《x小体的制备》PPT课件.ppt

人类X小体的检测 实验目的 n掌握人类X小体玻片标本的制作方法。 n观察识别X小体形态特征及所在部位。 实验原理 n发现： 1949年，加拿大学者Barr在研究猫的神经元 细胞时，发现雌猫神经元细胞核边缘有一个 染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没有这种 结构。进一步研究发现，所有雌性哺乳动物 细胞中都有这种小体，能显示性别差异。 实验原理 n本质： 哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外， 其余的X染色体发生异固缩，功能上处于失活 状态，将其称为X小体（X染色质，性染色质 ，巴氏小体 Barr body），通常位于间期细 胞核的核膜边缘，染色深而致密。 实验原理 n人类正常的男女体细胞中，22对常染色体并 无区别，但其性染色体分别为XY和XX。女性 的两条X染色体中，有一条在间期呈现浓缩状 态，可由适当的染料显示。正常女性口腔黏 膜上皮细胞中X小体阳性率10-30%。 实验原理 n数目： X小体的数目= X染色体数目1 正常女性细胞：2条X染色体，X小体的数目为1 正常男性细胞：1条X染色体，X小体的数目为0 。 有三个X染色体者X小体的数目为2 实验原理 n莱昂假说（Lyon hypothesis ） n正常雌性哺乳动物体细胞中的两个X染色体之一 在遗传性状表达上是失活的。 nX染色体的失活是随机但恒定的。失活的X染色体 可来源于雌性亲本，也可来源于雄性亲本。 n失活现象发生在胚胎发育的早期，一旦出现则从 这一细胞分裂增殖而成的体细胞克隆中失活的都 是同一来源的染色体。 实验原理 n 应用： 1. 鉴定个体的性别 胎儿细胞性染色体检查：羊水细胞，绒毛细胞，用于预 防性染色体遗传性疾病的发生，优生。 2. 诊断性染色体异常综合征 克氏（Klinefelters）综合征，先天性睾丸发育不全综 合征，患者为男性但有一个巴氏小体，核型是47，XXY 。 特纳氏（Turners）综合征，先天性卵巢发育不全综合 征，患者为女性但却无巴氏小体，核型是45，XO 。 超雌：XXX, XXXY有2个巴氏小体等。 操作步骤 l取材、涂片： （1）吸取5ml生理盐水于离心管中。 （2）用牙签刮取女性口腔上皮细胞后置入离心管的生理盐 水中洗脱下来，轻轻摇匀，1500r/min离心8min，弃上清。 （3）加入预热的低渗液5ml，37下低渗10 min，再加入 新鲜配制的Carnoy固定液1ml，混匀，预固定2min， 1500r/min离心6min，弃上清。 （4）加入固定液5ml，吹打混匀，室温下固定15min， 1500r/min离心8min，弃上清。 （5）加入固定液0.5ml，制成细胞悬液。 （6）将2-3滴细胞悬液滴至预冷的载玻片上，空气风干。 操作步骤 2染色： （1） 玻片放入HCl缸中，室温下水解10min后取出，自 来水细水漂洗数秒钟，洗去多余HCl。 （2） 吸干玻片上水珠，在甲苯胺兰染液中染色3min后 取出，自来水细水漂洗数秒钟，空气风干。 3镜检：气干后即可镜检。 注意事项 n用洁净的牙签钝端从口腔两侧颊部刮取粘膜，为防止后 面的离心损耗，应尽量多取一些。 n弃上清时，用吸管吸取上清，弃去，接近下方沉淀时， 应小心吸取。 n加入低渗液后，轻轻混匀，不能太用力，以防核膜破裂 。 n固定液使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果。 n载玻片于临用前在-20度冰箱中取出，现用现取，以防温 度上升。 n加热时应距离外焰一段距离（2-3cm），且来回摆动，以 防过热引起断裂。 实验结果 n低倍镜：选择轮廓清楚，不重叠，染色清晰 ，核膜完整，核质中颗粒均匀的细胞，观察 到细胞核后转到高倍镜下观察。 n高倍镜：观察X小体，大小约为1m，扁平状 、椭圆形或三角形，浓染，紧贴于细胞核核 膜边缘。 X小体的形状 X小体的阳性率 n正常女性口腔粘膜上皮细胞中X小体阳性率约 10%30%； n男性偶尔可见，阳性率2