食品微生物检验室技术操作要求.ppt

三、食品微生物检验室三、食品微生物检验室 技术操作要求技术操作要求 （一）无菌操作要求 （二）无菌室使用要求 （三）消毒灭菌要求 （一）无菌操作要求：（一）无菌操作要求： 食品微生物检验室工作人员， 必须有严格的无菌观念，许多试验 要求在无菌条件下进行，主要原因 ： 1 1 防止试验操作中人为污染样品；防止试验操作中人为污染样品； 2 2 保证工作人员安全，防止检出保证工作人员安全，防止检出 的致病菌由于操作不当造成个人的致病菌由于操作不当造成个人 污染。污染。 1.接种时必须穿工作服、戴工作帽。 2.进行接种食品样品时，必须穿专业工作服、 帽及拖鞋，它们应放在无菌室缓处间，工作 前经紫外线消毒后使用。应在进无菌室前用 肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净。 3.进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须 经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不 能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用 95%酒精点燃烧灼3次后使用。 4.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及 外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时 ，吸管尖不能触及试管或平皿边。 5.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作 ，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出 后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 6.接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧 灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与 杆的连接处。 7.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮 头吸取，不得直接用口吸。 （二）无菌室使用要求（二）无菌室使用要求 无菌室通向外面的窗户应为双层 玻璃，并要密封，不得随意打开， 并设有与无菌间大小相应的缓冲间 及推拉门，另设有小窗，以备进入 无菌间后传递物品。 无菌室内应保持清洁，工作后用 2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作 台面，不得存放与实验无关的物品 。 无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外 线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需 30w紫外灯，距离在1.0m处，照射时间 不少于30min，使用紫外灯，应注意不 得直接在紫外线下操作，以免引起损伤 ，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦 ，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线 穿透的影响。 处理和接种食品标本时，进入无菌 室操作，不得随意出入，如需要传 递物品，可通过小窗传递。 在无菌室内如需要安装空调时，则 应有过滤装置。 (三)消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金 属用具及培养基、被污染和接种的培 养物等，必须经灭菌后方能使用。 1干热和湿热高压蒸汽锅灭菌 (1)灭菌前准备 (2)装放干热灭菌器 (3)设备检查 (4)干热灭菌法 (5)手提式高压锅或立式压力蒸汽 灭菌器的使用步骤 (6)卧式压力锅蒸汽灭菌器的使用 步骤 2间歇灭菌方法 (1)灭菌方法 (2)血清凝固器使用方法 (3)煮沸消毒 (4)灭菌后处理 (4)干热灭菌法 此法适应于在干热情况下，不损 坏、不变质、不蒸发的物品，较常用 于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等 的灭菌。 器械、器皿应清洗后再干烤，以 防附着在表面的污物碳化。 灭菌时安放物品不能过挤，不要 直接接触底和箱壁，物品之间留 有空隙。 灭菌时将箱门关紧，接上电源 ，先将排气孔打开约30min，排 除灭菌器中的冷空气，温度升 至160调节指示灯，维持1.5 2h。 灭菌完毕后或升温过程中，须 在60以下才能打开箱门。 (5)手提式高压锅或立式压力 蒸汽灭菌器的使用步骤 手提式高压锅在主体内加入3l 清水，立式高压锅加水16l(重 复使用时应将水量补足，水变 混浊需更换) 。 手提式压力锅将顶盖上的排气 管插入消毒桶内壁的方管中( 无软管或软管锈蚀破裂的灭菌 器不得使用) 。 盖好顶盖拧紧，勿使漏气； 置灭菌器于火源上加热，立 式压力锅通上电源，并打开 顶盖上的排气阀放出冷气(水 沸腾后排气1015min) 。 关闭排气阀，使蒸汽压上升 到规定要求，并维持规定时 间(按灭菌物品性质与有关情 况而定) 。 达到规定时间后，对需干燥 的物品，立即打开排气阀排出 蒸汽，待压力恢复到零时，自 然冷却至60后开盖取物，如 为液体物品，不要打开排气阀 ，而应立即将锅去除热源，待 自然冷却，压力恢复至零，温 度降到60以下再开盖取物， 以防突然减压，液体剧烈沸腾 或容器爆破。 (6)卧式压力锅蒸汽灭菌器的 使用步骤 关紧锅门，打开进气阀，将蒸 汽引入夹层进行预热，夹层内 冷空气经阻气器自动排出。 夹层达到预定温度后，打开锅 室进气阀，将蒸汽引入锅室， 锅室内冷空气经锅室阻气器自 动排出. 待锅室达到规定的压力与温 度时，调节进气阀，保持 103.4kpa、1211530min 灭菌。 自然或人工降温至60再开 门取物，不得使用快速排出 蒸汽法，以防突然降压，液 体剧烈沸腾或容器爆破。 使用自动程序控制式压力蒸 汽灭菌器，在放好物品关紧门 后，应根据物品类别按动相应 开关，以便按要求程序自动进 行灭菌，灭菌时必须利用附设 仪表记录温度与时间以备查， 操作要求应严格按照厂家说明 书进行。 2间歇灭菌方法 (1)灭菌方法 是利用不加压力的蒸汽灭菌， 某些物质经高压蒸汽灭菌容易破坏 ，可用此法灭菌。 (2)血清凝固器使用方法 培养基中含有血清或鸡蛋特殊 成分时，因高热会破坏其营养成分 ，故用低温，可使用血清凝固，又 可达到灭菌目的，在使用该法灭菌 的血清等分装时，需严格遵守无菌 操作，试管、平皿也经灭菌后使用 。 (3) 煮沸消毒 (4)灭菌后处理 灭菌后物品，按正常情况已