i ds i g n i f i c a n t l y ，t o t a lc h o l e s t e r o la n dt r i g l y c e r i d el e v e lsa n d a1l e v i a t et h ea b n o r m a1 1i p i dm e t a b o lis m 4f r a c t i o ni i i sm o s te f f e c t i v e i tisp o s s i b l et h a t t h r o u g ht h e r o l eo ft h e g a st r o i n t e sti n a l t r a c tt or e g u l a t eb l o o dg l u c o s e m e t a b o lis m ，p r o m o t eii v e rgl y c o g e ns y n t h e sisa n di n h i b itt h e1i v e r g 1y c o g e nb r e a k d o w n c o n c l u s i o n s ：i nc o n e l u s i o n ，t h ep r e s e n ts t u d yf o u n dt h a td is c o l o r c i n q u e f o i 1h e r be x t r a c tp r e v e n t e dh y p e r 9 1 y c e m i aa n dd y s1i p i d e m i a i nd i a b e t i cm i c e g e n ee x p r e s s i o na n a l y s i sr e v e a l e dt h a td is c o l o r c i n q u e f o i 1h e r be x t r a c tt r e a t m e n ta f f e c t e de x p r e s si o nl e v e lo ft h e g e n e sr e l a t e dt o1i p i dm e t a b o li s ma n dg l y c o m e t a b o li s m t h e r e f o r e ， d is c o l o rc i n q u e f o i1h e r bs h o u l db ec o n si d e r e da s ac a n d i d a t ef o r f u t u r est u d i e so nd i a b e t e s i na d d iti o n ，f u r t h e rc o m p r e h e n si v e p h a r m a c o l o g i ci n v e s t i g a t i o n s ，i n c l u d i n ge x p e r i m e n t a ll o n g t e r m s t u d i e s ，s h o u l db ec a r r l e do u to nd is c o l o rc i n q u e f o i 1h e r bo ri t s b i o a c ti v ec o m p o u n d 、 k e y w o r d s ：v is c o l o rc i n q u e f o iih e r b ；d i a b e t e s ；b l o o dg l u c o s e ； g 1u c o s et o 】e r a n c e v a l x d m t l d m t 2 d m a u c f b g n c f e a 矾s a l l o x a n 缩略词表 d i a b e t e sm e l l i t u s i n t r a p e r i t o n e a l 锣p e1d i a b e t e sm e l l i t u s 锣p e2d i a b e t e sm e l l i t u s a r e au n d e r t h e eu v r e f a s t i n gb l o o dg l u c o s e n o r m a lc o n t r o l f r e ef a t t ya c i d s i n s u l i nr e s i s t a n c e i n s u l i n o g t t o r a lg l u c o s et o l e r a n c et e s t t g t o t a lc h o l e s t e r o l t r i g l y c e r i d e s c a m p c y e l i e a d e n o s i n e m o n o p h o s p h a t e o d o p t i c a ld e n s i t y v i 四氧嘧啶 糖尿病 腹腔注射 1 型耱尿病 2 型糖尿病 曲线下面积 空腹血耱 正常对照 游离脂肪酸 胰岛素抵抗 胰岛素 口服葡萄糖耐量试验 总胆固醇 甘油三酯 环磷酸腺酐 吸光度 - l - j 一 月l j吾 糖尿病( d m ) 是由于体内胰岛素绝对或相对不足而引起的以血糖、脂 肪、蛋白质和继发的维生素、水、电解质代谢紊乱，以及氧化平衡破坏的 一种全身慢性代谢性疾病，需要终身服药。临床上一般将糖尿病分为四类， 其中以1 型( 胰岛素依赖型) 和2 型( 非胰岛素依赖型) 糖尿病最为多见，还 有3 型特异型糖尿病及4 型妊娠糖尿病。其特征主要表现为高血糖和糖尿， 而且还会引起心脑血管如高血压、高血脂、眼病变等一系列的并发症，严 重时甚至可能造成残废或死亡。 目前糖尿病患者的人数已经日趋增多，中国或将成为糖尿病发病的 “重灾区力。同时还出现了发病年龄年轻化，并发症出现较早，而且比较 复杂，死亡率提高等对人类构成极大威胁的新特点。糖尿病可累及眼、肾、 神经、心血管等全身多个器官和组织，造成全身多脏器和组织的慢性损伤， 引发一系列的并发症。糖尿病并发症是糖尿病患者致死的主要原因，而且 如今糖尿病的死亡率已经跃居到第三位，仅次于高血压和癌症。因此糖尿 病已经成为一个全球性的疾病，严重威胁着人类的身体健康，影响着人们 生活质量的提高。 从中医观点出发，消渴病的发病机制主要有以下四点，第一，五脏柔 弱，说的是脏腑较虚；第二，肥甘厚味，酿成内热；第三，五志过极，郁 而化火；第四，劳逸无节，要把握好度。糖尿病的主要症状表现为 “三 多一少力即多尿、多饮、多食和消瘦，与我国传统医学的“消渴病力论述 很一致。 8 t 在辨证施治方面，消渴病主要分为阴虚热盛、气阴两虚、阴阳两虚型 三种类型。阴虚热盛型是病程较轻的一种，发病周期一般为1 - 2 年，并发 症较少。治疗上当以滋阴清热、润肺生津为主。气阴两虚型病程加重，发 病周期为5 - 1 0 年，并发症较阴虚热盛型多而重，为糖尿病中期，治疗上 当以益气养阴、滋补肝肾为主。阴阳两虚型是最严重的一种，并发症不仅 湖北中医药大学2 0 1 1 届硕士学位论文 多而且很严重，属于糖尿病晚期，治疗上当以温肾补脾、和中益气为主 目前在糖尿病患者中，糖尿病中期即气阴两虚型所占比例是最高的，在治 疗上，应以补气养阴为主，再依据不同的兼杂证辅以活血化淤、滋补肝肾、 益气生津等方法。 糖尿病( d m ，d i a b e t e sm e l l i t u s ) 是一种多病因的代谢疾病，特点 是慢性高血糖，伴随因胰岛素( i n s u li n ) 分泌及作用缺陷引起的糖、脂 肪和蛋白质代谢紊乱。胰岛素抵抗( i r ) 是指机体对一定量的胰岛素的生物 学效应低于预计正常水平的现象，表现为胰岛素的敏感性和反应性降低。 2 型糖尿病患者多伴有高血压、肥胖、高血脂、冠心病等，而胰岛素抵抗 和代偿性高胰岛素血症是综合症的中心环节，因此，对2 型糖尿病患者注 意改善胰岛素抵抗，对糖尿病的治疗及减少糖尿病心血管病的死亡率具有 重要的临床意义。糖尿病的发生是以环境因素和遗传因素长期共同作用的 结果。因胰岛素分泌绝对或相对不足以及靶组织细胞对胰岛素敏感性降 低，引起糖、蛋白、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱。临床以高血糖 为主要标志，久病可引起多个系统损害。病情严重或应激时可发生急性代 谢紊乱如酮症酸中毒等。 目前糖尿病的发病机制仍不十分清楚。认为主要是胰岛d 细胞功能衰 竭和胰岛素分泌障碍及胰岛素抵抗。其发病原因也是综合性的，除遗传因 素和环境因素之外，还有社会经济的发展、生活压力的增大、不规律的饮 食习惯、体力劳动减轻、心理压力的增加以及肥胖病发病率的提高等都会 诱发糖尿病的发生。 现代医学认为糖尿病发生的本质是血糖的生成与消耗之间失去了正 常的动态平衡睁5 1 。糖原合成减少，分解加速，在酶的作用下，大量葡萄 糖一6 一磷酸转化为葡萄糖；葡萄糖转化为葡萄糖一6 一磷酸的作用减弱，葡萄 糖的利用减慢；糖原异生作用加强，即由非糖物质转化为葡萄糖的速度加 快，葡萄糖生成增多；糖酵解和三羧酸循环减弱；在肌肉及脂肪组织中， 葡萄糖进入细胞膜的速度减慢。所有这些作用的结果均导致葡萄糖的生成 增多，消耗减少，从而形成高血糖。 糖尿病主要表现为高血糖，高血脂，高胰岛素环境下细胞氧化损伤现 象严重【6 】，同时血浆中脂类水平显著升高，其中游离脂肪酸和甘油三酯 ( t g ) 的升高，被认为是导致胰岛素抵抗的重要原剐7 1 。胰岛素抵抗发 生后，只要胰腺能维持足够高的胰岛素分泌量来克服胰岛素抵抗，那么， 糖耐量将保持正常或只有轻度受损，一旦d 细胞功能开始衰竭，糖耐量将 迅速恶化，并发展为严重的糖尿病【8 】现代医学对于糖尿病的治疗除了注 射胰岛素以外，使用最广泛的将是一些口服降糖药：双胍类、胰岛素增敏 剂、胰岛素释放促进剂和0 【一葡萄糖苷酶抑制剂 9 1 。目前市场上开发的一 些糖尿病药物都只是控制血糖的升高，对根治糖尿病作用甚微。例如长期 使用胰岛素会导致机体胰岛素受体敏感性降低，产生胰岛素抵抗，不能有 效的控制血糖，反而会使病情更加严重。对于1 型糖尿病的治疗，研究方 向是开发给药途径方便、有效的胰岛素制剂及代用品。但目前注射胰岛素 依然是主要治疗方法。而对于2 型糖尿病的治疗，传统的磺酰脲类和双胍 类口服降糖药由于副作用和疗效的限制，根本无法阻止胰岛d 细胞的进一 步坏死，导致机体对胰岛素具有依赖性。所以，如今药学家将更多的注意 力转向具有降糖作用的天然活性产物上。因中药毒副作用小，分布量大等 优点，具有很大的开发潜力。努力探索和寻找治疗糖尿病的有效方法和药 物，已经成为一个全球性的急需解决的问题 1 0 q h 。 翻白草，又名天青地白草，属蔷薇科委陵菜属植物；其味甘、微苦， 性平，无毒，入肝、胃、大肠经，有清热润燥、凉血解毒、止血消肿、 止痢之功效：多用于治疗痢疾、疟疾、痈肿、各种出血。然民间偏方常用 于治疗糖尿病，效果甚好，近几年已有少量研究和临床报道证实翻白草有 较好的降血糖作用， 翻白草为蔷薇科植物翻白草p o t e n t i l l ad i s c o l o r 犀e 的带根全草。 全国各地均有分布，主产于河北、安徽等地。夏、秋二季采收，未开花前 连根挖取，除净泥土，晒干。生用。具有清热解毒，止血，止痢之功效。 其具有很高的营养、药用和保健价值。翻白草的食品、药品、保健品等制 品越来越受到人们的重视和青睐。 湖北中医药大学2 0 1 1 届硕士学位论文 翻白草的化学成分主要含有鞣质及黄酮类。本品全草煎剂对志贺氏痢 疾杆菌、福氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌和伤寒杆菌均有抑制作用。近来 实验研究表明，用大剂量翻白草灌胃给药7 天，对正常家兔有明显降血糖 作用。其机制是翻白草所含的黄酮类化合物中的主要成分槲皮素有抑制非 酶糖化作用，并通过抑制蛋白糖化来抑制醛糖还原酶活性。本品在临床多 用于细菌性痢疾和阿米巴痢疾以及急性肠炎等。据报道，还可用于其他疾 病，如：有用鲜翻白草捣烂取汁含咽可治疗急性喉炎、扁桃体炎、口腔炎； 有用翻白草15 9 、地丁1 2 9 ，水煎服，可治疗慢性鼻炎；也有以翻白草( 连 根) 4 5 9 、益母草1 0 9 ，水煎加红糖、黄酒，用治痛经( 中华本草精选本1 9 9 8 ： 7 8 2 ) ；另有用翻白草与黄酒红糖同用，治疗颈淋巴结核11 例，8 例颈淋 巴结周围炎症消退，肿块消失，2 例症状减轻( 中药大辞典缩印本1 9 8 6 ： 2 70 6 ) ；近年有报道，以翻白草为主制成合剂用于治疗2 型糖尿病，疗 效良好( 山东中医杂志2 0 0 1 ，5 ：5 8 8 ) 。此外，翻白草尚可用于急性气管 炎，急性肺炎以及肺脓疡之咳吐脓血，急性乳腺炎，功能性子宫出血，月 经过多，创伤出血以及血友病等。 由于翻白草的降血糖作用甚好，其研究在国内外也必将会受到越来越 多的关注。翻白草目前的研究主要集中在黄酮类成分上：认为其为降血糖 的主要功能活性成分，但是由于翻白草的降血糖作用机制还没有完全弄清 楚，因此不排除翻白草中还存在其它降血糖作用活性成分，这有待于进一 步的研究与实验。 本试验以健康昆明小鼠为对象，实验中首先通过高脂饮食诱发出高胰 岛素血症和胰岛素抵抗，再通过注射低剂量的四氧嘧啶损伤胰腺功能，导 致胰腺代偿性分泌胰岛素的功能障碍，最后诱发出高血糖症。应用翻白草 总提物及其不同组份进行干预治疗，同时以盐酸二甲双胍作为阳性药物对 照，研究翻白草及其醇回流部位的降血糖作用，同时运用试剂盒测定t c 、 t g 、s o d 、g l u 等生化指标，确定最终降血糖的有效部位。为临床运用翻 白草提供更科学的依据，为寻找和开发新的降糖药开辟新的途径。 翻白草降血糖的作用研究 1 实验材料 1 1 动物 昆明小鼠，s p f 级，体重2 0 2 5 9 ，雄性，武汉生物制品研究所提供， 合格证号：s c x k ( 鄂) 2 0 1 0 - 0 0 0 4 。自由饮水和摄食。 1 2 药材与试剂 翻白草：由成宁康进药业有限公司提供，并经生药学鉴定为海翻白 草( d i s c o l o rc i n q u e f o i lh e r b ) 。药品及试剂：四氧嘧啶：美国s i g m a 公 司提供；盐酸二甲双胍片：由北京中惠药业有限公司提供，批号：2 0 0 9 0 6 1 3 ； 总胆固醇试剂盒( t c ) 由中生北控生物科技有限公司提供；甘油三酯( t g ) 、 葡萄糖( g l i j ) 试剂盒由上海名典生物工程有限公司提供；丙二醛( m d a ) 、 超氧化物歧化酶( s o d ) 、游离脂肪酸( b l e f a ) 试剂盒由南京建成生物工 程研究所提供；仪器：长沙湘平e s - 5 0 0 h a 动物称重天平；r a y t or t 一9 6 0 0 半自动生化分析仪；菲恰尔t g c - 1 6 b 离心机；7 5 6 p 紫外可见分光光度计； 2 实验方法 2 1 翻白草总提物及其不同组份的制备 翻白草提取物的制备 3k g 翻白草药材用8 倍量的水煎煮2 小时，过 滤，药渣用4 倍量水再次煎煮2 小时，过滤。合并提取液，减压浓缩，浓缩 液进行冷冻干燥，得粉末备用此即为翻白草总提物。将翻白草总提取物粉 末用4 倍量1 0 0 乙醇回流提取2 小时，过滤，滤渣用同法回流提取2 次，过 滤，合并滤液。滤渣再用4 倍量5 0 0 的乙醇回流提取2 小时，过滤，合并滤 液；分别将1 0 0 与5 0 0 7 , 醇回流后的滤液减压浓缩，浓缩液进行冷冻干燥， 得粉末，分别为组分1 ( 1 0 0 醇提部位) 和组分2 ( 5 0 醇提部位) ，将所得 粉末分别真空包装于保鲜袋中，临用时取出。 2 2 翻白草及其不同组分的制备流程图 根据资料和实验室条件，设计翻白草及其不同组份的简单的制备工艺 流程及提取率如图1 所示。 湖北中医药大学2 0 1 1 届硕士学位论文 翻白草( 3 k g ) 土水煮( 趁热过滤) 滤液 上 滤液减压浓缩、冷冻干燥i 翻白草总提物( 提取率1 2 ) 抄醐。滤萎 粉末组份1 ”一一 1 0 0 l 醇回流 o 乙醇回流 浓缩，干燥 1r l 降血糖动物实验l 1r l 降血糖动物实验 图1 翻白草及其不同组分的制备流程图 t h eg r a p ho ft h ep r e p a r a tio no fp d ba n ddif f e r e n tc o c q ) o n e n t so fflo w 2 3 糖尿病小鼠模型的建立 造模方法单次高剂量四氧嘧啶造成小鼠高血糖模型：雄性昆明小鼠 2 0 只，适应性喂养1 周后，根据文献所述【1 2 】，采用一次性高剂量腹腔注 射四氧嘧啶生理盐水注射液( 2 0 0m g k g 。) ，注射后1 周，小鼠尾静脉 取血测定血糖值，血糖值大于1 1 1m m o l l - 的小鼠为造模成功。 高脂饲料加低剂量四氧嘧啶造成小鼠高血糖模型 1 3 - 1 4 1 ：雄性昆明小鼠 2o 只，适应性喂养1 周后，喂以高脂饲料一个月，继以低剂量的四氧嘧 啶生理盐水注射液( 9 0m g k g q ) 腹腔注射，1 周后尾静脉取血测定小鼠 的血糖，血糖值大于1 1 1m m o l l - i 的小鼠为糖尿病造模成功。 高脂饲料加低剂量注射四氧嘧啶确定为本实验的造模方法取健康雄 性昆明小鼠7 0 只，体重2 0 - 2 5 9 。实验前于实验室预饲养1 周。实验时将小 鼠随机分成7 组，每组1 0 只，分别为：正常对照组、高血糖模型组、阳性 对照组和总提物组、组分1 、组分2 及残渣组。除正常组外，其余6 组均给 予高脂饲料，喂养4 周后，给予四氧嘧啶( 9 0 r a g k g q ) 生理盐水注射液， 5 天后尾部取血，确定已形成高血糖模型后开始给药，将血糖值大于 1 1 1 m m o l l 定为糖尿病模型成功动物。正常对照组和高脂模型组给予生理 盐水灌胃，阳性对照组以二甲双胍( 5 0 m g k g 一d 。1 ) 灌胃给药，