毛细管电泳分析检测氨基酸.ppt

LOGO 毛细管电泳分析检测 氨基酸 LOGO 1 Contents 2 概述 原理 展望5 4 文献综述 3影响因素 LOGO 一 概述 毛细管电泳,又称高效毛细管电泳,是近年发展 起来的一种新型分析分离技术,它综合了高效液相色 谱和凝胶电泳共同优点,具有快速、分辩率高、重复 性好的特点,已广泛用于氨基酸、多肤、蛋白质、核 酸等物质的分析。对电中性物质,经过特殊处理也可 进行分析。 LOGO 一 概述 LOGO 二 原理 毛细管电泳统指以高压电场为驱动力，以毛细 管为分离通道，依据试样中各组分间淌度(指单位 场强下离子的平均电泳速度)和分配行为上的差异 而实现分离的一类分离技术。 LOGO 二 原理 在电解质溶液中，带电粒子在电场作用下， 以不同的速度向其所带电荷相反方向迁移的现象 叫电泳。而此时双电层中的溶剂化阳离子引起流 体整体向负极方向移动的现象叫电渗。粒子在电 解质中的迁移速度等于电泳流和电渗流两种速度 的矢量和。阳离子的移动方向和电渗流一致，最 先流出；中性粒子的电泳流速度为零，其迁移速 度等于电渗流速度；阴离子的移动方向与电渗流 相反，但因电渗流速度一般都大于电泳速度，它 将在中性粒子之后流出，从而实现分离。 LOGO 三 影响因素 毛细管柱：毛细管柱是的核心部件,目前毛细管柱 直径稳定在25-75m之间, 以利于最大的降热和对 吸附的控制。其材料可为聚四氟乙烯、玻璃和弹 性石英, 最常用的为石英。玻璃和石英的硅醇基 是构成吸附及产生电渗流的主要原因。因此通常 加载偶联剂（-环糊精）与硅醇基进行某种化学 反应来屏蔽管壁吸附活性而达到改性性。 电压：较低时, 峰展宽较严重,电压太高时基线噪 音变大。 温度：电流通过毛细管产生的热将引起温度变化, 使各项物理参数改变, 造成样品迁移时间、峰面 积的偏差和分离效率下降。 LOGO 三 影响因素 添加剂：通过可逆或不可逆吸附, 添加剂可影响毛 细管管壁上的电荷数量及其分布, 还可能改变电 荷的性质, 因此能用于控制电渗。 进样时间：进样时间较短时,峰电流响应太小,其 进样量的精度也随之减小,峰高的重现性得不到保 证；进样时间较长时,峰电流会加大,但会使样品 区带加宽, 从而不能正确反映样品的真实浓度,同 时峰形展宽。 LOGO 三 影响因素 电泳缓冲液：pH通过影响分离组分的荷电性质 而影响其在电场中的有效迁移速度。因此缓冲液 的pH及浓度对分离度的影响十分突出, 必须对它 们进行选择并优化。一般地, 缓冲液必须比被分 析物质的等电点高或低一个pH单位, 而且尽可能 采用酸性缓冲液。为保持pH在相当长时间稳定 一般选择在所控pH附近具有较大缓冲容量的缓 冲溶液。通常缓冲液的缓冲容量随浓度增加而增 大, 但浓度增加溶质在毛细管内迁移速度下降, 迁 移时间延长。同时, 考虑到焦耳热的限制, 故不能 选用较高浓度的缓冲液。 LOGO 三 影响因素 王跃国等用毛细管电泳法对20种常见氨基酸 的2, 4-二硝基氟苯(DNFB)衍生物进行了分离研究, 分析缓冲液浓度、pH值、有机溶剂及表面活性剂 对分离的影响。以浓度为30 mmol/L、pH值9. 9的 硼砂溶液含15%异丙醇为运行缓冲液,分离氨基酸 DNFB衍生物效果最佳,分离时间30 min, 17种氨基 酸除亮氨酸、异亮氨酸外均达到基线分离。 朱英等利用自制的毛细管电泳系统, 以弹性石 英毛细管为研究对象, 从实验上考察了缓冲液的 pH 值、浓度、种类、添加剂、涂层、毛细管壁洗 涤方法、分离管管径等多种因素对径向电场控制 电渗能力的影响。 LOGO 四 文献综述 明永飞等利用毛细管区带电泳法对衍生氨 基酸进行分离,考察了毛细管区带电泳法进行氨 基酸分离的关键条件,确定了最佳分离条件,实 现了12种氨基酸的快速基线分离。 范海峰等采用30mmol/L硼砂-2.0mmol/L磷 酸氢二钾作为缓冲溶液, 体积分数为3%的无水甲 醇作为有机改性剂,0.5mmo/L十六烷基三甲基溴 化铵(CTAB)为电渗流改性剂, pH为9.5时,4min内 半胱氨酸、甘氨酸、谷氨酸、天冬酰胺和天冬 氨酸等5种未经衍生的氨基酸均获得了基线分离 。 LOGO 四 文献综述 刘文锋等利用自己研制的毛细管电泳电导检 测装置, 在不用衍生的情况下, 对水解毛发得到 的所有氨基酸进行快速, 简便的定量测定。 孔红星等利用高效毛细管区带电泳直接紫外检 测法对8种非衍生化氨基酸进行了分离分析条件的 研究。在分离电压20kv，在浓度为50mmol/L,pH10 的硼砂缓冲溶液中加入o.5mmol/L 的十六烷基三甲 基溴化铵作为电渗流改性剂，4min 内实现了8种氨 基酸有效分离。 LOGO 五 展望 毛细管电泳由于其自身高效、高速、高灵敏 度、高自动化以及样品和试剂耗用量少等特点,为 现代生物医药学提供了强有力的分离分析手段,已 经在手性药物、药物制剂、中草药等方面的应用 中得到了蓬勃的发展。 毛细管电泳是一门发展中的分析化学前沿学